芽(ya)枝狀(zhuang)枝孢(bao)菌

芽(ya)枝狀(zhuang)枝孢(bao)菌

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實(shi)驗(yan)內容(rong):

1.稱(cheng)量(liang)>溶(rong)化(hua)→調pH >)過濾(lv)>分(fen)裝(zhuang)>加(jia)塞(sai)>包(bao)紮>滅(mie)菌>無菌檢查

2.幹(gan)熱(re)滅(mie)菌:裝(zhuang)入(ru)待滅菌物品升(sheng)溫(wen)>恒(heng)溫(wen)>降(jiang)溫>開(kai)箱(xiang)取物(wu)

3.高壓蒸汽(qi)滅(mie)菌加水>裝(zhuang)物(wu)品(pin)>加(jia)蓋(gai)>加(jia)熱(re)>排冷空(kong)氣+加(jia)壓(ya)>恒(heng)壓(ya)>降(jiang)壓回零》排汽(qi)>取(qu)物(wu). >無菌檢查

4.過濾(lv)除菌:組(zu)裝滅(mie)菌>連(lian)接→壓濾(lv)>無菌檢查>清(qing)洗(xi)滅(mie)菌

低(di)溫(wen)存(cun)法(fa):

公(gong)司產品(pin)僅(jin)用(yong)於科(ke)研(yan)

①簡(jian)單(dan)保(bao)存法(fa),將瓊(qiong)脂(zhi)斜面(mian)孢子(zi)培養物、菌絲懸(xuan)浮(fu)液以及(ji)由(you)麩皮、大米、小(xiao)米等(deng)谷(gu)物(wu)原(yuan)料(liao)制(zhi)成的孢(bao)子(zi)培養(yang)物置(zhi)於4℃冰箱(xiang)保(bao)存,保(bao)存時間(jian)不(bu)超(chao)過1 ~2個月(yue)，若(ruo)將谷(gu)物(wu)原(yuan)料(liao)制(zhi)備(bei)的孢(bao)子(zi)瓶(ping)抽(chou)真(zhen)空(kong)並(bing)在(zai)棉(mian)塞(sai)上(shang)浸(jin)蠟,以隔(ge)絕(jue)外界(jie)空氣和水汽(qi),保(bao)持時間(jian)可(ke)達3~ 4個月(yue);②液(ye)氮(dan)超(chao)di溫(wen)保(bao)存法(fa),將生長穩定(ding)期懸(xuan)浮(fu)在(zai)10%甘(gan)油(you)或其(qi)他(ta)低冰點(dian)液體中(zhong),密(mi)封於安(an)瓿管(guan)內，然(ran)後(hou)控(kong)制冷卻速度,使安(an)瓿管(guan)溫度逐步(bu)下降(jiang)至(zhi)-35℃時， 即(ji)可(ke)置(zhi)於-150 ~-196℃的液(ye)氮(dan)罐中保(bao)存。大多(duo)數(shu)微(wei)生(sheng)物(wu)如(ru)病(bing)毒(du)、噬(shi)菌體、多(duo)種(zhong)細菌、放線菌、酵母和原(yuan)蟲(chong)、特(te)別(bie)是(shi)壹些用(yong)冷凍幹(gan)燥(zao)法(fa)有困(kun)難的微(wei)生(sheng)物(wu),都(dou)可(ke)用(yong)此法(fa)長期保(bao)存。

微(wei)生(sheng)物(wu)菌種(zhong)的培(pei)養(yang):

芽(ya)枝狀(zhuang)枝孢(bao)菌

1孢(bao)子(zi)制(zhi)備(bei)

(1)放(fang)線(xian)菌孢子的制(zhi)備(bei)

