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          維氏鞘氨醇單(dan)胞(bao)菌

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          維氏鞘氨醇單(dan)胞(bao)菌

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          實驗(yan)內(nei)容:

          1.稱(cheng)量(liang)>溶(rong)化(hua)→調pH >)過(guo)濾(lv)>分裝(zhuang)>加(jia)塞(sai)>包(bao)紮(zha)>滅(mie)菌>無(wu)菌檢查(zha)

          2.幹熱(re)滅(mie)菌:裝(zhuang)入(ru)待(dai)滅(mie)菌物(wu)品升(sheng)溫(wen)>恒(heng)溫>降溫>開(kai)箱(xiang)取物(wu)

          3.高壓(ya)蒸(zheng)汽(qi)滅(mie)菌加(jia)水(shui)>裝(zhuang)物(wu)品>加(jia)蓋>加(jia)熱(re)>排冷空氣+加(jia)壓(ya)>恒(heng)壓>降壓回零》排汽(qi)>取物(wu). >無(wu)菌檢查(zha)

          4.過(guo)濾(lv)除菌:組(zu)裝(zhuang)滅(mie)菌>連接→壓(ya)濾(lv)>無(wu)菌檢查(zha)>清洗滅(mie)菌

          低溫存法(fa):

          公(gong)司(si)產(chan)品僅用(yong)於科研

          ①簡單(dan)保存法(fa),將瓊(qiong)脂(zhi)斜(xie)面孢(bao)子(zi)培養(yang)物(wu)、菌絲懸浮液(ye)以及(ji)由(you)麩皮、大(da)米、小(xiao)米(mi)等(deng)谷(gu)物(wu)原(yuan)料制成的孢子(zi)培養(yang)物(wu)置(zhi)於4冰箱(xiang)保存,保存時(shi)間不超(chao)過(guo)1 ~2個(ge)月(yue),若將谷(gu)物(wu)原(yuan)料制備的孢子(zi)瓶抽(chou)真空並(bing)在棉塞(sai)上(shang)浸蠟(la),以隔(ge)絕(jue)外界空氣和水汽(qi),保持時(shi)間可達3~ 4個(ge)月(yue);②液(ye)氮(dan)超(chao)di溫保存法(fa),將生(sheng)長(chang)穩定(ding)期懸浮在10%甘油(you)或(huo)其他低冰點液體(ti)中,密封(feng)於安(an)瓿管(guan)內(nei),然後控制冷卻速度(du),使(shi)安(an)瓿管(guan)溫度(du)逐(zhu)步(bu)下(xia)降至(zhi)-35時(shi), 即(ji)可置(zhi)於-150 ~-196的(de)液氮(dan)罐中保存。大(da)多數(shu)微(wei)生(sheng)物(wu)如病毒、噬菌體、多種(zhong)細(xi)菌、放線菌、酵母(mu)和原(yuan)蟲(chong)、特別是(shi)壹些用(yong)冷(leng)凍(dong)幹燥(zao)法(fa)有困(kun)難(nan)的微(wei)生(sheng)物(wu),都(dou)可用此(ci)法長期保存。

          微生(sheng)物(wu)菌種(zhong)的(de)培養(yang):

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          維(wei)氏鞘氨醇單(dan)胞(bao)菌

          1孢子(zi)制備

          (1)放線菌孢子(zi)的制備

          般(ban)采(cai)用(yong)瓊(qiong)脂(zhi)斜(xie)面培養(yang)基,培養(yang)基中含有壹些適(shi)合產(chan)孢子(zi)的營養(yang)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋(dan)白(bai)腖(dong)和壹些無(wu)機(ji)鹽等。碳源和氮(dan)源不(bu)要太(tai)豐(feng)富(fu)碳源約(yue)為(wei)1%,氮(dan)源不(bu)超(chao)過(guo)0.5%),碳源豐(feng)富(fu)容易(yi)造成生(sheng)理(li)酸性(xing)的(de)營養(yang)環境(jing),不(bu)利(li)於放線菌孢子(zi)的形(xing)成,氮(dan)源豐(feng)富(fu)則有利(li)於菌絲繁(fan)殖而不利(li)於孢子(zi)形(xing)成。壹般(ban)情況下(xia), 幹(gan)燥(zao)和限制營養(yang)可直接或(huo)間接誘(you)導(dao)孢(bao)子(zi)形(xing)成。放線菌斜面的(de)培

          養(yang)溫度(du)大(da)多數(shu)為(wei)28,少(shao)數(shu)為(wei)37 ,培養(yang)時(shi)間為5~ 14天(tian)。

          (2)黴菌孢子(zi)的制備

          黴菌的孢(bao)子(zi)培養(yang),壹般(ban)以大(da)米(mi)、 小(xiao)米(mi)、玉(yu)米、麩(fu)皮、麥粒等天然農(nong)產(chan)品為培養(yang)基。這(zhe)是(shi)由(you)於這(zhe)些農(nong)產(chan)品中的(de)營養(yang)成分較適(shi)合黴菌的孢(bao)子(zi)繁(fan)殖,而且(qie)這(zhe)類培養(yang)基的(de)表面積(ji)較大(da),可獲得(de)大量(liang)的孢子(zi)。黴菌的培養(yang)-般(ban)為25~ 28 ,培養(yang)時(shi)間為4~ 14天(tian)。

