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技術(shu)文章/ article
更新(xin)時間:2023-12-18
瀏(liu)覽次(ci)數(shu):1259ELISA(酶聯(lian)免疫(yi)吸(xi)附法(fa))是(shi)壹(yi)種免疫(yi)學檢(jian)測(ce)技(ji)術(shu),廣泛用(yong)於(yu)檢測(ce)各(ge)種生物分(fen)子,如蛋白質(zhi)、細胞(bao)因(yin)子(zi)、激(ji)素(su)等(deng)。在(zai)使用(yong)ELISA試劑(ji)盒(he)進(jin)行檢測(ce)時,正(zheng)確(que)的(de)樣(yang)本處(chu)理方(fang)法(fa)對於(yu)實驗(yan)結(jie)果的(de)準(zhun)確性和可靠性至(zhi)關重要。下(xia)面(mian)是(shi)不同(tong)類(lei)型樣本的(de)處(chu)理方(fang)法(fa):
血(xue)清(qing)樣(yang)本(ben):
收集血(xue)液樣(yang)本後,讓其在(zai)室溫下(xia)自然(ran)凝固(gu)10-20分(fen)鐘(zhong)。
離心(xin)20分(fen)鐘(zhong)(通常在(zai)2000-3000轉/分(fen)),仔細收集上(shang)清(qing)液。
如果出現沈(chen)澱(dian),需要(yao)再次(ci)離心(xin)。
血(xue)清(qing)樣(yang)本(ben)應(ying)在(zai)-20°C或-80°C下(xia)保存(cun),避免反復(fu)凍融(rong)。
血(xue)漿(jiang)樣本(ben):
根據(ju)標本要(yao)求(qiu)選擇合(he)適(shi)的(de)抗(kang)凝劑(ji)(如EDTA或(huo)檸檬(meng)酸鈉(na))。
混合(he)抗(kang)凝劑(ji)和血(xue)液樣(yang)本10-20分(fen)鐘(zhong)後離心(xin),同(tong)血(xue)清(qing)樣(yang)本(ben)壹(yi)樣(yang)收集上(shang)清(qing)。
同(tong)樣(yang)需要(yao)避免溶血(xue)和高血(xue)脂(zhi),並在(zai)低溫下(xia)保存(cun)。
尿(niao)液樣(yang)本:
用無(wu)菌管收集尿(niao)液樣(yang)本,離心(xin)20分(fen)鐘(zhong)。
收集上(shang)清(qing)液,如果出現沈(chen)澱(dian)則(ze)再次(ci)離心(xin)。
尿(niao)液樣(yang)本的(de)處(chu)理和保存方(fang)法(fa)與(yu)血(xue)清(qing)、血(xue)漿(jiang)類(lei)似(si)。
細胞(bao)培(pei)養上(shang)清(qing):
收集細(xi)胞(bao)培(pei)養液,離心(xin)去除細(xi)胞(bao)碎片。
如果檢測(ce)分(fen)泌性(xing)成分(fen),直接(jie)用(yong)無(wu)菌管收集上(shang)清(qing)。
如果檢測(ce)細(xi)胞(bao)內(nei)成(cheng)分(fen),需用(yong)PBS稀(xi)釋(shi)細胞(bao)懸(xuan)液,通過(guo)凍融(rong)破(po)壞(huai)細(xi)胞(bao),然(ran)後離心(xin)收集上(shang)清(qing)。
組織(zhi)樣(yang)本:
切(qie)割(ge)組織(zhi)後(hou)稱(cheng)重,加入(ru)PBS(pH7.4)。
快速冷凍並保存(cun)於(yu)液氮中(zhong)。
解凍後,用(yong)PBS稀(xi)釋(shi)並勻漿(jiang)。
離心(xin)後收集上(shang)清(qing)液進(jin)行檢測(ce)。
在(zai)處(chu)理樣(yang)本(ben)時(shi),還應(ying)註(zhu)意以(yi)下(xia)幾(ji)點(dian):
使(shi)用(yong)無(wu)菌、無(wu)熱原和內(nei)毒(du)素(su)的(de)試管或(huo)離心(xin)管。
避免在(zai)采(cai)集(ji)和處(chu)理樣(yang)本(ben)過(guo)程(cheng)中(zhong)造成溶(rong)血(xue)。
樣(yang)本(ben)應(ying)新(xin)鮮(xian),避免長(chang)時間存(cun)放。
嚴格遵循試劑(ji)盒(he)說(shuo)明書和實驗室安全規範(fan)。
正(zheng)確(que)的(de)樣(yang)本處(chu)理是(shi)確(que)保ELISA實驗結果準確(que)的(de)關鍵(jian)步驟(zhou),因(yin)此(ci)需要(yao)仔細操作(zuo),避免汙(wu)染和誤差(cha)
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