人衣(yi)原(yuan)體蛋白酶(mei)樣(yang)活(huo)性(CPAF)ELISA試(shi)劑盒

檢測(ce)原(yuan)理

試(shi)劑盒采(cai)用雙(shuang)抗(kang)原(yuan)壹-步夾(jia)心法(fa)酶(mei)聯(lian)免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)試(shi)驗(ELISA) 。往(wang)預(yu)先包(bao)被病毒性腹(fu)瀉(xie)病毒抗(kang)ti的(de)包(bao)被微(wei)孔(kong)中(zhong)，依次加(jia)入(ru)標(biao)本(ben)、HRP標記的(de)檢(jian)測(ce)抗(kang)原(yuan)，經過(guo)溫(wen)育並徹di洗滌。用底物(wu)TMB顯色(se)，TMB在過(guo)氧(yang)化(hua)物酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉化成藍(lan)色(se)，並在suan的(de)作(zuo)用下(xia)轉化成最終(zhong)的(de)黃色(se)。用酶(mei)標(biao)儀(yi)在450NM波長下(xia)測(ce)定吸(xi)光度(du)(OD值) ，與CUTOFF值相比(bi)較，從(cong)而(er)判(pan)定標(biao)本(ben)中豬病毒性腹(fu)瀉(xie)病毒(BVDV) 的(de)存在與否(fou)。

樣(yang)品(pin)收(shou)集(ji)、處(chu)理及保存方法(fa)

1.血清(qing):使用不含熱原(yuan)和(he)內毒素(su)的(de)試(shi)管，操作(zuo)過(guo)程(cheng)中避(bi)免(mian)任何(he)細(xi)胞刺(ci)激(ji)，收集(ji)血(xue)液後，3000轉離心10分(fen)鐘(zhong)將血(xue)清(qing)和(he)紅(hong)細(xi)胞迅速小心地(di)分(fen)離。

2.血漿: EDTA、檸檬suan鹽或肝(gan)素(su)抗(kang)凝。3000轉離心30分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清(qing)。

3.細胞上(shang)清(qing)液: 3000轉離心10分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合(he)物(wu)。

4.組(zu)織(zhi)勻漿:將組(zu)織(zhi)加(jia)入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽(yan)水搗碎(sui)。3000轉 離心10分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清(qing)。

5.保存:如果樣(yang)本(ben)收(shou)集(ji)後不及時檢測(ce)，請(qing)按(an)壹次用量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍存於-20°C， 避(bi)免(mian)反

復凍(dong)融(rong)，在室溫(wen)下解凍並確(que)保樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解凍。

自備物品

1.酶(mei)標(biao)儀(yi)(450NM)

2.高(gao)精(jing)度(du)加(jia)樣(yang)器(qi)及槍頭(tou): 0.5-10UL、 2-20UL、 20-200UL、 200-1000UL

3.37℃恒(heng)溫(wen)箱

操作註(zhu)意事(shi)項(xiang)

1.試(shi)劑盒保(bao)存在2-8°C，使用前室溫(wen)平(ping)衡20分(fen)鐘(zhong)。從(cong)冰(bing)箱取(qu)出的(de)濃(nong)縮洗(xi)滌液會有結晶，這(zhe)屬於(yu)正(zheng)常(chang)現象(xiang)，水浴加(jia)熱使結晶完quan溶解後再(zai)使用。

2.實驗中(zhong)不用的(de)板條(tiao)應(ying)立即放回(hui)自(zi)封(feng)袋(dai)中，密封(feng)(低(di)溫(wen)幹燥(zao))保存。

3.預(yu)處(chu)理後的(de)樣(yang)本(ben)請(qing)按(an)照(zhao)操作(zuo)步(bu)驟(zhou)用樣(yang)ben稀釋ye適當稀釋以達(da)到試(shi)劑盒的(de)的(de)最jia檢測(ce)效(xiao)果(guo)。.

4.嚴格按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)中(zhong)標明(ming)的(de)時(shi)間(jian)、加(jia)液(ye)量(liang)及順序(xu)進(jin)行(xing)溫(wen)育操(cao)作。

