細(xi)黃鏈黴菌(jun)乳糖(tang)

細(xi)黃鏈黴菌(jun)乳糖(tang)

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實(shi)驗(yan)內容:

1.稱量(liang)>溶(rong)化(hua)→調(tiao)pH >)過(guo)濾(lv)>分(fen)裝(zhuang)>加塞>包紮>滅(mie)菌>無(wu)菌檢(jian)查(zha)

2.幹(gan)熱(re)滅(mie)菌:裝(zhuang)入待(dai)滅(mie)菌物品升(sheng)溫>恒(heng)溫>降(jiang)溫>開箱(xiang)取(qu)物

3.高壓(ya)蒸(zheng)汽(qi)滅(mie)菌加水(shui)>裝(zhuang)物(wu)品(pin)>加蓋(gai)>加熱(re)>排冷空(kong)氣(qi)+加壓(ya)>恒(heng)壓(ya)>降(jiang)壓(ya)回零(ling)》排(pai)汽>取(qu)物. >無(wu)菌檢(jian)查(zha)

4.過(guo)濾(lv)除(chu)菌(jun):組裝(zhuang)滅(mie)菌>連(lian)接→壓(ya)濾(lv)>無(wu)菌檢(jian)查(zha)>清洗滅(mie)菌

低(di)溫存法:

公(gong)司(si)產品僅用(yong)於(yu)科研(yan)

①簡(jian)單保存法,將瓊脂(zhi)斜(xie)面孢子培(pei)養(yang)物、菌(jun)絲懸浮液以及由(you)麩皮、大(da)米(mi)、小米(mi)等(deng)谷(gu)物原(yuan)料制成(cheng)的(de)孢子培(pei)養(yang)物置(zhi)於4℃冰(bing)箱(xiang)保存,保存時間不超(chao)過(guo)1 ~2個月，若(ruo)將谷(gu)物原(yuan)料制備的(de)孢子瓶抽真空並在(zai)棉(mian)塞上(shang)浸(jin)蠟(la),以隔絕(jue)外界空(kong)氣(qi)和水汽(qi),保持時間可達(da)3~ 4個月;②液(ye)氮超(chao)di溫(wen)保存法,將生(sheng)長(chang)穩定期(qi)懸(xuan)浮在10%甘油(you)或其他低冰(bing)點(dian)液體中,密封於安(an)瓿管內，然後控制冷卻(que)速(su)度(du),使(shi)安瓿管溫度逐(zhu)步下(xia)降至(zhi)-35℃時(shi)， 即可置(zhi)於-150 ~-196℃的(de)液(ye)氮罐中保存。大多數微(wei)生(sheng)物(wu)如病(bing)毒、噬菌體、多(duo)種(zhong)細(xi)菌、放(fang)線(xian)菌(jun)、酵(jiao)母和原(yuan)蟲(chong)、特(te)別是(shi)壹(yi)些用(yong)冷(leng)凍(dong)幹(gan)燥法有困難的(de)微(wei)生(sheng)物(wu),都可用(yong)此法長(chang)期(qi)保存。

微(wei)生(sheng)物(wu)菌(jun)種(zhong)的(de)培(pei)養(yang):

細(xi)黃鏈黴菌(jun)乳糖(tang)

1孢子制備

(1)放(fang)線(xian)菌(jun)孢子的(de)制備

壹(yi)般(ban)采(cai)用(yong)瓊脂(zhi)斜(xie)面培(pei)養(yang)基,培(pei)養(yang)基中含有壹(yi)些適(shi)合(he)產(chan)孢子的(de)營(ying)養(yang)成(cheng)分,如麩皮、豌豆浸(jin)汁(zhi)、蛋(dan)白腖和(he)壹(yi)些無(wu)機(ji)鹽(yan)等(deng)。碳(tan)源(yuan)和(he)氮源不要太豐(feng)富(fu)（碳源(yuan)約(yue)為(wei)1%,氮源不超(chao)過(guo)0.5%),碳源(yuan)豐(feng)富(fu)容易造成(cheng)生(sheng)理酸(suan)性的(de)營(ying)養(yang)環境(jing),不利於放(fang)線(xian)菌(jun)孢子的(de)形成(cheng)，氮源豐(feng)富(fu)則有利於菌絲(si)繁(fan)殖(zhi)而不利於(yu)孢子形成(cheng)。壹(yi)般(ban)情(qing)況(kuang)下(xia)， 幹(gan)燥和限(xian)制營養(yang)可直(zhi)接或間接誘(you)導孢子形成(cheng)。放(fang)線(xian)菌(jun)斜(xie)面的(de)培(pei)

