嗜(shi)根考克氏(shi)菌(jun)

嗜(shi)根考克氏(shi)菌(jun)

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實驗內(nei)容(rong):

1.稱量(liang)>溶化(hua)→調(tiao)pH >)過濾(lv)>分(fen)裝(zhuang)>加(jia)塞>包紮>滅菌(jun)>無菌(jun)檢查

2.幹熱滅菌(jun):裝(zhuang)入待滅菌(jun)物品(pin)升溫(wen)>恒溫>降溫(wen)>開(kai)箱(xiang)取物

3.高壓蒸汽(qi)滅(mie)菌(jun)加(jia)水>裝(zhuang)物品(pin)>加(jia)蓋>加(jia)熱>排冷空氣+加(jia)壓>恒壓>降壓回零(ling)》排汽(qi)>取物. >無菌(jun)檢查

4.過濾(lv)除(chu)菌(jun):組裝(zhuang)滅菌(jun)>連接→壓濾(lv)>無菌(jun)檢查>清洗滅菌(jun)

低(di)溫(wen)存(cun)法:

公司(si)產品(pin)僅用(yong)於(yu)科研

①簡單保(bao)存(cun)法,將(jiang)瓊脂(zhi)斜(xie)面(mian)孢(bao)子培(pei)養(yang)物、菌(jun)絲懸浮(fu)液(ye)以及(ji)由(you)麩皮(pi)、大(da)米(mi)、小米(mi)等谷物原(yuan)料(liao)制成的(de)孢(bao)子培(pei)養(yang)物置(zhi)於(yu)4℃冰箱(xiang)保(bao)存(cun),保(bao)存(cun)時(shi)間不(bu)超(chao)過1 ~2個(ge)月(yue)，若將(jiang)谷(gu)物原(yuan)料(liao)制備的(de)孢(bao)子瓶抽真空並在棉塞上浸蠟,以隔(ge)絕(jue)外界空氣和水汽(qi),保(bao)持時間(jian)可(ke)達(da)3~ 4個(ge)月(yue);②液(ye)氮超di溫保(bao)存(cun)法,將(jiang)生(sheng)長穩定(ding)期懸浮(fu)在10%甘油(you)或(huo)其他(ta)低(di)冰(bing)點(dian)液(ye)體(ti)中(zhong),密封於(yu)安(an)瓿(bu)管(guan)內(nei)，然(ran)後(hou)控(kong)制冷卻速度,使(shi)安(an)瓿(bu)管(guan)溫(wen)度(du)逐步下(xia)降至(zhi)-35℃時， 即可(ke)置(zhi)於(yu)-150 ~-196℃的液(ye)氮罐中(zhong)保(bao)存(cun)。大(da)多(duo)數(shu)微(wei)生(sheng)物如(ru)病毒(du)、噬菌(jun)體(ti)、多(duo)種(zhong)細(xi)菌(jun)、放(fang)線菌(jun)、酵(jiao)母和原(yuan)蟲(chong)、特(te)別(bie)是(shi)壹(yi)些用(yong)冷凍幹燥法有困難的微(wei)生(sheng)物,都可(ke)用(yong)此(ci)法長期(qi)保(bao)存(cun)。

微(wei)生(sheng)物菌(jun)種(zhong)的(de)培(pei)養(yang):

嗜根考克氏(shi)菌(jun)

1孢(bao)子制備

(1)放線菌(jun)孢(bao)子的制備

壹般采用(yong)瓊脂(zhi)斜(xie)面(mian)培(pei)養(yang)基(ji),培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)含(han)有(you)壹(yi)些(xie)適合產(chan)孢(bao)子的營養(yang)成分(fen),如麩皮(pi)、豌(wan)豆(dou)浸汁、蛋(dan)白腖(dong)和壹(yi)些無(wu)機鹽(yan)等。碳(tan)源(yuan)和氮(dan)源(yuan)不要(yao)太(tai)豐(feng)富（碳(tan)源(yuan)約為(wei)1%,氮源(yuan)不超(chao)過0.5%),碳(tan)源(yuan)豐富容(rong)易(yi)造(zao)成生(sheng)理(li)酸性(xing)的(de)營養(yang)環(huan)境(jing),不利於(yu)放線菌(jun)孢(bao)子的形成，氮(dan)源(yuan)豐富則(ze)有(you)利於(yu)菌(jun)絲繁(fan)殖(zhi)而不(bu)利於(yu)孢(bao)子形成。壹(yi)般(ban)情(qing)況(kuang)下(xia)， 幹(gan)燥(zao)和(he)限制營養(yang)可(ke)直接或(huo)間接誘導(dao)孢(bao)子形成。放(fang)線菌(jun)斜(xie)面(mian)的(de)培(pei)

