人乳酸脫氫(qing)酶(LDH)ELISA試劑(ji)盒(he)

檢測原(yuan)理

試劑盒(he)采用雙抗原(yuan)壹-步(bu)夾心法酶聯(lian)免(mian)疫(yi)吸附(fu)試驗(ELISA) 。往預先(xian)包(bao)被病(bing)毒(du)性腹(fu)瀉病(bing)毒(du)抗ti的包(bao)被微(wei)孔(kong)中(zhong)，依次加入(ru)標(biao)本(ben)、HRP標(biao)記的檢(jian)測抗原(yuan)，經(jing)過(guo)溫(wen)育並徹(che)di洗(xi)滌(di)。用(yong)底物TMB顯(xian)色(se)，TMB在(zai)過氧(yang)化物酶的催(cui)化(hua)下轉(zhuan)化成(cheng)藍(lan)色(se)，並在(zai)suan的作(zuo)用下轉(zhuan)化成(cheng)最終(zhong)的(de)黃色(se)。用酶標(biao)儀在(zai)450NM波長(chang)下測定(ding)吸(xi)光(guang)度(OD值) ，與CUTOFF值相比(bi)較(jiao)，從(cong)而(er)判(pan)定(ding)標(biao)本(ben)中(zhong)豬(zhu)病(bing)毒(du)性腹(fu)瀉病(bing)毒(du)(BVDV) 的存在(zai)與否(fou)。

樣(yang)品收集(ji)、處理及保(bao)存方法

1.血清(qing):使用不(bu)含(han)熱(re)原和(he)內(nei)毒(du)素的試管(guan)，操作(zuo)過程中(zhong)避免(mian)任(ren)何(he)細(xi)胞刺激(ji)，收(shou)集(ji)血液(ye)後，3000轉離心10分鐘將(jiang)血(xue)清(qing)和(he)紅細(xi)胞迅速小心地(di)分(fen)離。

2.血漿: EDTA、檸檬suan鹽或(huo)肝(gan)素抗凝。3000轉離心30分鐘取上(shang)清(qing)。

3.細(xi)胞上(shang)清(qing)液(ye): 3000轉離心10分鐘去(qu)除(chu)顆(ke)粒(li)和聚合物。

4.組織(zhi)勻(yun)漿(jiang):將(jiang)組織(zhi)加(jia)入(ru)適量(liang)生理鹽水(shui)搗碎(sui)。3000轉 離心10分鐘取上(shang)清(qing)。

5.保存:如果(guo)樣(yang)本(ben)收(shou)集(ji)後不(bu)及時(shi)檢(jian)測，請(qing)按壹次用量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存於(yu)-20°C， 避免(mian)反(fan)

復凍(dong)融(rong)，在(zai)室溫(wen)下解(jie)凍(dong)並確(que)保(bao)樣(yang)品均勻地(di)充(chong)分解(jie)凍(dong)。

自備物(wu)品

1.酶標(biao)儀(450NM)

2.高精(jing)度加樣(yang)器(qi)及槍頭: 0.5-10UL、 2-20UL、 20-200UL、 200-1000UL

3.37℃恒(heng)溫(wen)箱(xiang)

操作(zuo)註(zhu)意(yi)事項

1.試劑盒(he)保(bao)存在(zai)2-8°C，使用前室溫(wen)平(ping)衡20分鐘。從(cong)冰(bing)箱(xiang)取出(chu)的濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液(ye)會有(you)結晶(jing)，這屬於(yu)正(zheng)常(chang)現(xian)象，水(shui)浴加(jia)熱(re)使結晶(jing)完(wan)quan溶解後(hou)再(zai)使(shi)用(yong)。

2.實驗中(zhong)不(bu)用的板(ban)條(tiao)應(ying)立即放(fang)回(hui)自封袋(dai)中(zhong)，密封(低溫(wen)幹(gan)燥(zao))保存。

3.預處理後(hou)的樣(yang)本(ben)請(qing)按照(zhao)操作(zuo)步(bu)驟(zhou)用樣(yang)ben稀釋ye適當稀(xi)釋以(yi)達(da)到(dao)試(shi)劑(ji)盒的(de)的(de)最jia檢測效(xiao)果(guo)。.