壹(yi)般(ban)采用(yong)瓊(qiong)脂(zhi)斜面(mian)培養(yang)基,培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)含有壹(yi)些適(shi)合(he)產孢(bao)子(zi)的營養成分,如(ru)麩皮、豌豆(dou)浸汁(zhi)、蛋白腖(dong)和壹(yi)些無機(ji)鹽等(deng)。碳(tan)源(yuan)和氮(dan)源不要(yao)太(tai)豐富(fu)（碳(tan)源(yuan)約為(wei)1%,氮(dan)源(yuan)不(bu)超(chao)過0.5%),碳(tan)源(yuan)豐富(fu)容(rong)易造成生理酸(suan)性(xing)的營養環境,不(bu)利(li)於放(fang)線(xian)菌孢子的形成，氮源豐富(fu)則有利(li)於菌絲繁殖(zhi)而不利(li)於孢(bao)子(zi)形成。壹般情況(kuang)下， 幹(gan)燥(zao)和(he)限制(zhi)營養可(ke)直(zhi)接或間(jian)接(jie)誘(you)導(dao)孢子(zi)形成。放線菌斜面(mian)的培(pei)

養(yang)溫(wen)度大多(duo)數(shu)為(wei)28℃,少(shao)數(shu)為(wei)37 ℃,培(pei)養(yang)時間(jian)為(wei)5~ 14天(tian)。

(2)黴菌孢子的制(zhi)備(bei)

黴菌的孢(bao)子(zi)培養(yang),壹(yi)般(ban)以大米、 小(xiao)米、玉米、麩皮、麥粒(li)等(deng)天(tian)然(ran)農(nong)產品(pin)為(wei)培養(yang)基。這(zhe)是(shi)由(you)於這(zhe)些農(nong)產品(pin)中(zhong)的營養成分較(jiao)適(shi)合(he)黴菌的孢(bao)子(zi)繁殖(zhi)，而且這(zhe)類(lei)培養基(ji)的表(biao)面(mian)積較(jiao)大，可(ke)獲得(de)大量(liang)的孢(bao)子(zi)。黴菌的培(pei)養(yang)-般(ban)為(wei)25~ 28 ℃,培(pei)養(yang)時間(jian)為(wei)4~ 14天(tian)。

2種(zhong)子制(zhi)備(bei)

(1)搖(yao)瓶(ping)種(zhong)子制(zhi)備(bei)

搖(yao)瓶(ping)種(zhong)子進(jin)罐,常(chang)采用(yong)母瓶(ping)、子(zi)瓶(ping)兩(liang)級培養,有時母瓶(ping)種(zhong)子也(ye)可(ke)以直(zhi)接(jie)進罐。種(zhong)子培(pei)養(yang)基(ji)要求比(bi)較(jiao)豐(feng)富(fu),並(bing)易被(bei)菌體分(fen)解利(li)用(yong)，氮源(yuan)豐富(fu)有利(li)於菌絲生(sheng)長。原(yuan)則上(shang)各(ge)種(zhong)營養成分不宜過濃(nong),子(zi)瓶(ping)培(pei)養基濃度比(bi)母瓶(ping)略(lve)高,更(geng)接近種(zhong)子罐的培(pei)養(yang)基配方。

(2)種(zhong)子罐種(zhong)子制(zhi)備(bei)

種(zhong)子罐種(zhong)子制(zhi)備(bei)的工(gong)藝(yi)過程(cheng),因菌種(zhong)不同而異(yi)，壹般(ban)可(ke)分(fen)為(wei)壹(yi)級(ji)種(zhong)子、 二(er)級(ji)種(zhong)子和(he)三(san)級種(zhong)子的制(zhi)備(bei)。孢子(或搖(yao)瓶(ping)菌絲)被(bei)接入(ru)到(dao)體積較(jiao)小(xiao)的種(zhong)子罐中,經(jing)培(pei)養(yang)後(hou)形成大量(liang)的菌絲，這(zhe)樣(yang)的種(zhong)子稱(cheng)為(wei)壹級(ji)種(zhong)子， 把(ba)壹(yi)級(ji)種(zhong)子轉(zhuan)入(ru)發酵(jiao)罐內發酵(jiao)，稱(cheng)為(wei)二(er)級(ji)發(fa)酵(jiao)。如(ru)果將壹級(ji)種(zhong)子接(jie)入(ru)體積較(jiao)大的種(zhong)子罐內,經(jing)過培(pei)養(yang)形成更(geng)多(duo)的菌絲,這(zhe)樣(yang)制備(bei)的種(zhong)子稱(cheng)為(wei)二(er)級(ji)種(zhong)子，將二(er)級(ji)種(zhong)子轉(zhuan)入(ru)發酵(jiao)罐內發酵(jiao)稱(cheng)為(wei)三(san)級發(fa)酵(jiao)。同樣道(dao)理,使用(yong)三(san)級種(zhong)子的發(fa)酵(jiao),稱(cheng)為(wei)四(si)級發酵(jiao)。

