刺(ci)囊(nang)毛(mao)黴菌

刺(ci)囊(nang)毛(mao)黴菌

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實驗內容(rong):

1.稱量>溶化→調pH >)過濾(lv)>分(fen)裝>加(jia)塞(sai)>包紮>滅(mie)菌>無(wu)菌檢(jian)查

2.幹熱滅(mie)菌:裝(zhuang)入(ru)待(dai)滅(mie)菌物(wu)品(pin)升溫(wen)>恒溫(wen)>降溫(wen)>開(kai)箱(xiang)取物(wu)

3.高(gao)壓蒸(zheng)汽滅(mie)菌加(jia)水(shui)>裝物(wu)品(pin)>加(jia)蓋(gai)>加(jia)熱>排(pai)冷空(kong)氣(qi)+加(jia)壓(ya)>恒壓>降(jiang)壓(ya)回(hui)零(ling)》排(pai)汽>取物(wu). >無(wu)菌檢(jian)查

4.過濾(lv)除菌:組(zu)裝(zhuang)滅(mie)菌>連(lian)接→壓(ya)濾(lv)>無菌檢(jian)查>清(qing)洗滅(mie)菌

低溫(wen)存(cun)法(fa):

公司產品(pin)僅用(yong)於(yu)科(ke)研

①簡單(dan)保(bao)存(cun)法(fa),將瓊(qiong)脂斜面孢子培養物、菌絲(si)懸浮(fu)液以及(ji)由(you)麩(fu)皮(pi)、大米、小米等谷(gu)物(wu)原(yuan)料(liao)制成的(de)孢(bao)子培養物置(zhi)於(yu)4℃冰箱(xiang)保存(cun),保(bao)存(cun)時間不(bu)超(chao)過1 ~2個(ge)月(yue)，若將谷(gu)物原(yuan)料(liao)制備(bei)的(de)孢(bao)子瓶抽真(zhen)空(kong)並(bing)在(zai)棉(mian)塞(sai)上(shang)浸蠟(la),以隔(ge)絕(jue)外(wai)界空(kong)氣(qi)和(he)水(shui)汽,保持(chi)時間可(ke)達3~ 4個(ge)月(yue);②液氮超(chao)di溫(wen)保存(cun)法(fa),將生長(chang)穩定期懸浮(fu)在(zai)10%甘油(you)或(huo)其他低冰(bing)點(dian)液體中,密封(feng)於(yu)安(an)瓿管(guan)內，然(ran)後控(kong)制冷卻(que)速(su)度,使安(an)瓿管(guan)溫(wen)度逐(zhu)步(bu)下降至(zhi)-35℃時， 即(ji)可(ke)置(zhi)於(yu)-150 ~-196℃的(de)液(ye)氮罐中保(bao)存(cun)。大多數微(wei)生物(wu)如(ru)病(bing)毒(du)、噬(shi)菌體(ti)、多種細菌、放線菌、酵(jiao)母和(he)原(yuan)蟲(chong)、特別是(shi)壹(yi)些用冷(leng)凍幹(gan)燥(zao)法(fa)有(you)困(kun)難(nan)的(de)微(wei)生物(wu),都可(ke)用此(ci)法(fa)長(chang)期保存(cun)。

微(wei)生物(wu)菌種的(de)培養:

刺(ci)囊(nang)毛(mao)黴菌

1孢(bao)子制備(bei)

(1)放線菌孢(bao)子的(de)制備(bei)

壹般采(cai)用瓊(qiong)脂斜面培養基,培養基中含有(you)壹(yi)些適合產孢(bao)子的(de)營(ying)養(yang)成分(fen),如(ru)麩(fu)皮(pi)、豌豆(dou)浸汁(zhi)、蛋(dan)白(bai)腖(dong)和(he)壹些無機鹽(yan)等。碳源和(he)氮源不(bu)要太豐(feng)富（碳源約為1%,氮源不(bu)超(chao)過0.5%),碳源豐(feng)富容(rong)易造成生理(li)酸(suan)性的(de)營(ying)養(yang)環(huan)境(jing),不(bu)利(li)於(yu)放線菌孢(bao)子的(de)形成，氮源豐(feng)富則有(you)利(li)於(yu)菌絲(si)繁殖而不(bu)利(li)於(yu)孢子形成。壹般情(qing)況下(xia)， 幹燥和(he)限制營養(yang)可(ke)直接或(huo)間(jian)接誘(you)導(dao)孢子形成。放線菌斜(xie)面的(de)培

養(yang)溫(wen)度大多數為28℃,少數為37 ℃,培養時間為5~ 14天。

(2)黴菌孢(bao)子的(de)制備(bei)

