顯(xian)色(se)與(yu)終(zhong)止(zhi)操(cao)作失誤(wu)還(hai)可(ke)能有哪(na)些原因(yin)？

顯(xian)色(se)液(ye)滴加(jia)位置(zhi)偏差：未滴加(jia)到(dao)孔底(di)反(fan)應區域，而是滴在(zai)孔(kong)壁上方，導(dao)致顯(xian)色(se)液(ye)與(yu)酶(mei)標物(wu)接觸(chu)不充分，但部分殘留酶(mei)標物(wu)會(hui)隨液體(ti)流(liu)動(dong)集中(zhong)反(fan)應，反(fan)而局部信號(hao)增強(qiang)；

未充分混勻(yun)：添(tian)加顯(xian)色(se)液(ye)後未輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)多(duo)孔板（或震(zhen)蕩(dang)力(li)度(du)不足），導致孔內(nei)酶(mei)標物(wu)與(yu)顯(xian)色(se)液(ye)分布不均，部分區(qu)域反(fan)應過度，整(zheng)體(ti) OD 值(zhi)偏高(gao)；

顯(xian)色(se)液(ye)分裝(zhuang)汙(wu)染：將顯(xian)色(se)液(ye)分裝(zhuang)到(dao) EP 管時(shi)，使用了(le)被(bei)酶(mei)汙(wu)染的移液(ye)器或容器，導(dao)致分裝(zhuang)後顯(xian)色(se)液(ye)提(ti)前激活(huo)，加入反(fan)應孔後快速顯(xian)色(se)。

溫(wen)濕(shi)度(du)波動(dong)：顯(xian)色(se)時(shi)實驗(yan)環境(jing)濕度低(di)於(yu) 40%，會(hui)加(jia)速孔(kong)內(nei)液體(ti)蒸發，導(dao)致顯(xian)色(se)液(ye)濃度升高(gao)，反(fan)應速率(lv)加(jia)快；若(ruo)環境(jing)溫度驟(zhou)升（如(ru)靠(kao)近空調(tiao)出風口、加(jia)熱(re)器），局(ju)部溫度(du)超(chao)標引(yin)發異(yi)常顯(xian)色(se)；

震(zhen)動(dong)或碰(peng)撞(zhuang)：顯(xian)色(se)期(qi)間移動(dong)多(duo)孔板、碰(peng)撞(zhuang)實驗(yan)臺(tai)，導致孔內(nei)液體(ti)飛(fei)濺，相(xiang)鄰孔(kong)交(jiao)叉汙(wu)染（高(gao)信號(hao)孔(kong)汙(wu)染低(di)信號(hao)孔(kong)），使部分孔(kong) OD 值假(jia)性(xing)偏高(gao)。

底(di)物(wu)未平衡(heng)至室(shi)溫：低(di)溫(wen)儲存(cun)的顯(xian)色(se)底(di)物(wu)（如(ru) TMB）未提(ti)前復(fu)溫至室(shi)溫（18-25℃），直接(jie)加入 37℃孵育後的反(fan)應孔，溫度驟(zhou)變(bian)會(hui)激活(huo)部分底(di)物(wu)，導致非特(te)異(yi)性顯(xian)色(se)；

底(di)物(wu)開封後未及(ji)時(shi)使用：顯(xian)色(se)底(di)物(wu)開封後暴(bao)露(lu)在(zai)空(kong)氣中(zhong)超(chao)過 1 小時(shi)，氧氣、二(er)氧(yang)化(hua)碳(tan)幹(gan)擾會(hui)導(dao)致底物(wu)活(huo)性變(bian)化(hua)，加(jia)入孔後反(fan)應強(qiang)度(du)異(yi)常；

不同(tong)批(pi)次底(di)物(wu)混用：將(jiang)兩(liang)批次顯(xian)色(se)底(di)物(wu)混合(he)使用，批(pi)次間濃度、活(huo)性差異(yi)導致部分孔(kong)反(fan)應過度，數(shu)值偏高(gao)。

終(zhong)止(zhi)液(ye)濃度異(yi)常：未按說(shuo)明(ming)書要(yao)求(qiu)配制(zhi)終(zhong)止(zhi)液(ye)（如(ru)硫酸終(zhong)止(zhi)液(ye)應 0.5mol/L 實際配制(zhi)成 1mol/L），高(gao)濃度終止(zhi)液(ye)可(ke)能破壞顯(xian)色(se)產(chan)物(wu)穩定(ding)性，導(dao)致吸(xi)光(guang)度異(yi)常升(sheng)高(gao)；