4.嚴格按照(zhao)說明(ming)書(shu)中(zhong)標(biao)明(ming)的(de)時(shi)間、加(jia)液(ye)量(liang)及順(shun)序(xu)進(jin)行溫(wen)育操作(zuo)。

5.所有(you)液體(ti)組分使用(yong)前充分(fen)搖勻(yun)。

人乳酸脫氫(qing)酶(LDH)ELISA試劑(ji)盒(he)

常用方法：

1. 夾心法：

夾心法常用於(yu)檢測大分子(zi)抗原(yuan)，壹般(ban)的(de)操作(zuo)步(bu)驟(zhou)為:

a. 將(jiang)具(ju)有(you)專壹性(xing)的抗ti固著（coating）於(yu)塑膠孔盤(pan)上(shang)，完(wan)成(cheng)後洗(xi)去(qu)多余抗ti

b. 加入待(dai)測檢(jian)體(ti)，檢體(ti)中(zhong)若含(han)有(you)待測的(de)抗原(yuan)，則(ze)其會與塑膠孔(kong)盤(pan)上(shang)的抗ti進(jin)行專壹性(xing)鍵結

c. 洗(xi)去(qu)多余待測檢(jian)體(ti)，加入(ru)另(ling)壹種(zhong)對(dui)抗原(yuan)專(zhuan)壹的(de)壹次(ci)抗ti，與待測抗原(yuan)進(jin)行鍵結

d. 洗(xi)去(qu)多余未鍵結壹次(ci)抗ti，加入帶(dai)有(you)酶的二(er)次抗ti，與壹次(ci)抗ti鍵結

e. 洗(xi)去(qu)多余未鍵結二(er)次抗ti，加入酶底物使酵(jiao)素呈色(se)，以肉眼(yan)或(huo)儀器讀(du)取呈色(se)結果(guo)

原理：針(zhen)對(dui)抗原(yuan)分(fen)子(zi)上(shang)2個不同(tong)抗原(yuan)決(jue)定(ding)簇(cu)的(de)單(dan)克隆(long)抗ti分別作(zuo)為固相抗ti和酶標(biao)抗ti，將(jiang)大(da)分(fen)子(zi)抗原(yuan)分(fen)別制(zhi)備(bei)固相抗原(yuan)和酶標(biao)抗原(yuan)結合物。

2. 間接(jie)法

間接(jie)法常用於(yu)檢測抗ti，壹般(ban)的(de)操作(zuo)步(bu)驟(zhou)為：

a. 將(jiang)已(yi)知的(de)抗原(yuan)固(gu)著(zhu)於(yu)塑膠孔盤(pan)上(shang)，完(wan)成(cheng)後洗(xi)去(qu)多余的抗原(yuan)。

b. 加入待(dai)測檢(jian)體(ti)，檢體(ti)中(zhong)若含(han)有(you)待測的(de)壹次(ci)抗ti，則其會與塑膠孔(kong)盤(pan)上(shang)的抗原(yuan)進(jin)行專壹性(xing)鍵結。

c. 洗(xi)去(qu)多余待測檢(jian)體(ti)，加入(ru)帶(dai)有(you)酶的二(er)次抗ti，與待測的(de)壹次(ci)抗ti鍵結。

d. 洗(xi)去(qu)多余未鍵結二(er)次抗ti，加入酶底物使酶呈色(se)，藉儀器（ELISA reader）測定(ding)塑(su)膠(jiao)盤(pan)中(zhong)的(de)吸光(guang)值(zhi)（OD值），以評(ping)估有(you)色(se)終產物(wu)的(de)含(han)量(liang)即可(ke)測量(liang)待測抗ti的含(han)量(liang)。