脫(tuo)水存法:

①沙(sha)土(tu)保(bao)存法(fa),能(neng)產孢(bao)子(zi)的細菌、放線菌及黴菌可(ke)采用(yong)此法(fa)保(bao)存，即(ji)將沙和(he)土(tu)以3:2比(bi)例(li)混合經稀酸(suan)處(chu)理洗(xi)凈(jing)過篩(shai),裝(zhuang)入(ru)小(xiao)試(shi)管(guan)內裝置(zhi)高度為(wei)1cm滅(mie)菌2~ 3次(ci),烘幹後(hou)即可(ke)將在(zai)斜面(mian)培養(yang)基上(shang)生(sheng)長良(liang)好(hao)的孢(bao)子(zi),用(yong)無菌蒸餾(liu)水2~ 2.5m制(zhi)成孢子懸液(ye)，吸(xi)取(qu)少許(xu)加(jia)入(ru)沙土(tu)管(guan)中,經(jing)真(zhen)空(kong)抽(chou)幹(gan),外觀呈松(song)散(san)狀(zhuang)態,於4℃冰箱(xiang)保(bao)存,保(bao)存期(qi)可(ke)達5 ~7年(nian)。

②冷(leng)凍幹(gan)燥(zao)法(fa),將孢子(zi)懸浮(fu)液與(yu)保(bao)護劑相混合, 放(fang)在(zai)安(an)瓿管(guan)內於-20 -30℃的乙(yi)醇浴中(zhong)速凍。然(ran)後(hou),在(zai)低溫(wen)下用(yong)真(zhen)空(kong)泵(beng)抽(chou)幹(gan),用(yong)幹(gan)冰使水汽(qi)結(jie)凍,熔(rong)封安(an)瓿管(guan),於低(di)溫(wen)下保(bao)存。保(bao)存期(qi)可(ke)達5~ 10年(nian)之久。

③石(shi)蠟(la)油(you)封存法,在(zai)斜面(mian)菌種(zhong)培養(yang)物(wu)上(shang),倒(dao)上(shang)滅(mie)菌後的石(shi)蠟(la)油(you),高出斜面(mian)1cm,於4℃冰箱(xiang)或低(di)溫(wen)幹燥(zao)處(chu)保(bao)存，此(ci)法(fa)不(bu)適(shi)用(yong)於能(neng)利(li)用(yong)石蠟(la)油(you)作(zuo)碳(tan)源(yuan)的微(wei)生(sheng)物(wu)，保(bao)存期(qi)為(wei)壹(yi)年(nian)以上(shang)。

菌種(zhong)的具(ju)體保(bao)存方法

   微(wei)生(sheng)物(wu)具(ju)有容(rong)易變異的特(te)性(xing)，因此(ci)，在(zai)保(bao)藏過程(cheng)中(zhong)，必(bi)須使微(wei)生(sheng)物(wu)的代(dai)謝(xie)處(chu)於不(bu)活(huo)躍(yue)或相(xiang)對(dui)靜止(zhi)的狀(zhuang)態(tai)，才能(neng)在(zai)壹定(ding)的時間(jian)內使其(qi)不發(fa)生變異(yi)而(er)又(you)保(bao)持生活能(neng)力(li)。

低(di)溫(wen)、幹(gan)燥(zao)和隔絕空(kong)氣是(shi)使微(wei)生(sheng)物(wu)代(dai)謝(xie)能(neng)力(li)降(jiang)低的重要因素(su)，所(suo)以，菌種(zhong)保(bao)藏方法雖(sui)多(duo)，但(dan)都(dou)是(shi)根據(ju)這(zhe)三(san)個因素(su)而(er)設(she)計的。

