ELISA試劑盒(he)實(shi)驗(yan)稀釋血清(qing)的步驟

每壹盒ELISA試劑盒(he)裏(li)面都有(you)壹份對應(ying)的說(shuo)明(ming)書，而(er)每壹份說(shuo)明(ming)書裏(li)都會(hui)有寫樣本(ben)和(he)稀釋液的稀釋比(bi)例(li)，為(wei)什麽(me)樣本(ben)都需(xu)要(yao)稀釋呢(ne)?今(jin)天(tian)的文(wen)章(zhang)中，將(jiang)為(wei)您分析：為何(he)ELISA實驗血(xue)清(qing)樣本(ben)都需(xu)要(yao)稀釋?

在ELISA試劑盒(he)實(shi)驗(yan)血清(qing)為什麽(me)要(yao)稀釋？有兩(liang)個(ge)原(yuan)因：
1）競爭(zheng)抑制(zhi)比(bi)較明(ming)顯，應(ying)稀釋競爭(zheng)物(wu)；
2）以(yi)降(jiang)低(di)非(fei)特異性反(fan)應(ying)，使(shi)特異性的抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)反(fan)應(ying)充分體現(xian)出來。血清(qing)稀釋用(yong)普(pu)通的PBS即可，可加(jia)1％的BSA，能有效降低(di)ELISA本底(di)，當(dang)然(ran)如(ru)果(guo)妳嫌(xian)麻(ma)煩(fan)我覺(jiao)得(de)用(yong)生(sheng)理(li)鹽(yan)水替(ti)代(dai)PBS關系也(ye)不大(da)。不(bu)管(guan)妳是(shi)用(yong)直(zhi)接(jie)競爭(zheng)還(hai)是(shi)間(jian)接(jie)競爭(zheng)，血(xue)清(qing)的稀釋倍(bei)數肯定(ding)要(yao)事先確(que)定(ding)，但(dan)也(ye)不用(yong)壹(yi)點(dian)點(dian)，妳做壹個(ge)預試驗即可，選(xuan)擇(ze)OD在1.0左右的稀釋倍(bei)數，即妳的競爭(zheng)ELISA中(zhong)陰(yin)性孔OD在(zai)1.0，這樣作出來的曲線(xian)比(bi)較敏(min)感(gan)。

ELISA試劑盒(he)實(shi)驗(yan)稀釋血清(qing)的步驟：
先把蛋(dan)白(bai)稀釋壹定(ding)的倍(bei)數，比(bi)如(ru)說(shuo)10倍(bei)、20倍(bei)稀釋（這樣可以大(da)體(ti)確(que)定(ding)壹個(ge)參(can)數），將(jiang)抗(kang)原(yuan)進行(xing)壹系列稀釋包(bao)被微(wei)量反(fan)應(ying)板(ban)，再(zai)用(yong)壹(yi)定(ding)稀釋度的陽性參考(kao)血清(qing)和陰(yin)性參考(kao)血清(qing)進行(xing)孵(fu)育(yu)後洗滌，再加(jia)酶(mei)結(jie)合物(wu)進行(xing)反(fan)應(ying)，經(jing)孵(fu)育(yu)洗滌後，加(jia)底(di)物(wu)溶液顯色，終止(zhi)反(fan)應(ying)後分別(bie)測(ce)定(ding)O.D值，選(xuan)擇(ze)O.D值≥1.0的那(na)個(ge)抗(kang)原(yuan)稀釋度為(wei)zui適包(bao)被濃(nong)度(du)。

壹(yi)般(ban)總是(shi)要(yao)選(xuan)擇(ze)那個(ge)O.D值(zhi)稍大(da)於(yu)1.0，而不(bu)選(xuan)擇(ze)小於(yu)1.0的抗(kang)原(yuan)濃度(du)。陰(yin)性參考(kao)血清(qing)O.D值要(yao)求(qiu)<0.1-0.2。也(ye)就是(shi)要(yao)求(qiu)陽性參考(kao)血清(qing)和陰(yin)性參考(kao)血清(qing)的O.D值(zhi)有(you)明(ming)顯差(cha)別(bie)。