植物查(zha)爾酮(tong)異(yi)構酶(mei)（CHI） ELISA檢測試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)

試劑(ji)盒采(cai)用(yong)雙(shuang)抗(kang)體壹(yi)步夾心(xin)法(fa)酶(mei)聯免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)試(shi)驗（ELISA）。往(wang)預(yu)先(xian)包被查(zha)爾酮(tong)異(yi)構酶(mei)（CHI）抗(kang)體的(de)包被微(wei)孔(kong)中，依次加(jia)入標本(ben)、標準品、HRP標記(ji)的(de)檢測抗(kang)體，經過(guo)溫育(yu)並徹di洗滌(di)。用(yong)底(di)物TMB顯(xian)色，TMB在過(guo)氧化物酶(mei)的(de)催化下轉化成藍(lan)色，並在酸(suan)的(de)作用下轉化成最(zui)終的(de)黃色。顏色的(de)深淺(qian)和樣(yang)品(pin)中的(de)查(zha)爾酮(tong)異(yi)構酶(mei)（CHI）呈(cheng)正相(xiang)關(guan)。用酶(mei)標儀在(zai)450nm 波長(chang)下測定吸(xi)光度(du)（OD 值(zhi)），計(ji)算樣(yang)品(pin)活性。

樣(yang)品(pin)收集、處(chu)理及保(bao)存方法(fa)

1.  樣(yang)本(ben)不(bu)能(neng)含疊(die)氮鈉(na)（NaN3），因(yin)為疊(die)氮鈉(na)（NaN3）是辣根過(guo)氧化物酶(mei)（HRP）的(de)抑制劑(ji)。

2.  標本(ben)采(cai)集(ji)後(hou)盡(jin)早(zao)進行提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按(an)相(xiang)關(guan)文(wen)獻進行。

3.  植物萃(cui)取(qu)液(ye)或其(qi)它相(xiang)關(guan)樣(yang)本(ben)：請(qing)1000 x g離(li)心(xin)20分(fen)鐘，取(qu)上(shang)清即(ji)可(ke)檢測。

4.  保存(cun)：如果(guo)樣(yang)本(ben)收集後不(bu)及時檢(jian)測，請(qing)按壹(yi)次用(yong)量分(fen)裝，凍存於-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復凍融，在室溫(wen)下解(jie)凍並確保樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地充(chong)分解(jie)凍。

自備物品(pin)

1. 酶(mei)標儀（450nm）

2. 高(gao)精(jing)度(du)加(jia)樣(yang)器及槍(qiang)頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫箱(xiang)

操作註意(yi)事項

1.  試劑(ji)盒保(bao)存(cun)在2-8℃，使(shi)用前室溫(wen)平(ping)衡(heng)20分(fen)鐘。從(cong)冰(bing)箱(xiang)取(qu)出(chu)的(de)濃縮(suo)洗(xi)滌(di)液(ye)會有結晶(jing)，這屬於正常(chang)現象(xiang)，水浴加(jia)熱(re)使(shi)結晶(jing)wan全溶(rong)解(jie)後(hou)再(zai)使(shi)用。

2.  實驗中不(bu)用的(de)板(ban)條應(ying)立(li)即放(fang)回(hui)自(zi)封袋(dai)中(zhong)，密封(feng)（低(di)溫幹燥）保存。

3.  濃度(du)為(wei)0的(de)S0號標準品即(ji)可(ke)視為陰性(xing)對(dui)照或者(zhe)空白(bai)；按照說(shuo)明(ming)書(shu)操作時樣(yang)本(ben)已經(jing)稀(xi)釋5倍，最(zui)終結(jie)果(guo)乘以(yi)5才(cai)是(shi)樣(yang)本(ben)實際濃度(du)。

4.  嚴格(ge)按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)中(zhong)標明的(de)時間(jian)、加(jia)液(ye)量及順(shun)序進行溫(wen)育(yu)操作。

5.  所(suo)有液(ye)體組(zu)分使(shi)用前充(chong)分(fen)搖勻。

試(shi)劑(ji)盒組(zu)成

註：標準品（S0-S5）濃度(du)依(yi)次為(wei)：0、20、40、80、160、320 U/L

試劑(ji)的(de)準備(bei)