原理：利用酶標(biao)記的抗抗ti以檢測已(yi)與(yu)固(gu)相(xiang)結合的受檢(jian)抗ti。

3. 競爭(zheng)法

競爭(zheng)法是(shi)壹種(zhong)較(jiao)少(shao)用到(dao)的(de)ELISA檢測機制(zhi)，壹般(ban)用(yong)於(yu)檢測小分(fen)子(zi)抗原(yuan)，其操作(zuo)步(bu)驟(zhou)為：

a. 將(jiang)具(ju)有(you)專壹性(xing)的抗ti固著於(yu)塑膠孔盤(pan)上(shang)，完(wan)成(cheng)後洗(xi)去(qu)多余抗ti

b. 加入待(dai)測檢(jian)體(ti)，使檢(jian)體中(zhong)的(de)待測抗原(yuan)與(yu)塑(su)膠孔盤(pan)上(shang)的抗ti進(jin)行專壹性(xing)鍵結

c. 加入帶(dai)有(you)酶的抗原(yuan)，此抗原(yuan)也(ye)可(ke)與塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤(pan)上(shang)的抗ti進(jin)行專壹性(xing)鍵結，由於(yu)塑膠孔盤(pan)上(shang)固著的抗ti數量(liang)有(you)限，因(yin)此當檢(jian)體中(zhong)抗原(yuan)的(de)量(liang)越多(duo)，則帶(dai)有(you)酶的抗原(yuan)可(ke)鍵結的(de)固(gu)著(zhu)抗ti就越少(shao)，亦即(ji)，兩種抗原(yuan)皆(jie)競相(xiang)與(yu)塑(su)膠孔盤(pan)上(shang)抗ti鍵結，即(ji)所謂競(jing)爭(zheng)法之由來。

d. 洗(xi)去(qu)檢體(ti)與帶(dai)有(you)酶的抗原(yuan)，加(jia)入(ru)酶底物使酶呈色(se)，當檢體(ti)中(zhong)抗原(yuan)量(liang)越多(duo)，代(dai)表(biao)塑膠(jiao)孔(kong)盤(pan)內(nei)留(liu)下之帶(dai)有(you)酶的抗原(yuan)越少(shao)，顯(xian)色(se)也(ye)就(jiu)越淺。

e. 當需(xu)要(yao)偵測無法獲(huo)得(de)兩種以上(shang)單(dan)壹性(xing)抗ti的抗原(yuan)，或(huo)是(shi)不(bu)易得(de)到(dao)足(zu)夠(gou)的純(chun)化(hua)抗ti以固著(zhu)於(yu)孔盤(pan)上(shang)時(shi)，壹般(ban)會考慮使(shi)用(yong)競爭(zheng)法ELISA。

標(biao)本(ben)要(yao)求 :

1．不能檢(jian)測含(han)NaN3的(de)樣(yang)品，因(yin)NaN3辣(la)根(gen)過(guo)氧(yang)化物酶的（HRP）活性(xing)。

2．標(biao)本(ben)采集(ji)後盡早進(jin)行提取，提(ti)取按相關文(wen)獻進(jin)行，提取後(hou)應(ying)盡快(kuai)進(jin)行實驗。若不能馬(ma)上(shang)進(jin)行試驗，可(ke)將(jiang)標(biao)本(ben)放(fang)於(yu)-20℃保存，但應(ying)避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)。

3.各(ge)步(bu)加(jia)樣(yang)均應(ying)使(shi)用(yong)加(jia)樣(yang)器(qi)，並經(jing)常(chang)校對(dui)其準(zhun)確性(xing)，以避免(mian)試(shi)驗誤(wu)差(cha)。壹次(ci)加樣(yang)時(shi)間控(kong)

制在(zai)5分鐘(zhong)內(nei)，如(ru)標(biao)本(ben)數(shu)量(liang)多，推薦使用(yong)排(pai)槍加樣(yang)。

