ELISA試劑(ji)盒實(shi)驗條件的選擇

在(zai)ELISA試劑(ji)盒中，進(jin)行各項實(shi)驗條件的選擇是(shi)很(hen)重(zhong)要(yao)的(de)，其(qi)中包(bao)括(kuo):
（1） 固(gu)相載(zai)體的(de)選擇：許多物質可作為固(gu)相載(zai)體，如(ru)聚(ju)氯乙烯、聚(ju)苯(ben)乙烯、聚(ju)丙(bing)酰胺和纖(xian)維素等(deng)。其(qi)形(xing)式(shi)可以是(shi)凹孔(kong)平板(ban)、試管、珠(zhu)粒等。目前常(chang)用的(de)是(shi)40孔聚(ju)苯(ben)乙烯凹(ao)孔(kong)板(ban)。不管何(he)種(zhong)載(zai)體(ti)，在(zai)使用前(qian)均可進(jin)行篩選：用等(deng)量(liang)抗原包被，在(zai)同(tong)壹(yi)實(shi)驗條件下進(jin)行反應(ying)，觀(guan)察其(qi)顯色(se)反應(ying)是(shi)否均壹(yi)性，據此判(pan)明(ming)其(qi)吸附性能(neng)是(shi)否良好(hao)。
（2） 包被(bei)抗(kang)體(ti)（或抗原）的選擇：將抗(kang)體（或抗(kang)原）吸附在(zai)固(gu)相載(zai)體表(biao)面時(shi)，要(yao)求純(chun)度(du)要好(hao),吸附時(shi)壹(yi)般要求PH在(zai)9.0～9.6之(zhi)間(jian)。吸附溫(wen)度，時(shi)間(jian)及(ji)其(qi)蛋白量(liang)也(ye)有壹(yi)定影響,壹(yi)般多采用4℃ 18～24小時(shi)。蛋(dan)白質包被(bei)的(de)zui適(shi)濃度(du)需進(jin)行滴(di)定：即(ji)用不同的(de)蛋(dan)白質濃度(du)（0.1、1.0和(he)10μg/ml等）進(jin)行包被(bei)後(hou)，在(zai)其(qi)它試驗條件相同(tong)時(shi)，觀(guan)察陽(yang)性(xing)標(biao)本(ben)的OD值。選擇OD值zui大(da)而蛋(dan)白量(liang)zui少(shao)的濃(nong)度(du)。對(dui)於多數蛋(dan)白質來說通(tong)常(chang)為1～10μg/ml。

（3） 酶(mei)標(biao)記(ji)抗體(ti)工(gong)作濃度的選擇：首先(xian)用直(zhi)接(jie)ELISA試劑(ji)盒法進(jin)行初(chu)步(bu)效(xiao)價(jia)的(de)滴(di)定（見酶(mei)標(biao)記(ji)抗體(ti)部份(fen)）。然後(hou)再固(gu)定其(qi)它條件或采取(qu)“方(fang)陣(zhen)法"（包被(bei)物、待(dai)檢(jian)樣(yang)品的(de)參(can)考(kao)品(pin)及(ji)酶(mei)標(biao)記(ji)抗體(ti)分(fen)別(bie)為不同的(de)稀(xi)釋度）在(zai)正式(shi)實(shi)驗系統裏準確地滴(di)定其(qi)工(gong)作濃度。
（4） 酶(mei)的(de)底物及(ji)供氫(qing)體(ti)的(de)選擇：對(dui)供氫(qing)體(ti)的(de)選擇要求(qiu)是(shi)價(jia)廉(lian)、安(an)全、有明顯地(di)顯色(se)反應(ying)，而本(ben)身無(wu)色(se)。有些供氫(qing)體(ti)（如(ru)OPD等）有潛(qian)在(zai)的(de)致(zhi)癌(ai)作用，應(ying)註意防護(hu)。有條件者應(ying)使用不致(zhi)癌(ai)、靈(ling)敏度(du)高的供氫(qing)體(ti)，如(ru)TMB和ABTS是(shi)目前較(jiao)為滿意的供氫(qing)體(ti)。底物作用壹(yi)段時(shi)間(jian)後(hou)，應(ying)加(jia)入(ru)強(qiang)酸(suan)或強堿以終止(zhi)反應(ying)。通(tong)常(chang)底物作用時(shi)間(jian)，以10-30分鐘(zhong)為宜(yi)。底物使用液必(bi)須新(xin)鮮配制，尤其(qi)是(shi)H2O2在(zai)臨(lin)用前(qian)加入(ru)。