羥脯氨酸(suan)（Hyp）ELISA檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒@免(mian)費代測

檢測原理(li)

試(shi)劑(ji)盒采(cai)用雙抗體(ti)壹步夾心法酶聯(lian)免(mian)疫(yi)吸(xi)附試(shi)驗(yan)（ELISA）。往(wang)預先(xian)包被(bei)羥脯氨酸(suan)（Hyp）抗體(ti)的(de)包(bao)被(bei)微(wei)孔中，依次加(jia)入(ru)標(biao)本(ben)、標(biao)準(zhun)品、HRP標(biao)記的(de)檢(jian)測抗體(ti)，經(jing)過(guo)溫(wen)育並(bing)徹(che)di洗(xi)滌(di)。用底物TMB顯色，TMB在過(guo)氧(yang)化(hua)物酶的(de)催(cui)化(hua)下轉化(hua)成藍色(se)，並(bing)在酸(suan)的(de)作(zuo)用下轉化(hua)成最(zui)終的(de)黃(huang)色。顏(yan)色的(de)深(shen)淺(qian)和(he)樣(yang)品中(zhong)的(de)羥脯氨酸(suan)（Hyp）呈正相(xiang)關(guan)。用酶標(biao)儀(yi)在450nm 波長下測定吸(xi)光(guang)度(du)（OD 值(zhi)），計算樣(yang)品(pin)濃(nong)度。

樣品收(shou)集(ji)、處理(li)及保存方法

1.  血清：使(shi)用(yong)不(bu)含熱原和(he)內(nei)毒(du)素的(de)試(shi)管，操作(zuo)過程(cheng)中(zhong)避免(mian)任(ren)何細(xi)胞(bao)刺(ci)激，收(shou)集(ji)血液(ye)後，3000轉(zhuan)離心10分鐘將血(xue)清和(he)紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速(su)小(xiao)心地(di)分(fen)離。

2.  血漿：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽或肝(gan)素抗凝(ning)。3000轉(zhuan)離心30分鐘取(qu)上清。

3.  細(xi)胞(bao)上清液(ye)：3000轉離心10分鐘去除(chu)顆(ke)粒和(he)聚(ju)合物。

4.  組織勻漿：將(jiang)組(zu)織加入(ru)適量(liang)生理鹽水(shui)搗(dao)碎。3000轉(zhuan)離心10分鐘取(qu)上清。

5.  保存：如果樣(yang)本收(shou)集(ji)後不(bu)及時檢測，請按(an)壹(yi)次用(yong)量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存於(yu)-20℃，避免(mian)反(fan)復凍融，在室溫(wen)下解凍並(bing)確(que)保樣品均勻地(di)充(chong)分(fen)解凍。

自備(bei)物品

1. 酶標(biao)儀(yi)（450nm）

2. 高精度加(jia)樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫(wen)箱

操作註(zhu)意事項(xiang)

1.  試(shi)劑(ji)盒保存在2-8℃，使(shi)用(yong)前(qian)室溫(wen)平衡20分鐘。從(cong)冰箱(xiang)取(qu)出的(de)濃(nong)縮洗(xi)滌(di)液會(hui)有結晶，這屬(shu)於(yu)正(zheng)常(chang)現象(xiang)，水(shui)浴(yu)加熱使(shi)結(jie)晶wan全溶(rong)解後再使(shi)用(yong)。

2.  實驗(yan)中不(bu)用的(de)板(ban)條應(ying)立即(ji)放(fang)回(hui)自封(feng)袋(dai)中，密封(feng)（低(di)溫(wen)幹(gan)燥(zao)）保存。

3.  濃(nong)度為(wei)0的(de)S0號(hao)標(biao)準(zhun)品即(ji)可視為(wei)陰(yin)性(xing)對(dui)照或者(zhe)空(kong)白；按照說明書操作時樣本已(yi)經(jing)稀釋5倍(bei)，最(zui)終結果乘以5才(cai)是樣(yang)本(ben)實(shi)際濃(nong)度。

4.  嚴格(ge)按(an)照(zhao)說(shuo)明書中標(biao)明的(de)時間、加(jia)液(ye)量(liang)及順序(xu)進(jin)行(xing)溫(wen)育操作。

5.  所有液體(ti)組分使(shi)用(yong)前(qian)充分(fen)搖(yao)勻。

試(shi)劑(ji)盒組(zu)成

註(zhu)：標(biao)準(zhun)品（S0-S5）濃(nong)度依次為(wei)：0、50、100、200、400、800μmol/L

試(shi)劑(ji)的(de)準(zhun)備(bei)