4.請每(mei)次(ci)測定(ding)的(de)同(tong)時(shi)做(zuo)標(biao)準(zhun)曲線(xian)，做(zuo)復(fu)孔。如標(biao)本(ben)中(zhong)待(dai)測物(wu)質(zhi)含(han)量(liang)過高(樣(yang)本(ben)OD值(zhi)大(da)於(yu)

標(biao)準(zhun)品孔孔的OD值(zhi))，請(qing)先(xian)用樣(yang)品稀釋液稀(xi)釋(shi)壹定(ding)倍(bei)數(shu)(n倍(bei)) 後(hou)再測定(ding)，計(ji)算時(shi)請(qing)

後乘以(yi)總稀釋倍(bei)數(shu)(xnx5)

5.封板(ban)膜只(zhi)限壹次(ci)性使用(yong)，以避免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

6.底物請避光(guang)保(bao)存。

7.嚴格按照(zhao)說明(ming)書(shu)的(de)操作(zuo)進(jin)行，試驗結果(guo)判定(ding)必(bi)須以(yi)酶標(biao)儀讀數(shu)為準(zhun).

8.所有(you)樣(yang)品，洗(xi)滌(di)液(ye)和各(ge)種(zhong)廢棄(qi)物都(dou)應(ying)按傳染物處理。

9.本試劑(ji)不(bu)同(tong)批號(hao)組分不得(de)混用(yong)。

深圳(zhen)瑞(rui)清(qing)生物(wu)信(xin)息(xi)科技(ji)有(you)限公司的產(chan)品在(zai)相當(dang)寬的領域得(de)到(dao)廣(guang)泛的(de)應(ying)用(yong)，長(chang)期和(he)各(ge)大(da)高校、研究(jiu)機構(gou)、工(gong)廠、企(qi)業等建立了深厚(hou)的(de)合作(zuo)關系(xi)，我(wo)們(men)的(de)企(qi)業文(wen)化(hua)是(shi)為樹(shu)立行業的地(di)位(wei)而(er)不(bu)懈(xie)努(nu)力(li)，為科研事業貢(gong)獻綿(mian)薄之力(li)！公(gong)司的核(he)心價值(zhi)是(shi)誠(cheng)信(xin)為本，為客(ke)戶(hu)提(ti)供高品質的產品、為員工(gong)提供發展平(ping)臺(tai)、為社會創(chuang)造(zao)更多價值(zhi)。

深圳(zhen)瑞(rui)清(qing)生物(wu)信(xin)息(xi)科技(ji)有(you)限公司具(ju)有(you)良(liang)好的(de)市(shi)場信(xin)譽(yu)，我(wo)們(men)有(you)壹支由生物(wu)技(ji)術(shu)、化(hua)學、精(jing)細(xi)化工(gong)等專(zhuan)業畢(bi)業的大學生組成(cheng)的專(zhuan)業的銷售和(he)技術服(fu)務(wu)團隊(dui)，過(guo)硬(ying)的(de)產(chan)品、合理的(de)價格(ge)、優質的服務(wu)為不同(tong)類(lei)型的客(ke)戶(hu)提(ti)供專(zhuan)業的實驗室配(pei)備(bei)解決(jue)方案

豬(zhu)白(bai)細(xi)胞介素(su)4(IL-4)ELISA試劑(ji)盒(he)

兔(tu)子(zi)補體(ti)片(pian)斷3a(C3a)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

雞脂聯(lian)素(su)(ADPN)ELISA試(shi)劑盒

雞(ji)趨(qu)化(hua)因(yin)子(zi)配(pei)體(ti)5(CCL5)ELISA試劑盒(he)

雞趨(qu)化(hua)因(yin)子(zi)配(pei)體(ti)2(CCL2)ELISA試劑盒(he)

雞超氧化(hua)物歧(qi)化(hua)酶(SOD)ELISA試劑(ji)盒(he)

雞過氧(yang)化氫(qing)酶(CAT)ELISA試劑(ji)盒(he)

雞促甲狀(zhuang)腺(xian)激(ji)素(su)(TSH)ELISA試劑(ji)盒