人(ren)絕經尿(niao)促性腺素（HMG） ELISA檢(jian)測(ce)試劑盒說(shuo)明

檢(jian)測(ce)原理

試(shi)劑盒采(cai)用(yong)雙(shuang)抗體壹步夾心(xin)法酶(mei)聯免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)試(shi)驗(yan)（ELISA）。往預(yu)先包(bao)被(bei)絕經尿(niao)促性腺素（HMG）抗體的包(bao)被(bei)微(wei)孔(kong)中(zhong)，依次加(jia)入標(biao)本、標準品、HRP標(biao)記(ji)的檢(jian)測(ce)抗體，經過(guo)溫(wen)育並(bing)徹di洗(xi)滌。用(yong)底(di)物(wu)TMB顯色(se)，TMB在(zai)過(guo)氧化物酶(mei)的催(cui)化下轉(zhuan)化成(cheng)藍(lan)色，並在(zai)酸(suan)的作(zuo)用(yong)下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)最(zui)終(zhong)的黃色。顏(yan)色的深(shen)淺(qian)和(he)樣品中(zhong)的絕經尿(niao)促性腺素（HMG）呈(cheng)正(zheng)相(xiang)關。用(yong)酶(mei)標(biao)儀(yi)在450nm 波長下測(ce)定吸光度(du)（OD 值(zhi)），計算樣品濃度(du)。

樣品收集、處(chu)理及(ji)保(bao)存方(fang)法

1.  血(xue)清(qing)：使用(yong)不含熱(re)原(yuan)和(he)內毒(du)素的試(shi)管(guan)，操作(zuo)過(guo)程中(zhong)避免(mian)任(ren)何(he)細胞(bao)刺激，收集血液後，3000轉離心(xin)10分鐘將(jiang)血(xue)清(qing)和(he)紅細胞(bao)迅(xun)速小(xiao)心地分離。

2.  血(xue)漿：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或肝(gan)素抗凝(ning)。3000轉離(li)心30分鐘取(qu)上(shang)清(qing)。

3.  細胞(bao)上清(qing)液：3000轉離心10分鐘去(qu)除(chu)顆粒(li)和(he)聚合(he)物(wu)。

4.  組(zu)織(zhi)勻(yun)漿：將(jiang)組(zu)織(zhi)加(jia)入適(shi)量生(sheng)理鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。3000轉(zhuan)離(li)心10分鐘取(qu)上(shang)清(qing)。

5.  保(bao)存：如(ru)果樣(yang)本收集後不及(ji)時檢(jian)測(ce)，請按壹次用(yong)量分裝，凍存於-20℃，避免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)，在室(shi)溫(wen)下(xia)解凍並(bing)確保(bao)樣(yang)品均(jun)勻(yun)地充分解凍(dong)。

自備物(wu)品

1. 酶(mei)標(biao)儀(yi)（450nm）

2. 高精(jing)度(du)加(jia)樣器(qi)及(ji)槍(qiang)頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫箱

操作(zuo)註意(yi)事項

1.  試(shi)劑(ji)盒保(bao)存在2-8℃，使用(yong)前室溫(wen)平(ping)衡20分鐘。從(cong)冰(bing)箱取出(chu)的濃縮(suo)洗(xi)滌液會有結晶，這(zhe)屬(shu)於(yu)正(zheng)常現象，水(shui)浴(yu)加(jia)熱使結晶wan全(quan)溶(rong)解(jie)後(hou)再(zai)使用(yong)。

2.  實(shi)驗(yan)中(zhong)不用(yong)的板(ban)條(tiao)應立(li)即放回自封袋中(zhong)，密封(feng)（低溫幹(gan)燥(zao)）保(bao)存。

3.  濃度(du)為0的S0號(hao)標(biao)準品即可視為(wei)陰(yin)性對(dui)照或者空(kong)白；按照說明書(shu)操作(zuo)時(shi)樣本已經稀(xi)釋5倍，最(zui)終(zhong)結果(guo)乘(cheng)以5才是樣(yang)本實際濃度(du)。

4.  嚴格(ge)按照說明書(shu)中(zhong)標(biao)明(ming)的時(shi)間(jian)、加(jia)液量及順(shun)序進行溫育操作(zuo)。

5.  所(suo)有液體組分使用(yong)前充分搖(yao)勻(yun)。

試劑盒(he)組成(cheng)

註：標準(zhun)品（S0-S5）濃度(du)依次為：0、3、6、12、24、48 mIU/ml

試(shi)劑(ji)的準(zhun)備

20×洗(xi)滌緩沖(chong)液的稀(xi)釋：蒸餾(liu)水按(an)1：20稀(xi)釋，即1份(fen)的20×洗(xi)滌緩沖(chong)液加(jia)19份(fen)的蒸餾(liu)水。

