人(ren)空腸(chang)彎(wan)曲(qu)菌黏附蛋白(bai)(PEB1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

檢(jian)測(ce)原理

試(shi)劑(ji)盒(he)采用(yong)雙(shuang)抗原壹-步(bu)夾心(xin)法酶聯(lian)免(mian)疫吸附試(shi)驗(ELISA) 。往(wang)預先(xian)包(bao)被(bei)病(bing)毒(du)性(xing)腹瀉病(bing)毒(du)抗ti的(de)包(bao)被(bei)微(wei)孔中(zhong)，依次(ci)加(jia)入標本、HRP標記的(de)檢(jian)測(ce)抗原，經過(guo)溫育(yu)並徹di洗(xi)滌(di)。用(yong)底(di)物TMB顯(xian)色(se)，TMB在(zai)過氧(yang)化物酶的(de)催化下轉(zhuan)化(hua)成藍(lan)色(se)，並在(zai)suan的(de)作(zuo)用(yong)下轉(zhuan)化(hua)成最(zui)終(zhong)的(de)黃色(se)。用(yong)酶(mei)標儀(yi)在(zai)450NM波(bo)長下測(ce)定(ding)吸(xi)光度(OD值(zhi)) ，與(yu)CUTOFF值(zhi)相比較，從而判(pan)定(ding)標本中(zhong)豬病(bing)毒(du)性(xing)腹瀉病(bing)毒(du)(BVDV) 的(de)存在與否(fou)。

樣(yang)品(pin)收(shou)集、處(chu)理及(ji)保存(cun)方(fang)法

1.血(xue)清(qing):使(shi)用(yong)不含(han)熱(re)原和內毒(du)素(su)的(de)試管(guan)，操作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避免任何細胞(bao)刺激(ji)，收集(ji)血(xue)液後，3000轉(zhuan)離心(xin)10分鐘將血(xue)清(qing)和紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速小心地分離。

2.血(xue)漿: EDTA、檸(ning)檬(meng)suan鹽(yan)或肝(gan)素抗凝。3000轉(zhuan)離心(xin)30分鐘取(qu)上清(qing)。

3.細(xi)胞(bao)上清(qing)液: 3000轉(zhuan)離心(xin)10分鐘去除顆(ke)粒(li)和聚合物。

4.組(zu)織(zhi)勻漿(jiang):將組(zu)織(zhi)加(jia)入適(shi)量(liang)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)搗碎。3000轉(zhuan) 離心(xin)10分鐘取(qu)上清(qing)。

5.保存(cun):如果(guo)樣(yang)本收(shou)集(ji)後(hou)不及時檢(jian)測(ce)，請(qing)按壹次(ci)用(yong)量(liang)分裝，凍(dong)存於-20°C， 避(bi)免反(fan)

復(fu)凍融(rong)，在室(shi)溫下解凍(dong)並(bing)確(que)保樣(yang)品(pin)均(jun)勻地充分解凍(dong)。

自(zi)備(bei)物品(pin)

1.酶(mei)標儀(yi)(450NM)

2.高(gao)精(jing)度加(jia)樣(yang)器(qi)及(ji)槍頭(tou): 0.5-10UL、 2-20UL、 20-200UL、 200-1000UL

3.37℃恒(heng)溫箱

操作(zuo)註(zhu)意(yi)事項

1.試(shi)劑(ji)盒(he)保存(cun)在(zai)2-8°C，使(shi)用(yong)前(qian)室(shi)溫平衡20分鐘。從冰箱取(qu)出的(de)濃縮洗(xi)滌(di)液會(hui)有(you)結晶，這屬(shu)於正(zheng)常現象，水(shui)浴(yu)加(jia)熱使(shi)結晶完(wan)quan溶(rong)解後(hou)再(zai)使(shi)用(yong)。

2.實(shi)驗中(zhong)不用(yong)的(de)板條(tiao)應立(li)即(ji)放回(hui)自(zi)封(feng)袋中(zhong)，密(mi)封(feng)(低溫幹燥)保存(cun)。

3.預(yu)處(chu)理後(hou)的(de)樣(yang)本請(qing)按照操作(zuo)步(bu)驟(zhou)用(yong)樣(yang)ben稀(xi)釋ye適(shi)當(dang)稀釋以(yi)達到試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)的(de)最(zui)jia檢(jian)測(ce)效(xiao)果(guo)。.