養(yang)溫(wen)度(du)大(da)多(duo)數(shu)為28℃,少數(shu)為37 ℃,培(pei)養(yang)時(shi)間(jian)為(wei)5~ 14天。

(2)黴菌(jun)孢(bao)子的制備

黴菌(jun)的(de)孢(bao)子培(pei)養(yang),壹般(ban)以大米(mi)、 小米(mi)、玉米、麩皮(pi)、麥(mai)粒(li)等天然農(nong)產品(pin)為培(pei)養(yang)基(ji)。這是由(you)於(yu)這些農(nong)產(chan)品(pin)中(zhong)的(de)營養(yang)成分(fen)較(jiao)適合黴(mei)菌(jun)的(de)孢(bao)子繁(fan)殖(zhi)，而且(qie)這類培(pei)養(yang)基(ji)的(de)表(biao)面積(ji)較(jiao)大(da)，可(ke)獲(huo)得大(da)量的孢(bao)子。黴菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)-般為(wei)25~ 28 ℃,培(pei)養(yang)時(shi)間(jian)為(wei)4~ 14天。

2種(zhong)子制備

(1)搖瓶(ping)種(zhong)子制備

搖瓶(ping)種(zhong)子進(jin)罐,常采用(yong)母瓶、子瓶兩級(ji)培(pei)養(yang),有時(shi)母瓶種(zhong)子也可(ke)以(yi)直接進(jin)罐。種(zhong)子培(pei)養(yang)基(ji)要(yao)求(qiu)比較(jiao)豐(feng)富,並易(yi)被(bei)菌(jun)體(ti)分(fen)解(jie)利用(yong)，氮源(yuan)豐富有(you)利於(yu)菌(jun)絲生(sheng)長。原(yuan)則(ze)上各種(zhong)營養(yang)成分(fen)不宜(yi)過濃(nong),子瓶培(pei)養(yang)基(ji)濃(nong)度(du)比母瓶略高,更接近種(zhong)子罐的培(pei)養(yang)基(ji)配(pei)方(fang)。

(2)種(zhong)子罐種(zhong)子制備

種(zhong)子罐種(zhong)子制備的(de)工(gong)藝過程,因菌(jun)種(zhong)不(bu)同(tong)而異(yi)，壹(yi)般(ban)可(ke)分(fen)為壹級種(zhong)子、 二級(ji)種(zhong)子和三級種(zhong)子的制備。孢(bao)子(或(huo)搖瓶(ping)菌(jun)絲)被(bei)接入到(dao)體(ti)積(ji)較(jiao)小的(de)種(zhong)子罐中(zhong),經培(pei)養(yang)後(hou)形成大(da)量(liang)的(de)菌(jun)絲，這樣的(de)種(zhong)子稱為(wei)壹(yi)級種(zhong)子， 把壹(yi)級(ji)種(zhong)子轉(zhuan)入發酵(jiao)罐內(nei)發(fa)酵(jiao)，稱(cheng)為二級發(fa)酵(jiao)。如(ru)果(guo)將(jiang)壹(yi)級(ji)種(zhong)子接入體(ti)積(ji)較(jiao)大(da)的種(zhong)子罐內(nei),經過培(pei)養(yang)形成更(geng)多(duo)的(de)菌(jun)絲,這樣制備的(de)種(zhong)子稱為(wei)二(er)級種(zhong)子，將(jiang)二(er)級(ji)種(zhong)子轉(zhuan)入發酵(jiao)罐內(nei)發(fa)酵(jiao)稱(cheng)為三級發酵(jiao)。同(tong)樣道(dao)理(li),使(shi)用(yong)三級種(zhong)子的發(fa)酵(jiao),稱為(wei)四(si)級(ji)發酵(jiao)。