          2種(zhong)子(zi)制備

          (1)搖(yao)瓶種(zhong)子(zi)制備

          搖(yao)瓶種(zhong)子(zi)進罐,常(chang)采(cai)用(yong)母(mu)瓶、子(zi)瓶兩級培養(yang),有(you)時(shi)母(mu)瓶種(zhong)子(zi)也(ye)可以直(zhi)接(jie)進罐。種(zhong)子(zi)培養(yang)基要(yao)求(qiu)比較豐(feng)富(fu),並(bing)易(yi)被菌體分解利(li)用,氮(dan)源豐(feng)富(fu)有(you)利(li)於菌絲生(sheng)長(chang)。原(yuan)則上各(ge)種(zhong)營養(yang)成分不(bu)宜(yi)過(guo)濃,子(zi)瓶培養(yang)基濃度(du)比(bi)母(mu)瓶略高,更(geng)接近種(zhong)子(zi)罐的(de)培養(yang)基配(pei)方(fang)。

          (2)種(zhong)子(zi)罐種(zhong)子(zi)制備

          種(zhong)子(zi)罐種(zhong)子(zi)制備的工藝(yi)過(guo)程(cheng),因(yin)菌種(zhong)不(bu)同(tong)而異,壹般(ban)可分為(wei)級(ji)種(zhong)子(zi)、 二(er)級種(zhong)子(zi)和三級(ji)種(zhong)子(zi)的制備。孢子(zi)(或(huo)搖(yao)瓶菌絲)被接(jie)入(ru)到體積較小(xiao)的(de)種(zhong)子(zi)罐中,經培養(yang)後形(xing)成大(da)量(liang)的(de)菌絲,這(zhe)樣的種(zhong)子(zi)稱(cheng)為(wei)壹級種(zhong)子(zi), 把壹級種(zhong)子(zi)轉(zhuan)入(ru)發(fa)酵罐內(nei)發(fa)酵,稱(cheng)為(wei)二(er)級發(fa)酵。如果(guo)將壹級種(zhong)子(zi)接入(ru)體(ti)積較大(da)的種(zhong)子(zi)罐內(nei),經過(guo)培養(yang)形(xing)成更(geng)多的菌絲,這(zhe)樣制備的種(zhong)子(zi)稱(cheng)為(wei)二(er)級種(zhong)子(zi),將二(er)級(ji)種(zhong)子(zi)轉(zhuan)入(ru)發(fa)酵罐內(nei)發(fa)酵稱(cheng)為(wei)三級(ji)發(fa)酵。同(tong)樣道(dao)理(li),使(shi)用(yong)三級(ji)種(zhong)子(zi)的發(fa)酵(jiao),稱(cheng)為(wei)四(si)級發(fa)酵。

          脫水存法(fa):

          ①沙(sha)土(tu)保存法(fa),能(neng)產(chan)孢子(zi)的細(xi)菌、放線菌及黴菌可采(cai)用(yong)此(ci)法保存即(ji)將沙和土以3:2比例混(hun)合經稀酸處(chu)理(li)洗凈(jing)過(guo)篩,裝(zhuang)入(ru)小(xiao)試(shi)管(guan)內(nei)裝(zhuang)置(zhi)高度(du)為(wei)1cm滅(mie)菌2~ 3次(ci),烘幹後(hou)即(ji)可將在斜面培養(yang)基上(shang)生(sheng)長(chang)良(liang)好的(de)孢(bao)子(zi),用(yong)無(wu)菌蒸餾水2~ 2.5m制成孢子(zi)懸液(ye),吸(xi)取少(shao)許加(jia)入(ru)沙(sha)土管中,經真空抽(chou)幹,外觀(guan)呈(cheng)松散狀態,4冰箱(xiang)保存,保存期可達5 ~7年(nian)。

          ②冷(leng)凍(dong)幹燥(zao)法(fa),將(jiang)孢子(zi)懸浮液(ye)與(yu)保護劑(ji)相混合, 放在安(an)瓿管(guan)內(nei)於-20 -30的(de)乙醇浴中速(su)凍(dong)。然後,在低溫下(xia)用(yong)真空泵抽(chou)幹,用(yong)幹(gan)冰使(shi)水(shui)汽(qi)結凍(dong),熔封安(an)瓿管(guan),於低溫下(xia)保存。保存期可達5~ 10年(nian)之(zhi)久。