養(yang)溫度(du)大多數為(wei)28℃,少數為(wei)37 ℃,培(pei)養(yang)時間為5~ 14天。

(2)黴(mei)菌孢子的(de)制備

黴(mei)菌的(de)孢子培(pei)養(yang),壹(yi)般(ban)以大米、 小米(mi)、玉米、麩皮、麥粒等(deng)天然(ran)農產(chan)品(pin)為培(pei)養(yang)基。這是(shi)由(you)於這些農產(chan)品(pin)中的(de)營(ying)養(yang)成(cheng)分較適(shi)合(he)黴(mei)菌的(de)孢子繁(fan)殖(zhi)，而且這類培(pei)養(yang)基的(de)表(biao)面(mian)積(ji)較大(da)，可獲(huo)得大量的(de)孢子。黴(mei)菌的(de)培(pei)養(yang)-般(ban)為(wei)25~ 28 ℃,培(pei)養(yang)時間為4~ 14天。

2種(zhong)子制備

(1)搖瓶種子(zi)制備

搖瓶種子(zi)進(jin)罐,常采(cai)用(yong)母瓶、子瓶兩級培(pei)養(yang),有時母瓶種子(zi)也(ye)可以直接進(jin)罐。種子(zi)培(pei)養(yang)基要求比(bi)較豐(feng)富(fu),並(bing)易被菌體(ti)分(fen)解利用(yong)，氮源豐(feng)富(fu)有利於菌絲(si)生(sheng)長(chang)。原(yuan)則上(shang)各種營養(yang)成(cheng)分不(bu)宜(yi)過(guo)濃(nong),子(zi)瓶培(pei)養(yang)基濃(nong)度(du)比母瓶略高,更接近(jin)種(zhong)子(zi)罐的(de)培(pei)養(yang)基配(pei)方(fang)。

(2)種子(zi)罐種子(zi)制備

種(zhong)子罐種子(zi)制備的(de)工藝過(guo)程(cheng),因(yin)菌(jun)種不(bu)同(tong)而(er)異(yi)，壹(yi)般(ban)可分(fen)為壹(yi)級種(zhong)子(zi)、 二級種(zhong)子(zi)和三(san)級種(zhong)子(zi)的(de)制備。孢子(或搖瓶菌絲(si))被接入(ru)到(dao)體(ti)積(ji)較小的(de)種(zhong)子罐中,經(jing)培(pei)養(yang)後形成(cheng)大量(liang)的(de)菌(jun)絲，這樣(yang)的(de)種(zhong)子稱為(wei)壹(yi)級種(zhong)子(zi)， 把壹(yi)級種(zhong)子(zi)轉入發酵(jiao)罐內發酵(jiao)，稱(cheng)為二級發酵(jiao)。如果(guo)將壹(yi)級種(zhong)子(zi)接入(ru)體(ti)積(ji)較大(da)的(de)種(zhong)子罐內,經(jing)過(guo)培(pei)養(yang)形成(cheng)更多(duo)的(de)菌(jun)絲,這樣(yang)制備的(de)種(zhong)子稱為(wei)二級種(zhong)子(zi)，將二級種(zhong)子(zi)轉入發酵(jiao)罐內發酵(jiao)稱(cheng)為三(san)級發酵(jiao)。同(tong)樣(yang)道(dao)理,使(shi)用三(san)級種(zhong)子(zi)的(de)發酵(jiao),稱為四(si)級發酵(jiao)。

脫水存法:

①沙土(tu)保存法,能產(chan)孢子的(de)細(xi)菌、放(fang)線(xian)菌(jun)及(ji)黴菌可采(cai)用此法保存，即將沙和(he)土(tu)以3:2比例(li)混(hun)合(he)經(jing)稀酸(suan)處(chu)理洗凈過(guo)篩,裝入(ru)小試(shi)管內裝置高度(du)為(wei)1cm滅(mie)菌2~ 3次(ci),烘(hong)幹(gan)後即可將在斜(xie)面(mian)培(pei)養(yang)基上(shang)生(sheng)長(chang)良(liang)好(hao)的(de)孢子,用(yong)無(wu)菌蒸(zheng)餾水(shui)2~ 2.5m制成(cheng)孢子懸(xuan)液，吸(xi)取(qu)少許(xu)加入(ru)沙土(tu)管中,經(jing)真空(kong)抽幹(gan),外觀呈松散(san)狀態(tai),於4℃冰箱(xiang)保存,保存期可達(da)5 ~7年。

②冷凍(dong)幹(gan)燥法,將孢子懸(xuan)浮液與保護(hu)劑(ji)相(xiang)混(hun)合(he), 放(fang)在(zai)安(an)瓿管內於-20 -30℃的(de)乙(yi)醇(chun)浴(yu)中速凍(dong)。然後,在(zai)低(di)溫下(xia)用真空(kong)泵抽幹(gan),用幹(gan)冰使(shi)水汽結(jie)凍(dong),熔封安瓿管,於低(di)溫(wen)下(xia)保存。保存期可達(da)5~ 10年之久(jiu)。

③石(shi)蠟(la)油封存法,在斜(xie)面(mian)菌(jun)種培(pei)養(yang)物上(shang),倒上(shang)滅(mie)菌後的(de)石(shi)蠟(la)油,高出(chu)斜(xie)面(mian)1cm,於4℃冰箱(xiang)或低溫(wen)幹(gan)燥處保存，此法不(bu)適(shi)用於能利(li)用石(shi)蠟(la)油作(zuo)碳源的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)，保存期為壹(yi)年(nian)以上(shang)。