20×洗滌(di)緩沖液的(de)稀釋：蒸(zheng)餾水(shui)按(an)1：20稀釋，即(ji)1份(fen)的(de)20×洗(xi)滌(di)緩沖液加(jia)19份的(de)蒸(zheng)餾水(shui)。

洗板方法

1.  手(shou)工(gong)洗(xi)板：甩(shuai)盡(jin)孔內液體(ti)，每孔加滿(man)洗滌(di)液，靜(jing)置(zhi)1min後甩(shuai)盡(jin)孔內液體(ti)，在吸(xi)水(shui)紙上拍幹(gan)，如此洗(xi)板5次。

2.  自動洗(xi)板(ban)機(ji)：每(mei)孔註(zhu)入(ru)洗液(ye)350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟(zhou)

1.  從(cong)室溫(wen)平衡20min後的(de)鋁箔袋(dai)中取(qu)出所(suo)需板(ban)條，剩(sheng)余(yu)板條(tiao)用自(zi)封(feng)袋(dai)密封(feng)放回(hui)4℃。

2.  設置(zhi)標(biao)準(zhun)品孔和(he)樣(yang)本孔，標(biao)準(zhun)品孔各加不同(tong)濃(nong)度的(de)標(biao)準(zhun)品50μL；

3.  樣本孔先加待(dai)測樣(yang)本10μL，再加樣本稀釋液(ye)40μL；空(kong)白孔不加。

4.  除(chu)空(kong)白孔外(wai)，標(biao)準(zhun)品孔和(he)樣(yang)本孔中每孔加入(ru)辣根(gen)過(guo)氧(yang)化(hua)物酶（HRP）標(biao)記的(de)檢(jian)測抗體(ti)100μL，用封(feng)板膜(mo)封(feng)住反(fan)應(ying)孔，37℃水(shui)浴(yu)鍋或恒(heng)溫(wen)箱溫(wen)育60min。

5.  棄去液體(ti)，吸(xi)水(shui)紙上拍幹(gan)，每孔加滿(man)洗滌(di)液，靜(jing)置(zhi)1min，甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液，吸(xi)水(shui)紙上拍幹(gan)，如此重(zhong)復洗板5次（也(ye)可用洗板機(ji)洗(xi)板(ban)）。

6.  每孔加入(ru)底物A、B各50μL，37℃避光(guang)孵育(yu)15min。

7.  每孔加入(ru)終止(zhi)液(ye)50μL，15min內，在450nm波(bo)長處測定各(ge)孔的(de)OD值(zhi)。

結果判(pan)斷

繪制(zhi)標(biao)準(zhun)曲線(xian)：在Excel工(gong)作(zuo)表(biao)中(zhong)，以標(biao)準(zhun)品濃(nong)度作(zuo)橫(heng)坐(zuo)標(biao)，對(dui)應(ying)OD值作(zuo)縱坐(zuo)標(biao)，繪制(zhi)出標(biao)準(zhun)品線(xian)性(xing)回(hui)歸(gui)曲線(xian)，按(an)曲(qu)線(xian)方程(cheng)計算各(ge)樣(yang)本濃(nong)度值(zhi)。

試(shi)劑(ji)盒性(xing)能(neng)

1. 準確性(xing)：標(biao)準(zhun)品線(xian)性(xing)回(hui)歸(gui)與預期(qi)濃(nong)度相(xiang)關(guan)系數R值，大於(yu)等(deng)於(yu)0.9900。

2. 靈敏度(du)：最(zui)di檢(jian)測濃(nong)度小(xiao)於(yu)1.0μmol/L。

3. 特異(yi)性(xing)：不(bu)與其(qi)它(ta)可溶性(xing)結(jie)構(gou)類似(si)物交(jiao)叉反(fan)應(ying)。

4. 重復性(xing)：板(ban)內、板間變(bian)異(yi)系數均小(xiao)於(yu)15%。

5. 貯(zhu)藏：2-8℃，避光(guang)防潮(chao)保存。

6. 有效期(qi)：6個(ge)月(yue)

免責聲明

1.  試(shi)劑(ji)盒僅(jin)供研究(jiu)使(shi)用(yong)，不(bu)得用於(yu)臨(lin)床實(shi)驗(yan)或人(ren)體(ti)實驗(yan)，否則所(suo)產(chan)生的(de)壹(yi)切後(hou)果(guo)，由實驗(yan)者(zhe)承(cheng)擔(dan)，本(ben)公(gong)司(si)概不負責。

2.  嚴格(ge)按(an)照(zhao)說(shuo)明書操作，實(shi)驗(yan)者(zhe)違(wei)反(fan)說(shuo)明書操作，後(hou)果(guo)由實驗(yan)者(zhe)承(cheng)擔(dan)。