 20×洗滌(di)緩(huan)沖(chong)液(ye)的(de)稀釋(shi)：蒸(zheng)餾(liu)水按1：20稀(xi)釋(shi)，即(ji)1份(fen)的(de)20×洗滌(di)緩(huan)沖(chong)液(ye)加(jia)19份(fen)的(de)蒸(zheng)餾(liu)水。

洗板(ban)方法(fa)

1.  手工(gong)洗(xi)板(ban)：甩(shuai)盡(jin)孔(kong)內液(ye)體，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置1min後甩(shuai)盡(jin)孔(kong)內液(ye)體，在吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹，如此洗(xi)板(ban)5次。

2.  自(zi)動(dong)洗(xi)板(ban)機：每(mei)孔(kong)註入洗液(ye)350μL，浸泡1min，洗(xi)板(ban)5次。

操作步驟(zhou)

1.  從(cong)室溫(wen)平(ping)衡(heng)20min後(hou)的(de)鋁箔袋中取(qu)出(chu)所(suo)需板(ban)條，剩余(yu)板(ban)條用(yong)自封袋密封(feng)放(fang)回4℃。

2.  設置標準品孔(kong)和樣(yang)本(ben)孔(kong)，標準品孔(kong)各加(jia)不(bu)同濃度(du)的(de)標準品50μL；

3.  樣(yang)本(ben)孔(kong)先加(jia)待(dai)測樣(yang)本(ben)10μL，再(zai)加(jia)樣(yang)本(ben)稀釋(shi)液(ye)40μL；空白孔(kong)不(bu)加(jia)。

4.  除(chu)空(kong)白(bai)孔(kong)外，標準品孔(kong)和樣(yang)本(ben)孔(kong)中每孔(kong)加(jia)入辣根過(guo)氧化物酶(mei)（HRP）標記(ji)的(de)檢測抗(kang)體100μL，用封板(ban)膜封住(zhu)反(fan)應(ying)孔(kong)，37℃水浴鍋(guo)或恒(heng)溫箱(xiang)溫(wen)育(yu)60min。

5.  棄去(qu)液(ye)體，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置1min，甩(shuai)去(qu)洗滌(di)液(ye)，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹，如此重(zhong)復洗板(ban)5次（也可(ke)用洗板(ban)機洗(xi)板(ban)）。

6.  每孔(kong)加(jia)入底(di)物A、B各50μL，37℃避(bi)光孵(fu)育(yu)15min。

7.  每孔(kong)加(jia)入終止液(ye)50μL，15min內，在450nm波長(chang)處(chu)測定各孔(kong)的(de)OD值(zhi)。

結果(guo)判斷(duan)

 繪制標準曲(qu)線：在(zai)Excel工(gong)作表(biao)中(zhong)，以(yi)標準品濃度(du)作橫(heng)坐標，對應OD值(zhi)作縱(zong)坐(zuo)標，繪制出(chu)標準品線性(xing)回(hui)歸(gui)曲(qu)線，按(an)曲(qu)線方(fang)程計(ji)算各樣(yang)本(ben)濃度(du)值(zhi)。 

試劑(ji)盒性(xing)能(neng)

1.  準確性：標準品線性(xing)回(hui)歸(gui)與預期(qi)濃度(du)相(xiang)關(guan)系數R值(zhi)，大於(yu)等(deng)於(yu)0.9900。

2.  靈敏(min)度(du)：最(zui)di檢(jian)測濃度(du)小(xiao)於1.0 U/L。

3.  特(te)異(yi)性：不(bu)與其(qi)它可(ke)溶(rong)性(xing)結(jie)構類似物交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)。

4.  重(zhong)復性：板(ban)內、板(ban)間變(bian)異(yi)系數均(jun)小(xiao)於15%。

5.  貯(zhu)藏：2-8℃，避(bi)光防(fang)潮(chao)保存(cun)。

6.  有效(xiao)期(qi)：6個月(yue)

免(mian)責(ze)聲(sheng)明(ming)

1.   試劑(ji)盒僅供研(yan)究(jiu)使(shi)用，不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床(chuang)實驗或人(ren)體實驗，否則所(suo)產生的(de)壹(yi)切(qie)後(hou)果(guo)，由(you)實驗者承擔，本(ben)公司(si)概不(bu)負責。

2.   嚴格(ge)按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)操作，實驗者違(wei)反(fan)說(shuo)明(ming)書(shu)操作，後果(guo)由(you)實驗者承擔。