脫水存(cun)法:

①沙(sha)土保(bao)存(cun)法,能(neng)產孢(bao)子的細(xi)菌(jun)、放(fang)線菌(jun)及(ji)黴(mei)菌(jun)可(ke)采用(yong)此(ci)法保(bao)存(cun)，即將(jiang)沙(sha)和土以3:2比例混合經(jing)稀(xi)酸處(chu)理(li)洗凈(jing)過篩,裝(zhuang)入小試(shi)管(guan)內(nei)裝(zhuang)置(zhi)高度(du)為1cm滅菌(jun)2~ 3次,烘幹後(hou)即可(ke)將(jiang)在(zai)斜(xie)面(mian)培(pei)養(yang)基(ji)上生(sheng)長良(liang)好(hao)的(de)孢(bao)子,用(yong)無菌(jun)蒸(zheng)餾(liu)水2~ 2.5m制成孢(bao)子懸液(ye)，吸取少許(xu)加(jia)入沙(sha)土管(guan)中(zhong),經真(zhen)空抽幹,外觀呈(cheng)松散狀態(tai),於(yu)4℃冰箱(xiang)保(bao)存(cun),保(bao)存(cun)期(qi)可(ke)達(da)5 ~7年。

②冷凍幹燥法,將(jiang)孢(bao)子懸浮(fu)液(ye)與保(bao)護(hu)劑相混合, 放在(zai)安(an)瓿(bu)管(guan)內(nei)於(yu)-20 -30℃的乙醇浴(yu)中(zhong)速(su)凍(dong)。然(ran)後(hou),在低(di)溫(wen)下(xia)用(yong)真空泵抽幹,用(yong)幹冰(bing)使(shi)水汽(qi)結(jie)凍,熔(rong)封安(an)瓿(bu)管(guan),於(yu)低(di)溫(wen)下(xia)保(bao)存(cun)。保(bao)存(cun)期(qi)可(ke)達(da)5~ 10年之(zhi)久(jiu)。

③石(shi)蠟油(you)封存(cun)法,在斜(xie)面菌(jun)種(zhong)培(pei)養(yang)物上,倒(dao)上滅菌(jun)後(hou)的(de)石(shi)蠟油(you),高出(chu)斜面(mian)1cm,於(yu)4℃冰箱(xiang)或(huo)低(di)溫(wen)幹(gan)燥(zao)處保(bao)存(cun)，此(ci)法不適用(yong)於(yu)能(neng)利用(yong)石(shi)蠟油(you)作碳(tan)源(yuan)的微(wei)生(sheng)物，保(bao)存(cun)期(qi)為壹年以上。

菌(jun)種(zhong)的(de)具體(ti)保(bao)存(cun)方(fang)法

   微(wei)生(sheng)物具(ju)有容易變(bian)異(yi)的(de)特(te)性(xing)，因此(ci)，在(zai)保(bao)藏(zang)過程中(zhong)，必(bi)須(xu)使(shi)微(wei)生(sheng)物的(de)代謝處於(yu)不活(huo)躍或(huo)相對(dui)靜(jing)止(zhi)的(de)狀態(tai)，才能(neng)在壹(yi)定(ding)的時間內(nei)使(shi)其(qi)不(bu)發(fa)生(sheng)變(bian)異(yi)而(er)又(you)保(bao)持生(sheng)活(huo)能(neng)力。

低(di)溫(wen)、幹(gan)燥(zao)和隔(ge)絕(jue)空氣是使(shi)微(wei)生(sheng)物代(dai)謝能(neng)力降低(di)的(de)重要因素(su)，所以(yi)，菌(jun)種(zhong)保(bao)藏(zang)方(fang)法雖多(duo)，但(dan)都是根據這三個(ge)因素(su)而設(she)計(ji)的(de)。

