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          ELISA法是免疫(yi)診(zhen)斷(duan)中(zhong)的壹(yi)項新技術,現(xian)已成功地(di)應(ying)用於(yu)多種(zhong)病(bing)原微生(sheng)物(wu)所(suo)引起(qi)的傳(chuan)染病、寄生(sheng)蟲(chong)病及(ji)非(fei)傳(chuan)染病等(deng)方面(mian)的免疫(yi)診(zhen)斷(duan)。也已應(ying)用於(yu)大分(fen)子抗原和小分(fen)子抗原的定(ding)量測定(ding),根(gen)據已經使(shi)用(yong)的(de)結(jie)果(guo),認為ELISA法具有(you)靈(ling)敏(min)、特異、簡(jian)單(dan)、快速(su)、穩定及易於(yu)自(zi)動(dong)化(hua)操(cao)作等(deng)特點(dian)。不(bu)僅適(shi)用(yong)於(yu)臨床標本(ben)的檢(jian)查,而(er)且(qie)由於(yu)壹天(tian)之內可以檢(jian)查幾(ji)百(bai)甚至(zhi)上千(qian)份標本(ben),因(yin)此,也適(shi)合於(yu)血(xue)清流(liu)行病(bing)學(xue)調(tiao)查。本(ben)法不(bu)僅可以用來測定ti,而(er)且(qie)也可用於(yu)測定(ding)體(ti)液中(zhong)的循(xun)環(huan)抗原,所(suo)以也是壹種(zhong)早期(qi)診(zhen)斷(duan)的(de)良好方法。因(yin)此ELISA法在生(sheng)物(wu)醫學(xue)各(ge)領域的(de)應(ying)用範(fan)圍日益(yi)擴(kuo)大(da),

          組(zu)成結(jie)構(gou)

          1、血清:操(cao)作過程(cheng)中避免(mian)任(ren)何細(xi)胞刺(ci)激(ji)。使(shi)用(yong)不(bu)含熱(re)原和內du素的試(shi)管(guan)。收(shou)集(ji)血(xue)液後(hou),1000×g離心(xin)10分(fen)鐘(zhong)將血紅(hong)細胞迅速(su)小心地(di)分(fen)離(li)。

          2、2、血漿:EDTA、檸(ning)檬(meng)suan鹽(yan)、肝素血漿可用於(yu)檢(jian)測(ce)。1000×g離(li)心(xin)30分(fen)鐘(zhong)去除顆(ke)粒。

          3、細胞上清液:1000×g離(li)心10分(fen)鐘(zhong)去除顆(ke)粒和聚(ju)合物(wu)。

          4、組織勻漿:將組織加(jia)入適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽(yan)水搗碎。1000×g離(li)心10分(fen)鐘(zhong),取上清液。

          5、保(bao)存:如(ru)果(guo)樣品(pin)不(bu)立即(ji)使(shi)用(yong),應(ying)將其(qi)分(fen)成小部分(fen)-70℃保(bao)存,避免(mian)反復冷(leng)凍(dong)。盡(jin)可能的(de)不(bu)要(yao)使(shi)用(yong)溶(rong)血(xue)。如果(guo)血清中(zhong)大(da)量顆(ke)粒,檢(jian)測(ce)前(qian)先離心或過濾(lv)。不(bu)要(yao)在37℃或更高(gao)的(de)溫(wen)度加(jia)熱(re)解凍(dong)。應(ying)在室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍(dong)並確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均勻地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍。


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          操(cao)作步(bu)驟:

          1、使(shi)用(yong)前(qian),將所(suo)有(you)試(shi)劑充(chong)分(fen)混(hun)勻。不(bu)要(yao)使(shi)液體(ti)產生大量(liang)的泡沫,以免加(jia)樣時(shi)加(jia)入大(da)量的(de)氣泡,產生加(jia)樣上的誤差。

          2、根(gen)據待(dai)測(ce)樣品(pin)數(shu)量(liang)加(jia)上標準(zhun)品(pin)的數(shu)量(liang)決(jue)定(ding)所(suo)需的(de)板條(tiao)數(shu)。每(mei)個(ge)標準(zhun)品(pin)和空(kong)白(bai)孔建議做復(fu)孔。每(mei)個樣(yang)品(pin)根(gen)據自(zi)己的(de)數(shu)量(liang)來(lai)定(ding),能使(shi)用(yong)復(fu)孔的(de)盡(jin)量做復(fu)孔。

          3、加(jia)入稀釋(shi)好(hao)後的(de)標準(zhun)品(pin)50ul於(yu)反應(ying)孔、加(jia)入待(dai)測(ce)樣品(pin)50ul於(yu)反應(ying)孔內。立即(ji)加(jia)入50ul標記(ji)的(de)抗體(ti)。蓋(gai)上膜(mo)板,輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻,37℃溫(wen)育45分(fen)鐘(zhong)。

          4、甩去孔內液體(ti),每(mei)孔加(jia)滿(man)洗滌(di)液,振(zhen)蕩30秒,甩(shuai)去洗滌液,用(yong)吸水紙(zhi)拍幹。重復此(ci)操(cao)作4次。如果(guo)用洗(xi)板機洗(xi)滌,洗滌次數(shu)增(zeng)加(jia)壹次。