黴菌的(de)孢(bao)子培養,壹(yi)般以大米、 小米、玉米、麩(fu)皮(pi)、麥(mai)粒等天然(ran)農產品(pin)為培養基。這(zhe)是(shi)由(you)於(yu)這(zhe)些農產品(pin)中的(de)營(ying)養(yang)成分(fen)較適合黴菌的(de)孢(bao)子繁(fan)殖，而且這(zhe)類(lei)培養基的(de)表(biao)面積(ji)較(jiao)大，可(ke)獲得(de)大量的(de)孢(bao)子。黴菌的(de)培養-般為25~ 28 ℃,培養時間為4~ 14天。

2種子制備(bei)

(1)搖(yao)瓶種子制備(bei)

搖(yao)瓶種子進罐(guan),常采(cai)用母瓶、子瓶兩(liang)級(ji)培養,有(you)時母瓶種子也(ye)可(ke)以直(zhi)接進罐(guan)。種子培養基要求比(bi)較豐(feng)富,並(bing)易被(bei)菌體(ti)分(fen)解(jie)利(li)用，氮源豐(feng)富有(you)利(li)於(yu)菌絲(si)生長(chang)。原(yuan)則上(shang)各種營養(yang)成分(fen)不(bu)宜(yi)過濃,子瓶培養基濃度比母瓶略(lve)高(gao),更接近(jin)種子罐(guan)的(de)培養基配方(fang)。

(2)種子罐(guan)種子制備(bei)

種子罐(guan)種子制備(bei)的(de)工(gong)藝過程(cheng),因菌種不(bu)同(tong)而異，壹(yi)般可(ke)分(fen)為壹級種子、 二級(ji)種子和(he)三級(ji)種子的(de)制備(bei)。孢(bao)子(或(huo)搖(yao)瓶菌絲(si))被(bei)接入(ru)到體積(ji)較(jiao)小的(de)種子罐(guan)中,經培養後形成大量的(de)菌絲(si)，這(zhe)樣(yang)的(de)種子稱為壹(yi)級種子， 把(ba)壹級種子轉(zhuan)入發(fa)酵(jiao)罐內發(fa)酵(jiao)，稱為二(er)級發(fa)酵(jiao)。如(ru)果將壹(yi)級(ji)種子接入(ru)體積(ji)較(jiao)大的(de)種子罐(guan)內,經過培養形成更多的(de)菌絲(si),這(zhe)樣(yang)制備(bei)的(de)種子稱為二(er)級種子，將(jiang)二級種子轉(zhuan)入發(fa)酵(jiao)罐內發(fa)酵(jiao)稱為三(san)級發(fa)酵(jiao)。同(tong)樣道(dao)理,使用三級(ji)種子的(de)發(fa)酵(jiao),稱為四級發(fa)酵(jiao)。

脫水(shui)存(cun)法(fa):

①沙(sha)土保(bao)存(cun)法(fa),能產孢(bao)子的(de)細菌、放線菌及(ji)黴菌可(ke)采(cai)用此(ci)法(fa)保(bao)存(cun)，即將沙和(he)土以3:2比例(li)混合經稀酸(suan)處理(li)洗凈(jing)過篩,裝(zhuang)入小試管(guan)內裝(zhuang)置(zhi)高(gao)度為1cm滅(mie)菌2~ 3次,烘幹(gan)後即(ji)可(ke)將在(zai)斜(xie)面培養基上(shang)生長(chang)良(liang)好(hao)的(de)孢(bao)子,用無(wu)菌蒸(zheng)餾水(shui)2~ 2.5m制成孢子懸液，吸(xi)取(qu)少許(xu)加(jia)入(ru)沙(sha)土(tu)管(guan)中,經真(zhen)空(kong)抽幹,外(wai)觀呈(cheng)松散(san)狀(zhuang)態,於(yu)4℃冰箱(xiang)保存(cun),保(bao)存(cun)期可(ke)達5 ~7年(nian)。

②冷凍幹燥(zao)法(fa),將孢子懸浮(fu)液與(yu)保(bao)護(hu)劑(ji)相(xiang)混(hun)合, 放在(zai)安(an)瓿管(guan)內於(yu)-20 -30℃的(de)乙(yi)醇(chun)浴(yu)中速(su)凍。然(ran)後,在(zai)低溫(wen)下用真(zhen)空(kong)泵抽幹(gan),用幹(gan)冰使水(shui)汽結凍,熔封(feng)安(an)瓿管(guan),於(yu)低溫(wen)下保存(cun)。保(bao)存(cun)期可(ke)達5~ 10年(nian)之久。

③石(shi)蠟(la)油(you)封(feng)存(cun)法(fa),在(zai)斜(xie)面菌種培養物上(shang),倒上(shang)滅(mie)菌後(hou)的(de)石(shi)蠟(la)油(you),高(gao)出(chu)斜面1cm,於(yu)4℃冰箱(xiang)或(huo)低溫(wen)幹燥處保(bao)存(cun)，此(ci)法(fa)不(bu)適(shi)用於(yu)能利用(yong)石(shi)蠟(la)油(you)作碳源的(de)微(wei)生物(wu)，保存(cun)期為壹年(nian)以上(shang)。