4.嚴(yan)格按照說(shuo)明(ming)書(shu)中(zhong)標明(ming)的(de)時間(jian)、加(jia)液量(liang)及順(shun)序(xu)進行溫育(yu)操作(zuo)。

5.所有(you)液體組(zu)分使(shi)用(yong)前(qian)充分搖(yao)勻。

人(ren)空腸(chang)彎(wan)曲(qu)菌黏附蛋白(bai)(PEB1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

常用(yong)方(fang)法：

1. 夾(jia)心法：

夾(jia)心法常用(yong)於檢(jian)測(ce)大(da)分子抗原，壹般的(de)操作(zuo)步(bu)驟(zhou)為(wei):

a. 將具(ju)有(you)專(zhuan)壹性(xing)的(de)抗ti固(gu)著(zhu)（coating）於塑膠孔盤(pan)上(shang)，完(wan)成(cheng)後洗(xi)去多(duo)余抗ti

b. 加(jia)入待測(ce)檢(jian)體，檢(jian)體中(zhong)若含(han)有(you)待測(ce)的(de)抗原，則其(qi)會(hui)與(yu)塑膠孔盤(pan)上(shang)的(de)抗ti進行專壹性(xing)鍵(jian)結

c. 洗(xi)去多(duo)余待測(ce)檢(jian)體，加(jia)入另(ling)壹種(zhong)對抗原專壹的(de)壹次(ci)抗ti，與(yu)待測(ce)抗原進行鍵(jian)結

d. 洗(xi)去多(duo)余未鍵(jian)結壹次(ci)抗ti，加(jia)入帶(dai)有(you)酶(mei)的(de)二次(ci)抗ti，與(yu)壹次(ci)抗ti鍵(jian)結

e. 洗(xi)去多(duo)余未鍵(jian)結二次(ci)抗ti，加(jia)入酶(mei)底(di)物使(shi)酵(jiao)素(su)呈(cheng)色(se)，以肉眼或儀(yi)器(qi)讀取(qu)呈色(se)結果(guo)

原理：針(zhen)對抗原分子上2個(ge)不同抗原決定(ding)簇(cu)的(de)單克隆抗ti分別作(zuo)為(wei)固(gu)相抗ti和(he)酶標抗ti，將大(da)分子抗原分別制(zhi)備(bei)固(gu)相抗原和(he)酶標抗原結合物。

2. 間(jian)接法

間(jian)接法常用(yong)於檢(jian)測(ce)抗ti，壹般的(de)操作(zuo)步(bu)驟(zhou)為(wei)：

a. 將已知(zhi)的(de)抗原固著(zhu)於塑膠孔盤(pan)上(shang)，完(wan)成(cheng)後洗(xi)去多(duo)余的(de)抗原。

b. 加(jia)入待測(ce)檢(jian)體，檢(jian)體中(zhong)若含(han)有(you)待測(ce)的(de)壹次(ci)抗ti，則(ze)其(qi)會(hui)與(yu)塑膠孔盤(pan)上(shang)的(de)抗原進行專壹性(xing)鍵(jian)結。

c. 洗(xi)去多(duo)余待測(ce)檢(jian)體，加(jia)入帶(dai)有(you)酶(mei)的(de)二次(ci)抗ti，與(yu)待測(ce)的(de)壹次(ci)抗ti鍵(jian)結。

d. 洗(xi)去多(duo)余未鍵(jian)結二次(ci)抗ti，加(jia)入酶(mei)底(di)物使(shi)酶呈(cheng)色(se)，藉(ji)儀(yi)器(qi)（ELISA reader）測(ce)定(ding)塑膠盤中(zhong)的(de)吸光值（OD值(zhi)），以評(ping)估(gu)有(you)色(se)終(zhong)產(chan)物的(de)含(han)量(liang)即可(ke)測(ce)量(liang)待測(ce)抗ti的(de)含(han)量(liang)。

原理：利用(yong)酶(mei)標記的(de)抗抗ti以(yi)檢(jian)測(ce)已與(yu)固(gu)相結合的(de)受(shou)檢(jian)抗ti。

3. 競(jing)爭(zheng)法

競(jing)爭(zheng)法是壹種(zhong)較少(shao)用(yong)到的(de)ELISA檢(jian)測(ce)機(ji)制(zhi)，壹般用(yong)於檢(jian)測(ce)小(xiao)分子抗原，其(qi)操作(zuo)步(bu)驟(zhou)為(wei)：

a. 將具(ju)有(you)專(zhuan)壹性(xing)的(de)抗ti固(gu)著(zhu)於塑膠孔盤(pan)上(shang)，完(wan)成(cheng)後洗(xi)去多(duo)余抗ti

b. 加(jia)入待測(ce)檢(jian)體，使(shi)檢(jian)體中(zhong)的(de)待測(ce)抗原與塑膠孔盤(pan)上(shang)的(de)抗ti進行專壹性(xing)鍵(jian)結

c. 加(jia)入帶(dai)有(you)酶(mei)的(de)抗原，此抗原也可(ke)與(yu)塑膠孔盤(pan)上(shang)的(de)抗ti進行專壹性(xing)鍵(jian)結，由於塑膠孔盤(pan)上(shang)固著(zhu)的(de)抗ti數(shu)量(liang)有(you)限(xian)，因(yin)此當(dang)檢(jian)體中(zhong)抗原的(de)量(liang)越(yue)多，則(ze)帶(dai)有(you)酶(mei)的(de)抗原可(ke)鍵(jian)結的(de)固著(zhu)抗ti就越(yue)少(shao)，亦即(ji)，兩(liang)種抗原皆競(jing)相與塑膠孔盤(pan)上(shang)抗ti鍵(jian)結，即所謂(wei)競(jing)爭(zheng)法之(zhi)由來(lai)。