菌種(zhong)保(bao)藏方法大致可(ke)分(fen)為(wei)以下幾(ji)種(zhong)：

1．傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)保(bao)藏法(fa)又(you)有斜面(mian)培養(yang)、穿(chuan)刺(ci)培(pei)養(yang)、皰肉(rou)培(pei)養基(ji)培養(yang)等(deng)（後(hou)者(zhe)作保(bao)藏厭(yan)氧細菌用(yong)），培養(yang)後於4—6℃冰箱(xiang)內保(bao)存。

2．覆(fu)蓋(gai)保(bao)藏法(fa)是(shi)傳代(dai)培(pei)養的變(bian)相(xiang)方法，能(neng)夠(gou)適(shi)當(dang)延(yan)長保(bao)藏時間(jian)，它(ta)是(shi)在(zai)斜面(mian)培養(yang)物和穿(chuan)刺(ci)培(pei)養(yang)物(wu)上(shang)面(mian)覆(fu)蓋(gai)滅(mie)菌，壹方面(mian)可(ke)防止(zhi)因培(pei)養(yang)基(ji)水分蒸發而引起菌種(zhong)死(si)亡(wang)，另壹方面(mian)可(ke)阻(zu)止(zhi)氧氣進入(ru)，以減(jian)弱(ruo)代謝(xie)作用(yong)。

   載(zai)體保(bao)藏法(fa)是(shi)將微(wei)生(sheng)物(wu)吸(xi)附在(zai)適(shi)當(dang)的載(zai)體，如(ru)土(tu)壤(rang)、沙(sha)子(zi)、矽(gui)膠、濾(lv)紙上(shang)，而(er)後進行幹(gan)燥(zao)的保(bao)藏法(fa)，例(li)如(ru)沙土(tu)保(bao)藏法(fa)和(he)濾(lv)紙保(bao)藏法(fa)應用(yong)相當(dang)廣(guang)泛(fan)。

   寄(ji)主(zhu)保(bao)藏法(fa)用(yong)於目(mu)前尚(shang)不(bu)能(neng)在(zai)人工培(pei)養基(ji)上(shang)生(sheng)長的微(wei)生(sheng)物(wu)，如(ru)病(bing)毒(du)、立克次(ci)氏體、螺(luo)旋(xuan)體等(deng)，它(ta)們(men)必(bi)須在(zai)生活(huo)的動物、昆(kun)蟲(chong)、雞(ji)胚內感染(ran)並(bing)傳代(dai)，此法相當(dang)於壹(yi)般(ban)微(wei)生(sheng)物(wu)的傳(chuan)代(dai)培養(yang)保(bao)藏法(fa)。病(bing)毒(du)等(deng)微(wei)生(sheng)物(wu)亦(yi)可(ke)用(yong)其(qi)他(ta)方法如(ru)液(ye)氮保(bao)藏法(fa)與(yu)冷(leng)凍幹(gan)燥(zao)保(bao)藏法(fa)進(jin)行(xing)保(bao)藏。

5．冷(leng)凍保(bao)藏法(fa)可(ke)分(fen)低溫冰箱(xiang)（-20—-30℃，-50—-80℃）、幹(gan)冰酒精快速(su)凍結(jie)（約-70℃）和(he)液(ye)氮(dan)（-196℃）等(deng)保(bao)藏法(fa)。

冷(leng)凍幹(gan)燥(zao)保(bao)藏法(fa)先(xian)使微(wei)生(sheng)物(wu)在(zai)極低溫(wen)度（-70℃左(zuo)右(you)）下快(kuai)速(su)冷(leng)凍，然(ran)後(hou)在(zai)減壓(ya)下利(li)用(yong)升華現(xian)象(xiang)除(chu)去(qu)水分（真(zhen)空(kong)幹(gan)燥(zao)）。

我(wo)司在(zai)重視產品(pin)質(zhi)量(liang)的同時，也(ye)建(jian)立了壹套集(ji)技(ji)術(shu)支(zhi)持、物流、售後(hou)服務(wu)等(deng)多(duo)個部(bu)門(men)的服務(wu)體系，努力(li)把(ba)我(wo)們(men)方便、快(kuai)捷(jie)、周(zhou)到(dao)的服務(wu)提供給每(mei)壹(yi)個客(ke)戶(hu)。