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TECHNICAL ARTICLES壹(yi)、顯色(se)操作(zuo)的額(e)外(wai)失誤(wu)點顯色(se)液添加與混(hun)合(he)不(bu)均顯色(se)液滴加位(wei)置(zhi)偏差(cha):未(wei)滴加到孔底(di)反應(ying)區域,而(er)是(shi)滴在(zai)孔壁(bi)上方,導(dao)致顯色(se)液與(yu)酶標物(wu)接觸不(bu)充(chong)分(fen),但(dan)部(bu)分(fen)殘(can)留酶標物(wu)會隨(sui)液體流(liu)動集中反應(ying),反而(er)局(ju)部(bu)信(xin)號增(zeng)強;未(wei)充(chong)分(fen)混(hun)勻:添加顯色(se)液後(hou)未(wei)輕輕震(zhen)蕩多孔板(或震(zhen)蕩力(li)度不(bu)足),導(dao)致孔內(nei)酶標物(wu)與顯色(se)液分(fen)布不(bu)均,部(bu)分(fen)區域反應(ying)過(guo)度,整體OD值(zhi)偏(pian)高(gao);顯色(se)液分(fen)裝(zhuang)汙染:將顯色(se)液分(fen)裝(zhuang)到EP管時,使用(yong)了被(bei)酶汙染的移液(ye)器(qi)或(huo)容器(qi),導(dao)致分(fen)裝(zhuang)後顯色(se)液提(ti)前(qian)激(ji)活(huo),加入反應(ying)孔後(hou)快(kuai)速顯色(se)。顯色(se)過(guo)程中的(de)環(huan)境幹擾細節(jie)溫濕(shi)度波(bo)動(dong):顯色(se)時實驗(yan)...
提(ti)高競爭法ELISA的靈敏度是(shi)該技術(shu)發(fa)展和應用(yong)中的(de)核(he)心(xin)挑(tiao)戰。由(you)於(yu)競爭法本身常用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)小分(fen)子(zi)物(wu)質(如(ru)激(ji)素、毒素、藥物(wu)),這些(xie)物(wu)質在(zai)樣(yang)本中含(han)量(liang)極(ji)低(di),因此(ci)提(ti)升(sheng)靈敏度至(zhi)關(guan)重要(yao)。我(wo)們可以(yi)從(cong)**“信(xin)號最(zui)da化(hua)”**和(he)**“背景最(zui)小化(hua)”**兩(liang)個(ge)基(ji)本思路(lu)出發(fa),結合(he)競爭法“反向(xiang)信(xin)號”的(de)特(te)點,系(xi)統(tong)性(xing)地(di)進行優(you)化(hua)。---###壹(yi)、優(you)化(hua)核(he)心試劑(ji)與組分(fen)這(zhe)是最(zui)根(gen)本、最(zui)有(you)xiao的方法,直接從試劑盒(he)的(de)源頭進行改進。1.**使用(yong)超高(gao)親和力抗(kang)體*****原(yuan)理(li)**:在(zai)競爭法中,樣(yang)本中的(de)抗(kang)原(yuan)和(he)標記抗(kang)原(yuan)是(shi)在(zai)爭奪有(you)限的...
ELISA檢(jian)測(ce)的準(zhun)確(que)度並非(fei)單壹(yi)因(yin)素決(jue)定(ding),而(er)是(shi)貫穿於(yu)整個(ge)實驗(yan)流(liu)程的系(xi)統(tong)性(xing)工(gong)程。要保(bao)證其(qi)準確(que)度,需(xu)要(yao)從**“人(ren)、機、料、法、環(huan)”**五個(ge)方面進行全fang位(wei)的(de)質量(liang)控制。這五個(ge)方面是實驗(yan)室(shi)質(zhi)量(liang)管理的核心(xin),同樣(yang)適用(yong)於(yu)保(bao)證ELISA檢(jian)測(ce)的準(zhun)確(que)度。---###**1.料-試(shi)劑(ji)和樣(yang)本的質(zhi)量(liang)**這是(shi)保(bao)證準(zhun)確度的(de)**物(wu)質基(ji)礎(chu)**。***試(shi)劑盒(he)質(zhi)量(liang):*****選擇(ze)可靠(kao)品(pin)牌(pai):**選擇(ze)經過(guo)權(quan)wei機(ji)構(如(ru)CFDA/NMPA,FDA,CE)認證、信(xin)譽良好(hao)、文(wen)獻(xian)引用(yong)廣(guang)泛(fan)的品(pin)牌(pai)。***正確(que)儲(chu)存與(yu)運輸:**...
