腐皮鐮孢(bao)菌(jun)

腐皮鐮孢(bao)菌(jun)

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實(shi)驗(yan)內(nei)容(rong):

1.稱量>溶化→調(tiao)pH >)過濾>分裝>加塞>包(bao)紮(zha)>滅菌>無菌檢查

2.幹(gan)熱(re)滅菌:裝入(ru)待滅菌物品(pin)升(sheng)溫>恒(heng)溫>降溫>開箱取(qu)物(wu)

3.高壓蒸(zheng)汽滅菌加水(shui)>裝物(wu)品(pin)>加蓋(gai)>加熱>排冷(leng)空(kong)氣+加壓>恒(heng)壓(ya)>降壓(ya)回(hui)零》排汽>取(qu)物(wu). >無菌檢查

4.過濾除(chu)菌:組裝滅菌>連接→壓濾(lv)>無菌檢查>清(qing)洗(xi)滅菌

低(di)溫存(cun)法(fa):

公(gong)司產品(pin)僅(jin)用(yong)於(yu)科研(yan)

①簡(jian)單(dan)保(bao)存(cun)法(fa),將瓊脂斜面孢(bao)子(zi)培(pei)養(yang)物、菌(jun)絲(si)懸(xuan)浮液(ye)以(yi)及(ji)由麩(fu)皮、大(da)米(mi)、小(xiao)米等(deng)谷(gu)物原(yuan)料制成的(de)孢(bao)子(zi)培(pei)養(yang)物置於(yu)4℃冰箱保(bao)存(cun),保(bao)存(cun)時(shi)間不超過1 ~2個(ge)月(yue)，若(ruo)將谷物(wu)原(yuan)料制備(bei)的孢(bao)子(zi)瓶(ping)抽真(zhen)空(kong)並(bing)在棉塞上(shang)浸(jin)蠟(la),以隔絕外界空(kong)氣和(he)水(shui)汽,保(bao)持時間可(ke)達(da)3~ 4個(ge)月(yue);②液(ye)氮(dan)超di溫保(bao)存(cun)法(fa),將生長穩(wen)定期(qi)懸(xuan)浮在10%甘油(you)或(huo)其(qi)他低(di)冰點液(ye)體(ti)中,密封(feng)於(yu)安瓿管內，然後(hou)控制冷(leng)卻(que)速(su)度,使安瓿管溫度(du)逐(zhu)步(bu)下(xia)降至(zhi)-35℃時， 即可(ke)置於(yu)-150 ~-196℃的液(ye)氮(dan)罐中保(bao)存(cun)。大(da)多數(shu)微生物如病(bing)毒、噬菌(jun)體(ti)、多種細菌、放線菌、酵(jiao)母和原(yuan)蟲、特別(bie)是(shi)壹(yi)些(xie)用(yong)冷(leng)凍(dong)幹(gan)燥(zao)法(fa)有(you)困難(nan)的(de)微生物,都可(ke)用(yong)此(ci)法(fa)長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。

微生物菌(jun)種的(de)培(pei)養(yang):

腐皮鐮孢(bao)菌(jun)

1孢(bao)子(zi)制備(bei)

(1)放線菌孢(bao)子(zi)的(de)制備(bei)

壹般采(cai)用瓊脂斜面培(pei)養(yang)基,培養(yang)基中含有(you)壹(yi)些(xie)適合產孢(bao)子(zi)的(de)營(ying)養(yang)成分(fen),如麩(fu)皮、豌(wan)豆(dou)浸汁(zhi)、蛋(dan)白腖(dong)和(he)壹(yi)些(xie)無機鹽(yan)等(deng)。碳(tan)源(yuan)和氮(dan)源(yuan)不要太豐富（碳(tan)源(yuan)約為1%,氮源(yuan)不超(chao)過0.5%),碳(tan)源(yuan)豐富容易造成生理酸性(xing)的(de)營(ying)養(yang)環境(jing),不利於(yu)放線菌孢(bao)子(zi)的(de)形(xing)成，氮(dan)源(yuan)豐富則(ze)有(you)利於(yu)菌絲繁殖(zhi)而(er)不利於(yu)孢(bao)子(zi)形(xing)成。壹(yi)般(ban)情(qing)況下(xia)， 幹(gan)燥(zao)和限制營(ying)養(yang)可(ke)直(zhi)接(jie)或(huo)間(jian)接誘(you)導(dao)孢(bao)子(zi)形(xing)成。放(fang)線(xian)菌(jun)斜面的(de)培(pei)