菌(jun)種(zhong)的(de)具(ju)體保存方法

   微(wei)生(sheng)物(wu)具(ju)有容易變異的(de)特(te)性，因(yin)此，在保藏(zang)過(guo)程(cheng)中，必須(xu)使(shi)微生(sheng)物(wu)的(de)代(dai)謝(xie)處(chu)於不(bu)活(huo)躍或相對靜止的(de)狀(zhuang)態，才(cai)能在(zai)壹(yi)定(ding)的(de)時(shi)間內使(shi)其不發生(sheng)變(bian)異(yi)而(er)又保持生(sheng)活(huo)能(neng)力(li)。

低溫(wen)、幹(gan)燥和隔絕(jue)空(kong)氣(qi)是(shi)使(shi)微生(sheng)物(wu)代(dai)謝(xie)能(neng)力(li)降低(di)的(de)重(zhong)要因素，所(suo)以，菌種保藏(zang)方法雖(sui)多(duo)，但(dan)都是(shi)根(gen)據這三(san)個因素而設(she)計的(de)。

菌種保藏(zang)方法大(da)致(zhi)可分(fen)為以下幾種：

1．傳(chuan)代培(pei)養(yang)保藏(zang)法又有斜面培(pei)養(yang)、穿刺培(pei)養(yang)、皰(pao)肉(rou)培(pei)養(yang)基培(pei)養(yang)等(deng)（後者作(zuo)保藏(zang)厭氧細(xi)菌用），培(pei)養(yang)後於(yu)4—6℃冰(bing)箱(xiang)內保存。

2．覆(fu)蓋(gai)保藏(zang)法是(shi)傳(chuan)代培(pei)養(yang)的(de)變(bian)相方法(fa)，能夠(gou)適(shi)當(dang)延(yan)長保藏(zang)時間，它是(shi)在(zai)斜面(mian)培(pei)養(yang)物和(he)穿刺培(pei)養(yang)物上(shang)面覆(fu)蓋(gai)滅(mie)菌，壹(yi)方(fang)面可防(fang)止因(yin)培(pei)養(yang)基水(shui)分(fen)蒸(zheng)發而引(yin)起菌(jun)種(zhong)死亡，另壹(yi)方(fang)面可阻止氧氣(qi)進(jin)入(ru)，以減(jian)弱(ruo)代(dai)謝(xie)作(zuo)用。

   載體(ti)保藏(zang)法是(shi)將微生(sheng)物(wu)吸(xi)附(fu)在適(shi)當(dang)的(de)載(zai)體，如土(tu)壤、沙子(zi)、矽(gui)膠、濾(lv)紙上(shang)，而後進(jin)行幹(gan)燥的(de)保藏(zang)法，例(li)如沙土(tu)保藏(zang)法和濾(lv)紙保藏(zang)法應用相當(dang)廣泛(fan)。

   寄(ji)主(zhu)保藏(zang)法用於(yu)目(mu)前尚(shang)不能在(zai)人工培(pei)養(yang)基上(shang)生(sheng)長(chang)的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)，如病(bing)毒、立克(ke)次(ci)氏(shi)體(ti)、螺旋(xuan)體(ti)等(deng)，它們必(bi)須(xu)在生(sheng)活(huo)的(de)動(dong)物、昆(kun)蟲(chong)、雞(ji)胚(pei)內(nei)感(gan)染並傳(chuan)代，此法相(xiang)當(dang)於(yu)壹(yi)般(ban)微(wei)生(sheng)物(wu)的(de)傳(chuan)代培(pei)養(yang)保藏(zang)法。病毒(du)等(deng)微(wei)生(sheng)物(wu)亦(yi)可用(yong)其他方法(fa)如液(ye)氮保藏(zang)法與冷(leng)凍(dong)幹(gan)燥保藏(zang)法進(jin)行保藏(zang)。

5．冷凍(dong)保藏(zang)法可分(fen)低溫(wen)冰箱(xiang)（-20—-30℃，-50—-80℃）、幹(gan)冰酒(jiu)精(jing)快速(su)凍結（約-70℃）和液(ye)氮（-196℃）等(deng)保藏(zang)法。

冷(leng)凍(dong)幹(gan)燥保藏(zang)法先使(shi)微生(sheng)物(wu)在(zai)極(ji)低溫度(du)（-70℃左右(you)）下(xia)快速(su)冷凍，然後在(zai)減(jian)壓(ya)下利用升(sheng)華(hua)現象除(chu)去水(shui)分(fen)（真(zhen)空(kong)幹(gan)燥）。

我(wo)司在(zai)重視(shi)產品(pin)質量的(de)同(tong)時，也(ye)建(jian)立(li)了壹(yi)套(tao)集(ji)技(ji)術支(zhi)持、物(wu)流、售(shou)後服(fu)務(wu)等(deng)多(duo)個部(bu)門(men)的(de)服(fu)務(wu)體系，努力(li)把我(wo)們方(fang)便(bian)、快捷、周(zhou)到(dao)的(de)服(fu)務(wu)提供(gong)給每壹(yi)個客戶。