熒光(guang)定(ding)量PCR試劑盒的操(cao)作(zuo)步驟(zhou)，快來(lai)學習(xi)下(xia)吧(ba)

　熒光(guang)定(ding)量PCR試劑盒的操(cao)作(zuo)步驟(zhou)：
 

　　1、取(qu)凍(dong)存已(yi)裂(lie)解(jie)的細(xi)胞(bao)，室溫放置5分鐘使(shi)其溶解(jie)。
 

　　2、兩相(xiang)分離每(mei)1ml的TRIZOL試劑裂(lie)解(jie)的樣(yang)品(pin)中加(jia)入(ru)0.2ml的lvfang，蓋緊(jin)管(guan)蓋。手(shou)動(dong)劇(ju)烈振蕩(dang)管(guan)體(ti)15秒後，15到30℃孵育(yu)2到3分鐘。4℃下(xia)12000rpm離心15分鐘。離心後(hou)混(hun)合液體(ti)將分為(wei)下(xia)層的紅(hong)色酚(fen)lvfang相，中(zhong)間層以(yi)及(ji)無色水相上層。RNA全(quan)部(bu)被分配於(yu)水相中。
 

　　3、RNA沈(chen)澱將水相上層轉(zhuan)移(yi)到壹(yi)幹凈(jing)無RNA酶(mei)的離心管(guan)中(zhong)。加等(deng)體(ti)積異(yi)丙(bing)醇混(hun)合以沈(chen)澱其(qi)中(zhong)的RNA，混(hun)勻後(hou)15到30℃孵育(yu)10分鐘後(hou)，於4℃下(xia)12000rpm離心10分鐘。此(ci)時(shi)離心前(qian)不(bu)可(ke)見的RNA沈(chen)澱將在管(guan)底(di)部和側(ce)壁上(shang)形成膠狀沈(chen)澱塊(kuai)。
 

　　4、RNA清(qing)洗移(yi)去(qu)上(shang)清(qing)液，每(mei)1mlTRIZOL試劑裂(lie)解(jie)的樣(yang)品(pin)中加(jia)入(ru)至(zhi)少(shao)1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配(pei)制)，清(qing)洗RNA沈(chen)澱。混(hun)勻(yun)後(hou)，4℃下(xia)7000rpm離心5分鐘。
 

　　5、RNA幹燥(zao)小心(xin)吸去(qu)大部分乙醇溶液，使(shi)RNA沈(chen)澱在室溫空(kong)氣(qi)中幹燥(zao)5-10分鐘。
 

　　6、溶(rong)解(jie)RNA沈(chen)澱溶(rong)解(jie)RNA時(shi)，先(xian)加(jia)入(ru)無RNA酶(mei)的水40μl用槍(qiang)反(fan)復(fu)吹打幾次，使(shi)其溶解(jie)，獲得的RNA溶(rong)液保(bao)存於-80℃待(dai)用。然(ran)後(hou)取(qu)少(shao)量(liang)RNA溶液用TE稀(xi)釋(1:100)後(hou)，讀(du)取(qu)其(qi)在分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)260nm和280nm處的吸收值，測定(ding)RNA溶液 濃(nong)度(du)和純(chun)度(du)。