d. 洗(xi)去檢(jian)體與(yu)帶(dai)有(you)酶(mei)的(de)抗原，加(jia)入酶(mei)底(di)物使(shi)酶呈(cheng)色(se)，當(dang)檢(jian)體中(zhong)抗原量(liang)越(yue)多，代(dai)表塑膠孔盤(pan)內留(liu)下之(zhi)帶(dai)有(you)酶(mei)的(de)抗原越(yue)少(shao)，顯(xian)色(se)也就越(yue)淺。

e. 當(dang)需要(yao)偵(zhen)測(ce)無(wu)法獲得兩(liang)種以上(shang)單(dan)壹性(xing)抗ti的(de)抗原，或是(shi)不易(yi)得到足夠的(de)純(chun)化抗ti以(yi)固著(zhu)於孔盤(pan)上時，壹般會(hui)考慮使(shi)用(yong)競(jing)爭(zheng)法ELISA。

標本要(yao)求(qiu) :

1．不能檢(jian)測(ce)含(han)NaN3的(de)樣(yang)品(pin)，因(yin)NaN3辣(la)根過氧化(hua)物酶的(de)（HRP）活(huo)性(xing)。

2．標本采(cai)集(ji)後(hou)盡(jin)早(zao)進行提取(qu)，提取(qu)按相關文(wen)獻(xian)進行，提取(qu)後應(ying)盡(jin)快進行實(shi)驗。若不能馬(ma)上進行試驗，可(ke)將標本放於-20℃保存(cun)，但(dan)應避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)。

3.各(ge)步加(jia)樣(yang)均應(ying)使(shi)用(yong)加(jia)樣(yang)器(qi)，並(bing)經常校對其(qi)準確(que)性，以避免(mian)試驗誤差。壹次(ci)加(jia)樣(yang)時間(jian)控

制(zhi)在(zai)5分鐘內，如標本數(shu)量(liang)多，推薦使(shi)用(yong)排(pai)槍加(jia)樣(yang)。

4.請(qing)每(mei)次(ci)測(ce)定(ding)的(de)同時做(zuo)標準曲(qu)線(xian)，做復(fu)孔。如標本中(zhong)待測(ce)物質含(han)量(liang)過高(gao)(樣(yang)本OD值(zhi)大(da)於

標準品(pin)孔(kong)孔的(de)OD值)，請(qing)先(xian)用(yong)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液稀釋壹定(ding)倍(bei)數(n倍) 後(hou)再(zai)測(ce)定(ding)，計算時請(qing)

後(hou)乘(cheng)以(yi)總(zong)稀(xi)釋倍(bei)數(xnx5)

5.封(feng)板膜(mo)只(zhi)限壹次(ci)性使(shi)用(yong)，以(yi)避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙染(ran)。

6.底(di)物請(qing)避(bi)光保存(cun)。

7.嚴(yan)格按照說(shuo)明(ming)書(shu)的(de)操作(zuo)進行，試驗結果(guo)判定(ding)必(bi)須以酶標儀(yi)讀數(shu)為(wei)準.

8.所有(you)樣(yang)品(pin)，洗(xi)滌(di)液和各種(zhong)廢(fei)棄(qi)物都應按傳染(ran)物處(chu)理。

9.本試(shi)劑(ji)不同批(pi)號組(zu)分不得混用(yong)。

訂(ding)購(gou)說(shuo)明(ming):

※關(guan)於產(chan)品(pin)售(shou)價,由於市場的(de)不穩定(ding)性(xing),價格變動(dong)是(shi)必然(ran)的(de),但是我(wo)們可(ke)以(yi)提(ti)供當(dang)下公(gong)允的(de)市場價格,批量(liang)訂(ding)購(gou)還可(ke)享(xiang)受(shou)相應的(de)優惠活(huo)動(dong);

※關(guan)於產(chan)品(pin)的(de)具體信息(xi),本頁面展(zhan)示(shi)的(de)內容僅供參考,而詳(xiang)細的(de)產(chan)品(pin)信(xin)息,可(ke)以(yi)咨(zi)詢(xun)我(wo)們;

※關(guan)於運費(fei)問題,批量(liang)訂(ding)購(gou)可(ke)免(mian)郵,本品(pin)采(cai)用(yong)低溫箱冷凍(dong)保存(cun);

※關(guan)於服務(wu),我(wo)們提供完(wan)整(zheng)的(de)售(shou)前(qian)售(shou)後(hou)服務(wu),並(bing)貫穿妳的(de)整(zheng)個(ge)實(shi)驗過程,如遇技術(shu)問題,可(ke)隨(sui)時聯(lian)系(xi)我(wo)們,我(wo)們真誠地為您答疑(yi)解惑。

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