植物(wu)ELISA(酶聯(lian)免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)測(ce)定)試(shi)劑(ji)盒(he)是(shi)壹(yi)種基於(yu)免(mian)疫(yi)學原(yuan)理(li)的高靈敏度檢(jian)測(ce)技術(shu),廣(guang)泛(fan)應用(yong)於(yu)植物(wu)激(ji)素、蛋白(bai)質等(deng)目(mu)標物(wu)的檢(jian)測(ce)。其(qi)核心(xin)優(you)勢在(zai)於(yu)能(neng)夠(gou)實現(xian)高(gao)特(te)異性檢(jian)測(ce),即使在(zai)復(fu)雜(za)的(de)生物(wu)樣(yang)本中也(ye)能(neng)準確(que)識(shi)別(bie)和定量(liang)目(mu)標分(fen)子(zi)。這(zhe)種技術(shu)在(zai)植物(wu)生理(li)學、分(fen)子(zi)生物(wu)學以(yi)及(ji)農(nong)業科學研究(jiu)中具有重要(yao)意(yi)義(yi)。以(yi)下(xia)將解析(xi)植物(wu)ELISA試劑(ji)盒(he)的(de)核心技術(shu),探討(tao)其(qi)如(ru)何(he)實現(xian)高(gao)特(te)異性檢(jian)測(ce)。壹(yi)、抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反應(ying)的(de)特(te)異性基(ji)礎(chu)核心在(zai)於(yu)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反應(ying)的(de)高(gao)度特(te)異性。抗(kang)體是壹(yi)種具有高(gao)度特(te)異性的(de)免(mian)疫(yi)球蛋白(bai),能(neng)夠(gou)與特(te)定(ding)的(de)抗(kang)原(yuan)(如(ru)植物(wu)激(ji)素或蛋(dan)白質(zhi))...
植物(wu)ELISA試劑(ji)盒(he)預(yu)實驗(yan)的(de)核(he)心(xin)目(mu)的(de)是(shi)摸索(suo)最(zui)佳實驗(yan)條(tiao)件,排查樣(yang)本、試劑(ji)兼(jian)容(rong)性(xing)問題,避(bi)免正(zheng)式實驗(yan)因(yin)條(tiao)件不(bu)當導(dao)致失敗。其(qi)關鍵(jian)操作(zuo)步驟和核心目(mu)標如(ru)下:1.樣(yang)本稀釋度篩選(xuan):用(yong)1-2個(ge)代(dai)表(biao)性樣(yang)本,設置(zhi)3-5個(ge)梯(ti)度稀釋度(如(ru)1:10、1:50、1:100等),確定能(neng)使檢(jian)測(ce)值(zhi)落(luo)在(zai)試劑(ji)盒(he)標準曲線線(xian)性(xing)範(fan)圍內(nei)的最(zui)佳稀釋比,避(bi)免信(xin)號過(guo)強或過(guo)弱。2.試(shi)劑(ji)有(you)效性(xing)驗證:快(kuai)速檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)內(nei)關鍵(jian)試劑(ji)(如(ru)酶標抗(kang)體、底物(wu))是否(fou)在(zai)有效(xiao)期內(nei)且活(huo)性正常,通(tong)過(guo)陽性(xing)對(dui)照(zhao)和陰(yin)性對照(zhao)的信(xin)號差(cha)值(zhi),判(pan)斷試劑(ji)是(shi)否(fou)可用(yong)。3.幹擾因(yin)素排...
###**第(di)壹(yi)部(bu)分(fen):如(ru)何(he)預防(fang)蛋(dan)白(bai)質(zhi)變(bian)性(目(mu)標是“保(bao)護(hu)它(ta)”)**這種情況主要發(fa)生在(zai)生物(wu)實驗(yan)、藥(yao)品(pin)生產(chan)和(he)儲(chu)存、以(yi)及(ji)壹(yi)些(xie)需(xu)要(yao)保(bao)留天(tian)然(ran)營養的(de)食品(pin)中。核(he)心(xin)思(si)想(xiang)是**創造(zao)壹(yi)個(ge)穩(wen)定的(de)環(huan)境,避(bi)免破(po)壞因(yin)素**。####**1.控制溫度*****方法:****低溫操作(zuo)與(yu)儲(chu)存**。在(zai)提(ti)取(qu)、純(chun)化(hua)蛋(dan)白質時(shi),全程在(zai)冰浴或4°C冷(leng)室中進行。長期儲(chu)存需(xu)放(fang)入-20°C或(huo)-80°C冰箱。***原(yuan)理(li):**高溫會加劇(ju)分(fen)子(zi)熱(re)運動(dong),破(po)壞維持(chi)蛋(dan)白質空(kong)間(jian)結構的(de)氫鍵(jian)等次級鍵(jian)。低溫(wen)則能(neng)減(jian)緩(huan)這壹(yi)過(guo)程。***註意(yi):**避(bi)免反復(fu)凍(dong)融...
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