5.所有液(ye)體組(zu)分(fen)使(shi)用前充(chong)分(fen)搖(yao)勻(yun)。

人衣(yi)原(yuan)體蛋白酶(mei)樣(yang)活(huo)性(CPAF)ELISA試(shi)劑盒

常(chang)用方法(fa)：

1. 夾(jia)心法(fa)：

夾(jia)心法(fa)常(chang)用於(yu)檢測(ce)大(da)分(fen)子(zi)抗(kang)原(yuan)，壹般(ban)的(de)操(cao)作(zuo)步驟為:

a. 將具(ju)有專壹性的(de)抗(kang)ti固著（coating）於塑膠孔(kong)盤上(shang)，完成後洗去多余(yu)抗(kang)ti

b. 加(jia)入(ru)待(dai)測(ce)檢(jian)體(ti)，檢(jian)體中若(ruo)含有(you)待(dai)測(ce)的(de)抗(kang)原(yuan)，則其會與塑膠孔(kong)盤上(shang)的(de)抗(kang)ti進(jin)行(xing)專壹性鍵結

c. 洗去多(duo)余(yu)待測(ce)檢(jian)體(ti)，加(jia)入(ru)另壹種對抗(kang)原(yuan)專壹的(de)壹次抗(kang)ti，與待測(ce)抗(kang)原(yuan)進(jin)行(xing)鍵結

d. 洗去多(duo)余(yu)未鍵結壹次抗(kang)ti，加(jia)入(ru)帶有酶(mei)的(de)二(er)次(ci)抗(kang)ti，與壹次抗(kang)ti鍵結

e. 洗去多(duo)余(yu)未鍵結二次(ci)抗(kang)ti，加(jia)入(ru)酶(mei)底物(wu)使酵素(su)呈(cheng)色(se)，以肉(rou)眼或儀器讀(du)取(qu)呈(cheng)色(se)結果

原(yuan)理：針對抗(kang)原(yuan)分(fen)子(zi)上(shang)2個(ge)不同抗(kang)原(yuan)決定簇(cu)的(de)單克(ke)隆抗(kang)ti分(fen)別(bie)作為固相(xiang)抗(kang)ti和(he)酶(mei)標(biao)抗(kang)ti，將大(da)分(fen)子(zi)抗(kang)原(yuan)分(fen)別(bie)制備固相抗(kang)原(yuan)和(he)酶(mei)標(biao)抗(kang)原(yuan)結合(he)物(wu)。

2. 間接法(fa)

間接法(fa)常(chang)用於(yu)檢測(ce)抗(kang)ti，壹般(ban)的(de)操(cao)作(zuo)步驟為：

a. 將已(yi)知的(de)抗(kang)原(yuan)固著於(yu)塑膠孔(kong)盤上(shang)，完成後洗去多余(yu)的(de)抗(kang)原(yuan)。

b. 加(jia)入(ru)待(dai)測(ce)檢(jian)體(ti)，檢(jian)體中若(ruo)含有(you)待(dai)測(ce)的(de)壹次抗(kang)ti，則其會與塑膠孔(kong)盤上(shang)的(de)抗(kang)原(yuan)進(jin)行(xing)專壹性鍵結。

c. 洗去多(duo)余(yu)待測(ce)檢(jian)體(ti)，加(jia)入(ru)帶有酶(mei)的(de)二(er)次(ci)抗(kang)ti，與待測(ce)的(de)壹次抗(kang)ti鍵結。

d. 洗去多(duo)余(yu)未鍵結二次(ci)抗(kang)ti，加(jia)入(ru)酶(mei)底物(wu)使酶(mei)呈(cheng)色(se)，藉儀(yi)器(qi)（ELISA reader）測(ce)定塑膠盤中的(de)吸(xi)光值(zhi)（OD值），以評(ping)估有色(se)終(zhong)產(chan)物的(de)含(han)量(liang)即可測(ce)量(liang)待測(ce)抗(kang)ti的(de)含(han)量(liang)。

原(yuan)理：利用酶(mei)標(biao)記的(de)抗(kang)抗(kang)ti以檢(jian)測(ce)已(yi)與(yu)固(gu)相結合(he)的(de)受檢(jian)抗(kang)ti。

3. 競爭法(fa)

競爭法(fa)是(shi)壹種較少(shao)用到的(de)ELISA檢測(ce)機制，壹般(ban)用於(yu)檢測(ce)小分(fen)子(zi)抗(kang)原(yuan)，其操作(zuo)步驟為：

a. 將具(ju)有專壹性的(de)抗(kang)ti固著於(yu)塑膠孔(kong)盤上(shang)，完成後洗去多余(yu)抗(kang)ti

b. 加(jia)入(ru)待(dai)測(ce)檢(jian)體(ti)，使(shi)檢體中的(de)待(dai)測(ce)抗(kang)原(yuan)與塑膠孔(kong)盤上(shang)的(de)抗(kang)ti進(jin)行(xing)專壹性鍵結