          ③石(shi)蠟(la)油(you)封(feng)存法(fa),在斜面菌種(zhong)培養(yang)物(wu)上,倒(dao)上(shang)滅(mie)菌後的(de)石(shi)蠟(la)油(you),高出斜(xie)面1cm,4冰箱(xiang)或(huo)低溫幹(gan)燥(zao)處(chu)保存,此(ci)法不適(shi)用於能(neng)利(li)用石(shi)蠟(la)油(you)作(zuo)碳(tan)源的(de)微生(sheng)物(wu),保存期為年(nian)以上(shang)。

          菌種(zhong)的(de)具體(ti)保存方(fang)法(fa)

             微(wei)生(sheng)物(wu)具有(you)容易(yi)變異(yi)的(de)特性(xing),因此(ci),在保藏過(guo)程(cheng)中,必(bi)須(xu)使(shi)微(wei)生(sheng)物(wu)的代謝(xie)處(chu)於不活躍或(huo)相(xiang)對(dui)靜(jing)止的(de)狀態,才(cai)能(neng)在壹定(ding)的時(shi)間內(nei)使(shi)其不發生(sheng)變異(yi)而又保持生(sheng)活(huo)能(neng)力(li)。

          低溫、幹(gan)燥(zao)和隔絕空氣是(shi)使(shi)微(wei)生(sheng)物(wu)代謝(xie)能(neng)力(li)降低的重(zhong)要因(yin)素(su),所以,菌種(zhong)保藏方(fang)法雖多,但(dan)都(dou)是(shi)根據(ju)這(zhe)三個(ge)因(yin)素(su)而設計(ji)的。

          菌種(zhong)保藏方(fang)法大致可分為(wei)以下(xia)幾(ji)種(zhong):

          1.傳(chuan)代培養(yang)保藏法(fa)又有斜(xie)面培養(yang)、穿(chuan)刺培養(yang)、皰(pao)肉培養(yang)基培養(yang)等(後(hou)者(zhe)作(zuo)保藏厭(yan)氧細(xi)菌用),培養(yang)後於46℃冰箱(xiang)內(nei)保存。

          2.覆蓋保藏法(fa)是(shi)傳(chuan)代培養(yang)的變相(xiang)方(fang)法,能(neng)夠適(shi)當延(yan)長保藏時(shi)間,它是(shi)在斜面培養(yang)物(wu)和穿(chuan)刺培養(yang)物(wu)上面覆(fu)蓋滅(mie)菌,壹方面可防(fang)止因(yin)培養(yang)基水(shui)分蒸(zheng)發(fa)而引起(qi)菌種(zhong)死亡(wang),另壹方面可阻止氧氣進入(ru),以減弱(ruo)代謝(xie)作(zuo)用。

             載體(ti)保藏法(fa)是(shi)將(jiang)微(wei)生(sheng)物(wu)吸附(fu)在適(shi)當的(de)載體(ti),如土(tu)壤(rang)、沙子(zi)、矽膠、濾(lv)紙(zhi)上,而後進行(xing)幹(gan)燥(zao)的(de)保藏法(fa),例如沙土保藏法(fa)和濾(lv)紙(zhi)保藏法(fa)應用相當廣泛(fan)。

             寄(ji)主(zhu)保藏法(fa)用於目前尚不(bu)能(neng)在人工培養(yang)基上(shang)生(sheng)長(chang)的(de)微生(sheng)物(wu),如病毒、立克次(ci)氏體(ti)、螺旋體等(deng),它(ta)們必(bi)須(xu)在生(sheng)活(huo)的(de)動(dong)物(wu)、昆蟲(chong)、雞胚(pei)內(nei)感染並(bing)傳(chuan)代,此(ci)法相當(dang)於壹般(ban)微生(sheng)物(wu)的傳(chuan)代培養(yang)保藏法(fa)。病毒等微(wei)生(sheng)物(wu)亦可用其他方法如液(ye)氮(dan)保藏法(fa)與(yu)冷(leng)凍(dong)幹燥(zao)保藏法(fa)進行(xing)保藏。

          5.冷凍(dong)保藏法(fa)可分低溫冰箱(xiang)(-20-30℃,-50-80℃)、幹冰酒(jiu)精快(kuai)速(su)凍(dong)結(約(yue)-70℃)和液氮(dan)(-196℃)等(deng)保藏法(fa)。

          冷(leng)凍(dong)幹燥(zao)保藏法(fa)先使(shi)微(wei)生(sheng)物(wu)在極低溫度(du)(-70℃左(zuo)右)下(xia)快(kuai)速(su)冷凍(dong),然後在減壓下(xia)利(li)用升(sheng)華(hua)現象(xiang)除去水分(真(zhen)空幹(gan)燥(zao))。

          我(wo)司在重(zhong)視(shi)產(chan)品質量(liang)的同(tong)時(shi),也(ye)建立了(le)壹套集技(ji)術支持、物(wu)流(liu)、售(shou)後服(fu)務(wu)等(deng)多個部門的(de)服(fu)務(wu)體(ti)系,努力(li)把我(wo)們方(fang)便、快(kuai)捷(jie)、周(zhou)到的服務(wu)提供給(gei)每壹個客(ke)戶。












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