養(yang)溫度(du)大(da)多數(shu)為28℃,少數(shu)為37 ℃,培養(yang)時間(jian)為5~ 14天(tian)。

(2)黴菌孢(bao)子(zi)的(de)制備(bei)

黴菌的孢(bao)子(zi)培(pei)養(yang),壹般以大(da)米(mi)、 小(xiao)米、玉(yu)米、麩皮、麥(mai)粒(li)等(deng)天(tian)然(ran)農產品(pin)為培養(yang)基。這(zhe)是(shi)由於(yu)這些農產品(pin)中的營(ying)養(yang)成分(fen)較(jiao)適合黴菌的孢(bao)子(zi)繁(fan)殖，而且這(zhe)類(lei)培養(yang)基的(de)表面積(ji)較(jiao)大，可(ke)獲(huo)得(de)大(da)量的(de)孢(bao)子(zi)。黴(mei)菌的培養(yang)-般為25~ 28 ℃,培養(yang)時間(jian)為4~ 14天(tian)。

2種子制備(bei)

(1)搖瓶種子(zi)制備(bei)

搖瓶種子(zi)進(jin)罐,常采(cai)用母瓶、子瓶兩級培(pei)養(yang),有(you)時(shi)母瓶種子也可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)進(jin)罐。種子培(pei)養(yang)基要求(qiu)比較(jiao)豐富,並易被菌(jun)體分解利用，氮源(yuan)豐富有(you)利於(yu)菌絲生長。原(yuan)則(ze)上(shang)各種(zhong)營(ying)養(yang)成分(fen)不(bu)宜(yi)過濃(nong),子瓶培養(yang)基濃(nong)度比(bi)母瓶略高,更(geng)接(jie)近(jin)種(zhong)子罐的(de)培(pei)養(yang)基配(pei)方(fang)。

(2)種子罐種(zhong)子(zi)制備(bei)

種子罐種(zhong)子(zi)制備(bei)的工藝過程(cheng),因(yin)菌種不同(tong)而異，壹(yi)般(ban)可(ke)分(fen)為壹級種(zhong)子、 二(er)級種(zhong)子和(he)三(san)級種(zhong)子的(de)制備(bei)。孢(bao)子(zi)(或搖瓶菌(jun)絲(si))被接(jie)入(ru)到體積(ji)較(jiao)小(xiao)的種(zhong)子罐中,經培(pei)養(yang)後(hou)形(xing)成大(da)量(liang)的(de)菌(jun)絲，這(zhe)樣的種子稱(cheng)為壹級種(zhong)子， 把壹(yi)級種(zhong)子轉(zhuan)入(ru)發(fa)酵(jiao)罐內發(fa)酵(jiao)，稱為二(er)級發(fa)酵(jiao)。如果(guo)將壹級種(zhong)子接(jie)入(ru)體積(ji)較(jiao)大的種(zhong)子罐(guan)內(nei),經過培養(yang)形(xing)成更(geng)多(duo)的菌(jun)絲,這樣制備(bei)的種子(zi)稱為二(er)級種(zhong)子，將二(er)級種(zhong)子轉(zhuan)入(ru)發(fa)酵(jiao)罐內發(fa)酵(jiao)稱為三(san)級發(fa)酵(jiao)。同(tong)樣道(dao)理(li),使用三(san)級種(zhong)子的(de)發(fa)酵(jiao),稱為四級發(fa)酵(jiao)。