洗(xi)板(ban)方(fang)法

1.  手(shou)工(gong)洗(xi)板(ban)：甩(shuai)盡(jin)孔(kong)內液體，每孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌液，靜置1min後(hou)甩盡孔(kong)內液體，在吸水(shui)紙(zhi)上(shang)拍幹(gan)，如(ru)此洗(xi)板(ban)5次。

2.  自動洗(xi)板(ban)機(ji)：每孔(kong)註入洗(xi)液350μL，浸泡1min，洗(xi)板(ban)5次。

操作(zuo)步(bu)驟

1.  從室溫(wen)平衡20min後(hou)的鋁(lv)箔(bo)袋中(zhong)取(qu)出(chu)所(suo)需板(ban)條(tiao)，剩(sheng)余板(ban)條(tiao)用(yong)自封袋密封(feng)放回4℃。

2.  設置標(biao)準(zhun)品孔(kong)和(he)樣本孔(kong)，標(biao)準品孔(kong)各(ge)加(jia)不同濃度(du)的標(biao)準(zhun)品50μL；

3.  樣(yang)本孔(kong)先(xian)加(jia)待測(ce)樣本10μL，再(zai)加(jia)樣本稀(xi)釋液40μL；空(kong)白孔(kong)不加(jia)。

4.  除空(kong)白孔(kong)外(wai)，標(biao)準(zhun)品孔(kong)和(he)樣本孔(kong)中(zhong)每(mei)孔(kong)加(jia)入辣(la)根(gen)過氧化(hua)物(wu)酶(mei)（HRP）標(biao)記(ji)的檢(jian)測(ce)抗體100μL，用(yong)封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)住(zhu)反應孔(kong)，37℃水(shui)浴鍋或恒(heng)溫箱溫育60min。

5.  棄(qi)去液體，吸水紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹(gan)，每孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌液，靜置1min，甩(shuai)去洗(xi)滌液，吸水紙上(shang)拍(pai)幹(gan)，如(ru)此重復(fu)洗(xi)板(ban)5次（也可用(yong)洗(xi)板(ban)機(ji)洗(xi)板(ban)）。

6.  每(mei)孔(kong)加(jia)入底(di)物(wu)A、B各(ge)50μL，37℃避光(guang)孵(fu)育15min。

7.  每(mei)孔(kong)加(jia)入終(zhong)止(zhi)液50μL，15min內，在(zai)450nm波長處(chu)測(ce)定各(ge)孔(kong)的OD值(zhi)。

結果(guo)判斷(duan)

繪(hui)制(zhi)標(biao)準曲(qu)線(xian)：在(zai)Excel工(gong)作(zuo)表(biao)中(zhong)，以標準(zhun)品濃度(du)作(zuo)橫(heng)坐標(biao)，對應OD值(zhi)作(zuo)縱坐標(biao)，繪(hui)制(zhi)出(chu)標準(zhun)品線(xian)性回(hui)歸曲(qu)線(xian)，按(an)曲(qu)線(xian)方(fang)程計算(suan)各(ge)樣本濃度(du)值(zhi)。

試劑盒性能(neng)

1.  準確(que)性(xing)：標(biao)準品線(xian)性回(hui)歸與(yu)預期濃度(du)相(xiang)關系(xi)數R值(zhi)，大於等於0.9900。

2.  靈敏度(du)：最(zui)di檢(jian)測(ce)濃度(du)小(xiao)於1.0 mIU/ml。

3.  特異(yi)性(xing)：不與(yu)其它可溶性(xing)結構(gou)類(lei)似(si)物交叉反(fan)應。

4.  重復(fu)性：板(ban)內、板(ban)間(jian)變(bian)異系(xi)數均(jun)小(xiao)於15%。

5.  貯(zhu)藏：2-8℃，避光(guang)防(fang)潮保(bao)存。

6.  有效(xiao)期：6個(ge)月

免(mian)責(ze)聲(sheng)明(ming)

1.   試(shi)劑(ji)盒僅供(gong)研究(jiu)使用(yong)，不得用(yong)於(yu)臨床(chuang)實(shi)驗(yan)或人(ren)體實驗(yan)，否(fou)則所(suo)產生(sheng)的壹切後果(guo)，由(you)實驗(yan)者承(cheng)擔，本公司概不負(fu)責。

2.   嚴格(ge)按照說明書(shu)操作(zuo)，實(shi)驗(yan)者違(wei)反說(shuo)明書(shu)操作(zuo)，後(hou)果由(you)實驗(yan)者承(cheng)擔。