終(zhong)止(zhi)液(ye)添(tian)加速度(du)不壹致：手動(dong)加樣(yang)時部分孔(kong)快速滴加(jia)、部分孔(kong)緩慢(man)滴加(jia)，緩慢(man)滴加(jia)的孔(kong)中(zhong)，終(zhong)止(zhi)液(ye)未及(ji)時(shi)擴散，酶(mei)促(cu)反(fan)應仍持續數(shu)秒，導(dao)致 OD 值偏高(gao)；

終(zhong)止(zhi)液(ye)汙(wu)染或變(bian)質：終(zhong)止(zhi)液(ye)中(zhong)混入水分（稀(xi)釋(shi)濃度）、酸霧(wu)（如(ru)硫酸終(zhong)止(zhi)液(ye)吸(xi)收(shou)空氣中(zhong)水(shui)分），或因(yin)儲存(cun)不當導(dao)致成分變(bian)質，無法(fa)快速終(zhong)止(zhi)酶(mei)活(huo)性；

終(zhong)止(zhi)後未及(ji)時(shi)檢(jian)測(ce)：終止(zhi)反(fan)應後未在(zai) 10-30 分鐘(zhong)內(nei)用酶(mei)標儀(yi)檢(jian)測，顯(xian)色(se)產(chan)物(wu)（如(ru) TMB 終(zhong)止(zhi)後的黃(huang)色化(hua)合(he)物(wu)）會(hui)隨時間氧化(hua)褪(tui)色(se)，但部分試劑盒底(di)物(wu)可(ke)能出現(xian)反(fan)跳(tiao)現象（吸(xi)光(guang)度回(hui)升(sheng)），導(dao)致數值(zhi)偏高(gao)。

終(zhong)止(zhi)後劇(ju)烈(lie)震蕩(dang)：終(zhong)止(zhi)反(fan)應後過度震(zhen)蕩(dang)多(duo)孔板，導致孔內(nei)氣泡(pao)產生(sheng)，氣泡(pao)在(zai)酶(mei)標儀(yi)檢(jian)測時(shi)會(hui)反(fan)射光(guang)線(xian)，使吸(xi)光(guang)度讀數(shu)假(jia)性(xing)偏高(gao)；

孔(kong)內(nei)殘留終(zhong)止(zhi)液(ye)滴：終(zhong)止(zhi)液(ye)添(tian)加後未去除(chu)孔壁(bi)殘留液(ye)滴（如(ru)未甩(shuai)板或用濾紙(zhi)輕(qing)拍），液滴聚集導(dao)致局部濃度過高(gao)，檢(jian)測(ce)時(shi)信號(hao)異(yi)常；

交(jiao)叉汙(wu)染：終止(zhi)液(ye)加樣槍(qiang)頭(tou)重復(fu)使用，或槍(qiang)頭(tou)接(jie)觸(chu)已終止(zhi)反(fan)應的孔液後再移至其(qi)他(ta)孔，導(dao)致高(gao)信號(hao)樣(yang)本(ben)汙(wu)染低(di)信號(hao)樣(yang)本(ben)。

深圳(zhen)瑞(rui)清(qing)生(sheng)物(wu)技術(shu)有(you)限公(gong)司(si)集生(sheng)產與(yu)研發為(wei)壹體(ti)，依(yi)靠(kao)成熟(shu)的(de)技(ji)術，嚴(yan)謹(jin)的(de)態(tai)度，優(you)質的(de)產(chan)品(pin)，完善(shan)的服務(wu)現(xian)已成為(wei)國內(nei)優(you)質的(de)供(gong)應商，專業供(gong)應各種(zhong)試劑盒，主(zhu)要經(jing)營銷(xiao)售(shou)ELISA試劑盒，生(sheng)化(hua)試劑盒，PCR試劑盒，酶(mei)聯(lian)免疫(yi)試劑盒，白(bai)介素試劑盒，微生物(wu)試劑盒，血(xue)清(qing)等ELISA試劑盒，更(geng)有免費代測服務(wu)和(he)實(shi)驗(yan)外(wai)包服務(wu)。瑞(rui)清(qing)生(sheng)物(wu)ELISA指標齊(qi)全，種屬(shu)眾(zhong)多(duo)，能滿足(zu)各種(zhong)實(shi)驗(yan)需求(qiu)！

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