菌(jun)種(zhong)保(bao)藏(zang)方(fang)法大致(zhi)可(ke)分(fen)為以(yi)下(xia)幾(ji)種(zhong)：

1．傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)保(bao)藏(zang)法又(you)有斜(xie)面培(pei)養(yang)、穿(chuan)刺(ci)培(pei)養(yang)、皰(pao)肉(rou)培(pei)養(yang)基(ji)培(pei)養(yang)等(deng)（後(hou)者(zhe)作保(bao)藏(zang)厭(yan)氧(yang)細(xi)菌(jun)用(yong)），培(pei)養(yang)後(hou)於(yu)4—6℃冰箱(xiang)內(nei)保(bao)存(cun)。

2．覆蓋(gai)保(bao)藏(zang)法是傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)的(de)變(bian)相方(fang)法，能(neng)夠(gou)適當(dang)延長保(bao)藏(zang)時(shi)間(jian)，它(ta)是在斜(xie)面培(pei)養(yang)物和(he)穿刺培(pei)養(yang)物上面覆(fu)蓋(gai)滅菌(jun)，壹(yi)方(fang)面可(ke)防(fang)止(zhi)因培(pei)養(yang)基(ji)水分(fen)蒸發(fa)而(er)引起菌(jun)種(zhong)死(si)亡(wang)，另壹(yi)方(fang)面可(ke)阻(zu)止(zhi)氧(yang)氣(qi)進(jin)入，以減弱(ruo)代(dai)謝作用(yong)。

   載體(ti)保(bao)藏(zang)法是將(jiang)微(wei)生(sheng)物吸(xi)附在適當(dang)的載體(ti)，如土壤、沙(sha)子、矽膠(jiao)、濾(lv)紙(zhi)上，而後(hou)進(jin)行(xing)幹(gan)燥(zao)的(de)保(bao)藏(zang)法，例如(ru)沙(sha)土保(bao)藏(zang)法和濾(lv)紙(zhi)保(bao)藏(zang)法應用(yong)相當(dang)廣(guang)泛。

   寄主保(bao)藏(zang)法用(yong)於(yu)目前尚(shang)不能(neng)在人(ren)工培(pei)養(yang)基(ji)上生(sheng)長的(de)微(wei)生(sheng)物，如(ru)病毒(du)、立克次(ci)氏體(ti)、螺旋體(ti)等，它(ta)們必(bi)須(xu)在(zai)生(sheng)活(huo)的(de)動(dong)物、昆(kun)蟲、雞胚內(nei)感染(ran)並(bing)傳(chuan)代(dai)，此(ci)法相當(dang)於(yu)壹般(ban)微(wei)生(sheng)物的(de)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)保(bao)藏(zang)法。病毒(du)等微(wei)生(sheng)物亦(yi)可(ke)用(yong)其他(ta)方(fang)法如液(ye)氮保(bao)藏(zang)法與冷凍幹燥保(bao)藏(zang)法進(jin)行(xing)保(bao)藏(zang)。

5．冷凍保(bao)藏(zang)法可(ke)分(fen)低(di)溫(wen)冰(bing)箱(xiang)（-20—-30℃，-50—-80℃）、幹冰(bing)酒精快速凍(dong)結(jie)（約-70℃）和液(ye)氮（-196℃）等保(bao)藏(zang)法。

冷凍幹燥保(bao)藏(zang)法先使(shi)微(wei)生(sheng)物在(zai)極低(di)溫(wen)度(du)（-70℃左(zuo)右）下(xia)快速冷凍，然後在(zai)減壓下(xia)利用(yong)升華(hua)現象(xiang)除(chu)去(qu)水分(fen)（真空幹燥）。

我司在重視產(chan)品(pin)質(zhi)量(liang)的同(tong)時，也建立了(le)壹(yi)套(tao)集技(ji)術(shu)支(zhi)持、物流(liu)、售(shou)後(hou)服務(wu)等(deng)多(duo)個(ge)部(bu)門的(de)服務(wu)體(ti)系，努力把我們方(fang)便(bian)、快捷(jie)、周(zhou)到(dao)的服務(wu)提供(gong)給(gei)每壹(yi)個(ge)客戶。