脫(tuo)水(shui)存(cun)法(fa):

①沙土保(bao)存(cun)法(fa),能產孢(bao)子(zi)的(de)細菌、放線菌及(ji)黴菌(jun)可(ke)采(cai)用此(ci)法(fa)保(bao)存(cun)，即將沙和(he)土以(yi)3:2比例(li)混(hun)合經稀(xi)酸處(chu)理(li)洗(xi)凈過篩(shai),裝入(ru)小(xiao)試管(guan)內裝置高度為1cm滅菌2~ 3次,烘(hong)幹(gan)後(hou)即可(ke)將在斜面培(pei)養(yang)基上(shang)生長良(liang)好的(de)孢(bao)子(zi),用無菌蒸(zheng)餾水(shui)2~ 2.5m制成孢(bao)子(zi)懸(xuan)液(ye)，吸(xi)取(qu)少(shao)許加(jia)入(ru)沙土管(guan)中,經真(zhen)空(kong)抽(chou)幹(gan),外觀(guan)呈松(song)散(san)狀態(tai),於(yu)4℃冰箱保(bao)存(cun),保(bao)存(cun)期(qi)可(ke)達(da)5 ~7年。

②冷(leng)凍(dong)幹(gan)燥(zao)法(fa),將孢(bao)子(zi)懸(xuan)浮液(ye)與(yu)保(bao)護(hu)劑相(xiang)混(hun)合, 放在安瓿管內於(yu)-20 -30℃的乙醇浴(yu)中速(su)凍(dong)。然後(hou),在低(di)溫下(xia)用真(zhen)空(kong)泵(beng)抽(chou)幹(gan),用幹(gan)冰使水(shui)汽結凍(dong),熔封安(an)瓿管,於(yu)低(di)溫下(xia)保(bao)存(cun)。保(bao)存(cun)期(qi)可(ke)達(da)5~ 10年之久(jiu)。

③石(shi)蠟(la)油(you)封(feng)存(cun)法(fa),在斜面菌(jun)種(zhong)培養(yang)物上(shang),倒上(shang)滅菌後(hou)的石(shi)蠟(la)油(you),高出(chu)斜面1cm,於(yu)4℃冰箱或低(di)溫幹(gan)燥(zao)處(chu)保(bao)存(cun)，此(ci)法(fa)不(bu)適用(yong)於(yu)能利用石(shi)蠟(la)油(you)作碳(tan)源(yuan)的微生物，保(bao)存(cun)期(qi)為壹年以上(shang)。

菌種的具(ju)體(ti)保(bao)存(cun)方(fang)法(fa)

   微生物具(ju)有(you)容(rong)易(yi)變(bian)異的(de)特性(xing)，因(yin)此(ci)，在保(bao)藏(zang)過程(cheng)中，必須(xu)使(shi)微生物的(de)代謝處(chu)於(yu)不活(huo)躍(yue)或(huo)相對(dui)靜止(zhi)的(de)狀態(tai)，才(cai)能在壹定的時間(jian)內(nei)使其(qi)不發(fa)生變(bian)異而(er)又(you)保(bao)持生活(huo)能力。

低(di)溫、幹(gan)燥(zao)和隔絕空(kong)氣是(shi)使微生物代謝能力降低(di)的(de)重(zhong)要因(yin)素(su)，所(suo)以，菌(jun)種保(bao)藏(zang)方法(fa)雖(sui)多(duo)，但(dan)都是根據這三(san)個(ge)因(yin)素(su)而設(she)計(ji)的(de)。