菌種的(de)具體保(bao)存(cun)方(fang)法(fa)

   微(wei)生物(wu)具有(you)容(rong)易變(bian)異的(de)特(te)性(xing)，因此，在(zai)保(bao)藏過程(cheng)中，必須(xu)使微(wei)生物(wu)的(de)代(dai)謝處(chu)於(yu)不(bu)活躍(yue)或(huo)相(xiang)對(dui)靜(jing)止的(de)狀(zhuang)態，才能在(zai)壹(yi)定(ding)的(de)時間內使其不(bu)發(fa)生變(bian)異而又保(bao)持(chi)生活能力。

低溫(wen)、幹燥和(he)隔絕(jue)空(kong)氣(qi)是(shi)使微(wei)生物(wu)代(dai)謝能力降(jiang)低的(de)重(zhong)要因素，所以，菌種保藏方(fang)法(fa)雖(sui)多，但(dan)都是(shi)根據這(zhe)三(san)個(ge)因素而設計(ji)的(de)。

菌種保(bao)藏方(fang)法(fa)大致可(ke)分(fen)為以下(xia)幾(ji)種：

1．傳(chuan)代(dai)培養保藏法(fa)又(you)有(you)斜(xie)面培養、穿刺(ci)培養、皰肉培養基培養等（後者作(zuo)保藏厭(yan)氧(yang)細菌用(yong)），培養後於(yu)4—6℃冰箱(xiang)內保(bao)存(cun)。

2．覆蓋保(bao)藏法(fa)是(shi)傳(chuan)代(dai)培養的(de)變(bian)相(xiang)方(fang)法(fa)，能夠適(shi)當(dang)延長(chang)保(bao)藏時間，它是(shi)在(zai)斜(xie)面培養物和(he)穿刺(ci)培養物上(shang)面覆蓋滅(mie)菌，壹(yi)方(fang)面可(ke)防止因培養基水(shui)分(fen)蒸發(fa)而引起(qi)菌種死(si)亡(wang)，另(ling)壹(yi)方(fang)面可(ke)阻止氧(yang)氣(qi)進入(ru)，以減(jian)弱(ruo)代(dai)謝作(zuo)用。

   載體(ti)保(bao)藏法(fa)是(shi)將(jiang)微(wei)生物(wu)吸(xi)附在(zai)適(shi)當(dang)的(de)載體(ti)，如(ru)土(tu)壤(rang)、沙(sha)子、矽(gui)膠(jiao)、濾(lv)紙上(shang)，而後進行(xing)幹燥(zao)的(de)保(bao)藏法(fa)，例(li)如(ru)沙(sha)土(tu)保(bao)藏法(fa)和(he)濾(lv)紙保藏法(fa)應(ying)用相(xiang)當(dang)廣泛。

   寄主保(bao)藏法(fa)用(yong)於(yu)目(mu)前(qian)尚不(bu)能在(zai)人(ren)工(gong)培養基上(shang)生長(chang)的(de)微(wei)生物(wu)，如(ru)病(bing)毒(du)、立(li)克次氏體(ti)、螺(luo)旋體等(deng)，它們必須(xu)在(zai)生活的(de)動(dong)物、昆(kun)蟲(chong)、雞胚內感(gan)染(ran)並(bing)傳(chuan)代(dai)，此法(fa)相(xiang)當(dang)於(yu)壹般微(wei)生物(wu)的(de)傳(chuan)代(dai)培養保藏法(fa)。病(bing)毒(du)等(deng)微(wei)生物(wu)亦可(ke)用其他方(fang)法(fa)如(ru)液(ye)氮保藏法(fa)與(yu)冷(leng)凍(dong)幹(gan)燥(zao)保(bao)藏法(fa)進行(xing)保藏。

5．冷凍保(bao)藏法(fa)可(ke)分(fen)低溫(wen)冰箱(xiang)（-20—-30℃，-50—-80℃）、幹(gan)冰(bing)酒精(jing)快(kuai)速(su)凍結（約-70℃）和(he)液氮（-196℃）等(deng)保藏法(fa)。

冷(leng)凍幹(gan)燥(zao)保(bao)藏法(fa)先(xian)使微(wei)生物(wu)在(zai)極(ji)低溫(wen)度（-70℃左右）下(xia)快(kuai)速(su)冷凍(dong)，然(ran)後在(zai)減(jian)壓(ya)下(xia)利(li)用升華現象除去水(shui)分(fen)（真(zhen)空(kong)幹燥）。

我司(si)在(zai)重(zhong)視產品(pin)質(zhi)量的(de)同(tong)時，也(ye)建立了壹套(tao)集(ji)技(ji)術支持(chi)、物流(liu)、售後(hou)服務(wu)等多個(ge)部門的(de)服(fu)務(wu)體系(xi)，努力(li)把(ba)我們(men)方(fang)便、快(kuai)捷(jie)、周到的(de)服(fu)務(wu)提供(gong)給每壹個(ge)客(ke)戶(hu)。