          5、每孔加(jia)入100ul的(de)親和(he)鏈(lian)酶(mei)素-HRP,輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻,37℃溫(wen)育30分(fen)鐘(zhong)。

          6、甩去孔內液體(ti),每(mei)孔加(jia)滿(man)洗滌(di)液,振(zhen)蕩30秒,甩(shuai)去洗滌液,用(yong)吸水紙(zhi)拍幹。重復此(ci)操(cao)作4次。如果(guo)用洗(xi)板機洗(xi)滌,洗滌次數(shu)增(zeng)加(jia)壹次。

          7、每孔加(jia)入底(di)物(wu)A、B各50ul,輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻,37℃溫(wen)育5分(fen)鐘(zhong)。避免(mian)光(guang)照。

          8、取出酶(mei)標板,迅速(su)加(jia)入50ul終(zhong)止液,加(jia)入終(zhong)止液後(hou)應(ying)立即(ji)測(ce)定結(jie)果(guo)。

          9、在450nm波(bo)長(chang)處測(ce)定(ding)各(ge)孔的(de)OD值。

          操(cao)作註意(yi)事項:

          1、試(shi)劑應(ying)按(an)標簽說明(ming)書(shu)儲(chu)存(cun),使(shi)用(yong)前(qian)恢復到室(shi)溫(wen)。稀稀過後(hou)的標準(zhun)品(pin)應(ying)丟棄,不(bu)可保存

          2、實(shi)驗(yan)中(zhong)不(bu)用的(de)板條(tiao)應(ying)立即(ji)放(fang)回包裝袋(dai)中,密封(feng)保(bao)存(cun),以免變質。

          3、不(bu)用的(de)其(qi)它試(shi)劑應(ying)包裝好或蓋(gai)好。不(bu)同批(pi)號的試(shi)劑不(bu)要(yao)混用。保(bao)質前(qian)使(shi)用(yong)。

          4、使(shi)用(yong)壹(yi)次性的吸頭以免交叉(cha)汙(wu)染,吸取終止(zhi)液和(he)底物(wu)A、B液時(shi),避免(mian)使(shi)用(yong)帶金(jin)屬(shu)部(bu)分(fen)的(de)加(jia)樣器(qi)。

          5、使(shi)用(yong)幹(gan)凈(jing)的塑(su)料(liao)容器(qi)配置(zhi)洗滌液。使(shi)用(yong)前(qian)充(chong)分(fen)混(hun)勻試(shi)劑盒裏的各種(zhong)成份及(ji)樣(yang)品(pin)。

          6、底物(wu)A應(ying)揮(hui)發,避免(mian)長(chang)時間(jian)打開蓋(gai)子。底(di)物(wu)B對光敏(min)感(gan),避免(mian)長(chang)時間(jian)暴露(lu)於(yu)光下(xia)。避免(mian)用(yong)手接觸(chu),有(you)毒(du)。實(shi)驗(yan)完成後應(ying)立即(ji)讀取OD值。

          7、加(jia)入試(shi)劑的(de)順序(xu)應(ying)壹致,以保證(zheng)所(suo)有(you)反應(ying)板孔溫(wen)育的(de)時(shi)間壹(yi)樣。按(an)照說明(ming)書(shu)中標明的時(shi)間、加(jia)液的(de)量及(ji)順序(xu)進行溫(wen)育操(cao)作。

          壹(yi)般來講,96T能檢(jian)測(ce)90個(ge)樣(yang)本(ben),48T能檢(jian)測(ce)42個(ge)樣(yang)本(ben),這裏面(mian)需要(yao)用標樣來做標準(zhun)曲(qu)線(xian),所(suo)以各位需要(yao)做實(shi)驗(yan)的(de)老師(shi)們(men),請在購(gou)買ELISA試(shi)劑盒的(de)時(shi)候註意(yi),需要(yao)做多少個(ge)樣(yang)本(ben),在決(jue)定(ding)買多大(da)規(gui)格(ge)的試(shi)劑盒,以免做實(shi)驗(yan)時(shi)出現試(shi)劑盒不(bu)夠用(yong)或者浪費(fei)!


          煙(yan)草脈帶花葉病毒(du)(TVBMV)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          大(da)腸桿菌(jun)菌(jun)體(ti)蛋(dan)白殘留(liu)(E.coli DH-5α)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          麥(mai)膠蛋白(gliadin)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          煙(yan)曲(qu)黴菌(jun)IgG抗體(ti)(AF-IgG)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          苜蓿花(hua)葉病毒(du)(AlMV)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          羧(suo)肽(tai)酶(mei)Y(CY)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          α半(ban)乳糖基抗原酶(mei)(α-Gal)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          番茄黑環(huan)病毒(du)(TBRV)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          口(kou)蹄(ti)疫A型(xing)抗體(ti)(FMD-A-Ab)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          羥胺(an)氧(yang)化(hua)酶(mei)(HAO)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          氨單加(jia)氧酶(mei)(AM)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          亞(ya)硝(xiao)酸還原酶(mei)(NiR)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          硝(xiao)酸(suan)鹽還原酶(mei)(NR)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          黃素單核(he)苷(gan)酸(suan)(FMN)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          誌(zhi)賀(he)樣毒(du)素(SLT)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          大(da)豆球(qiu)蛋(dan)白(bai)(Glycinin)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

          口(kou)蹄(ti)疫O型(xing)抗體(ti)(FMD-O-Ab)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒




























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