菌種保(bao)藏(zang)方法(fa)大(da)致(zhi)可(ke)分(fen)為以下(xia)幾種(zhong)：

1．傳代培養(yang)保(bao)藏(zang)法(fa)又(you)有(you)斜面培(pei)養(yang)、穿(chuan)刺培養(yang)、皰(pao)肉(rou)培養(yang)基培(pei)養(yang)等(deng)（後(hou)者作保(bao)藏(zang)厭氧(yang)細菌用），培養(yang)後(hou)於(yu)4—6℃冰箱內保(bao)存(cun)。

2．覆蓋(gai)保(bao)藏(zang)法(fa)是(shi)傳代培養(yang)的變(bian)相方(fang)法(fa)，能夠適當(dang)延(yan)長(chang)保(bao)藏(zang)時間，它(ta)是在斜面培(pei)養(yang)物和(he)穿(chuan)刺培養(yang)物上(shang)面(mian)覆蓋(gai)滅菌，壹方(fang)面(mian)可(ke)防(fang)止(zhi)因(yin)培養(yang)基水(shui)分蒸(zheng)發(fa)而(er)引起(qi)菌種死亡，另(ling)壹方(fang)面可(ke)阻(zu)止(zhi)氧(yang)氣進(jin)入(ru)，以減弱代謝作用(yong)。

   載(zai)體(ti)保(bao)藏(zang)法(fa)是(shi)將微生物吸(xi)附在適當(dang)的載(zai)體(ti)，如土壤、沙(sha)子(zi)、矽(gui)膠(jiao)、濾紙上(shang)，而(er)後(hou)進行幹(gan)燥(zao)的保(bao)藏(zang)法(fa)，例(li)如沙(sha)土保(bao)藏(zang)法(fa)和(he)濾(lv)紙保(bao)藏(zang)法(fa)應(ying)用(yong)相當(dang)廣(guang)泛。

   寄(ji)主(zhu)保(bao)藏(zang)法(fa)用(yong)於(yu)目前尚(shang)不(bu)能在人工培養(yang)基上(shang)生長的(de)微生物，如病(bing)毒、立克(ke)次(ci)氏體、螺(luo)旋體(ti)等(deng)，它(ta)們(men)必須(xu)在生活(huo)的(de)動(dong)物、昆(kun)蟲、雞胚內(nei)感染並(bing)傳代，此(ci)法(fa)相(xiang)當(dang)於(yu)壹般微生物的(de)傳代培養(yang)保(bao)藏(zang)法(fa)。病(bing)毒等(deng)微生物亦(yi)可(ke)用(yong)其(qi)他方(fang)法(fa)如液(ye)氮(dan)保(bao)藏(zang)法(fa)與(yu)冷(leng)凍(dong)幹(gan)燥(zao)保(bao)藏(zang)法(fa)進(jin)行保(bao)藏(zang)。

5．冷(leng)凍(dong)保(bao)藏(zang)法(fa)可(ke)分(fen)低(di)溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、幹(gan)冰酒(jiu)精快速(su)凍(dong)結（約-70℃）和液(ye)氮(dan)（-196℃）等(deng)保(bao)藏(zang)法(fa)。

冷(leng)凍(dong)幹(gan)燥(zao)保(bao)藏(zang)法(fa)先使微生物在極低(di)溫度(du)（-70℃左右）下(xia)快速(su)冷(leng)凍(dong)，然後(hou)在減壓下(xia)利用升(sheng)華現(xian)象除(chu)去水(shui)分（真(zhen)空(kong)幹(gan)燥(zao)）。

我司在重(zhong)視(shi)產品(pin)質量的同(tong)時，也建(jian)立了壹(yi)套(tao)集(ji)技術支(zhi)持、物流、售(shou)後(hou)服務(wu)等(deng)多(duo)個(ge)部(bu)門(men)的服務(wu)體系(xi)，努(nu)力(li)把我們(men)方便(bian)、快捷(jie)、周(zhou)到的服(fu)務(wu)提(ti)供(gong)給每壹(yi)個(ge)客(ke)戶。