c. 加(jia)入(ru)帶有酶(mei)的(de)抗(kang)原(yuan)，此抗(kang)原(yuan)也可與(yu)塑膠孔(kong)盤上(shang)的(de)抗(kang)ti進(jin)行(xing)專壹性鍵結，由(you)於塑膠孔(kong)盤上(shang)固(gu)著的(de)抗(kang)ti數量(liang)有限(xian)，因(yin)此當檢(jian)體中抗(kang)原(yuan)的(de)量(liang)越多(duo)，則(ze)帶有酶(mei)的(de)抗(kang)原(yuan)可鍵結的(de)固(gu)著(zhu)抗(kang)ti就越少(shao)，亦(yi)即，兩種(zhong)抗(kang)原(yuan)皆競相(xiang)與(yu)塑膠孔(kong)盤上(shang)抗(kang)ti鍵結，即所謂(wei)競爭法(fa)之由(you)來(lai)。

d. 洗去檢(jian)體與帶有酶(mei)的(de)抗(kang)原(yuan)，加(jia)入(ru)酶(mei)底物(wu)使酶(mei)呈(cheng)色(se)，當(dang)檢(jian)體(ti)中抗(kang)原(yuan)量(liang)越多(duo)，代(dai)表(biao)塑膠孔(kong)盤內留(liu)下(xia)之帶有酶(mei)的(de)抗(kang)原(yuan)越少(shao)，顯色(se)也就越淺(qian)。

e. 當需要(yao)偵(zhen)測(ce)無(wu)法(fa)獲(huo)得(de)兩種(zhong)以上(shang)單壹性抗(kang)ti的(de)抗(kang)原(yuan)，或是(shi)不易(yi)得(de)到足夠(gou)的(de)純(chun)化(hua)抗(kang)ti以固(gu)著(zhu)於孔(kong)盤上(shang)時(shi)，壹般(ban)會考慮使用競爭法(fa)ELISA。

標本要(yao)求 :

1．不能(neng)檢測(ce)含(han)NaN3的(de)樣(yang)品(pin)，因(yin)NaN3辣(la)根(gen)過(guo)氧(yang)化(hua)物酶(mei)的(de)（HRP）活(huo)性。

2．標本采(cai)集後盡(jin)早(zao)進(jin)行(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按(an)相關(guan)文(wen)獻(xian)進(jin)行(xing)，提(ti)取(qu)後應(ying)盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)實驗。若(ruo)不能(neng)馬(ma)上(shang)進(jin)行(xing)試(shi)驗，可(ke)將標(biao)本放於(yu)-20℃保存，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反復凍(dong)融(rong)。

3.各步加(jia)樣(yang)均(jun)應(ying)使用加(jia)樣(yang)器(qi)，並經常(chang)校對其(qi)準(zhun)確(que)性，以避(bi)免(mian)試(shi)驗誤差(cha)。壹次加(jia)樣(yang)時(shi)間(jian)控(kong)

制在5分(fen)鐘(zhong)內，如標(biao)本數(shu)量(liang)多，推(tui)薦使(shi)用排(pai)槍加(jia)樣(yang)。

4.請(qing)每(mei)次測(ce)定的(de)同(tong)時(shi)做標準曲(qu)線(xian)，做復孔(kong)。如(ru)標本中待(dai)測(ce)物(wu)質(zhi)含(han)量(liang)過(guo)高(gao)(樣(yang)本(ben)OD值(zhi)大(da)於(yu)

標準品(pin)孔(kong)孔(kong)的(de)OD值(zhi))，請(qing)先(xian)用樣(yang)品(pin)稀釋液稀釋壹定倍數(shu)(n倍) 後再(zai)測(ce)定，計(ji)算時請(qing)

後乘以總稀釋倍數(shu)(xnx5)

5.封(feng)板膜(mo)只限(xian)壹次性使用，以避(bi)免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

6.底物(wu)請(qing)避(bi)光(guang)保存。

7.嚴格按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)的(de)操(cao)作(zuo)進(jin)行(xing)，試(shi)驗結果判(pan)定必(bi)須以酶(mei)標(biao)儀(yi)讀(du)數為準.

8.所有樣(yang)品(pin)，洗(xi)滌(di)液(ye)和(he)各(ge)種(zhong)廢棄(qi)物都(dou)應(ying)按(an)傳染(ran)物處(chu)理。

9.本試(shi)劑不同批(pi)號組(zu)分(fen)不得(de)混用。

訂購(gou)說明(ming):

※關(guan)於(yu)產(chan)品售(shou)價,由(you)於市場的(de)不穩定性,價格變動(dong)是(shi)必(bi)然的(de),但(dan)是(shi)我們可(ke)以提(ti)供(gong)當(dang)下公允的(de)市場價(jia)格,批量(liang)訂購(gou)還可享(xiang)受相(xiang)應(ying)的(de)優惠活動(dong);

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