豬(zhu)劄如病毒(du)劄(zha)幌病毒(du)PCR檢測試(shi)劑盒(he)

豬(zhu)劄如病毒(du)劄(zha)幌病毒(du)PCR檢測試(shi)劑盒(he)

特(te)點優(you)勢:

1.所(suo)有(you)產品(pin)使用(yong)的(de)引物(wu)均(jun)經(jing)過(guo)詳盡的(de)生(sheng)物(wu)信(xin)息(xi)學分析，經(jing)自(zi)建底大效據庫的(de)比(bi)對，確保所(suo)用(yong)的(de)每(mei)壹條(tiao)引物(wu)均(jun)為(wei)種(zhong)屬(shu)或(huo)血清型特異的(de)基因序列區段(duan)可實現對細菌種(zhong)屬及(ji)血清型的(de)特異檢制，特異性(xing)均(jun)達到(dao)。

2.重(zhong)現性(xing):該(gai)系(xi)列所(suo)有(you)產品(pin)均(jun)經(jing)過(guo)大(da)量實驗(yan)菌(jun)株(zhu)的(de)驗(yan)證，重(zhong)現性(xing)強。

3.靈敏性(xing):讀(du)系(xi)列產品(pin)可實現對檢測菌(jun)的(de)高靈(ling)敏檢測，當(dang)樣品(pin)中細(xi)菌(jun)的(de)濃度達到(dao)103cfu/ml時(shi),可實現對其的(de)直接檢測,無(wu)需繁(fan)瑣的(de)增菌(jun)過(guo)程(cheng)。

4.檢測範(fan)圍(wei)廣(guang)，涵蓋(gai)了對人體(ti)危害(hai)較為嚴(yan)重(zhong)的(de)17種及(ji)腸(chang)道(dao)致(zhi)病菌，可實現對臨(lin)床(chuang)樣(yang)品(pin)及(ji)其(qi)他(ta)環境(jing)取(qu)樣的(de)快速(su)檢測,整(zheng)個檢測過(guo)程(cheng)為(wei)3-4個小時。

5.序列資源豐富(fu)，除(chu)公布(bu)的(de)序列外，公司還進(jin)行(xing)了大(da)量菌株(zhu)的(de)序列破譯(yi)，從(cong)理論上保(bao)證所(suo)選引物(wu)具(ju)有(you)良好(hao)的(de)保守(shou)性(xing)和特(te)異性(xing)。

該(gai)系(xi)列試制(zhi)盒(he)均(jun)經(jing)過(guo)大(da)量的(de)保守(shou)性(xing)及(ji)特(te)異性(xing)實驗(yan)證,憑(ping)借公同(tong)擁有(you)的(de)豐富(fu)的(de)菌種(zhong)資源，每(mei)壹種(zhong)檢測試(shi)制盒(he)均(jun)經(jing)過(guo)了(le)20余(yu)種標準菌株(zhu)和臨(lin)床(chuang)菌(jun)樣(yang)的(de)保守(shou)性(xing)驗(yan)征(zheng)及(ji)40余(yu)種近(jin)緣(yuan)準菌株(zhu)和臨(lin)床(chuang)菌(jun)株(zhu)的(de)特異性(xing)驗(yan)證確保在使用(yong)過(guo)程(cheng)中(zhong)不(bu)會(hui)出(chu)現任何的(de)假(jia)陽性(xing)及(ji)假(jia)陰性(xing)報告(gao)結(jie)果(guo)。

組(zu)成及(ji)配(pei)制(zhi)

1、酶(mei)標板(ban):-塊(kuai)(96孔)

2、標準品(pin) (凍幹(gan)品(pin)): 2瓶,請臨(lin)用(yong)前(qian)15分鐘內(nei)配制(zhi)。每(mei)瓶以樣品(pin)稀釋液(ye)稀釋至(zhi)0.5m1,蓋(gai)好(hao)後室溫靜置大(da)約10分鐘,同(tong)時

反(fan)復(fu)顛(dian)倒(dao)/搓動以助溶解(jie)，其濃度為200 U/L, 然(ran)後做系(xi)列倍比(bi)稀釋(註(zhu):不(bu)要(yao)直(zhi)接在板(ban)中(zhong)進(jin)行(xing)倍比(bi)稀釋),分別配(pei)制成200 U/

L, 100 U/L,50 U/L,25 U/L, 12.5 U/L,6.25 U/L,3. 12 U/L,樣品(pin)稀釋液(ye)直(zhi)接作(zuo)為(wei)空(kong)白孔0 U/L。如(ru)配(pei)制100 U/L標準品(pin):取(qu)0.3ml (不(bu) 要(yao)少於(yu)0.3m1 )200 U/L的(de) 上述標準品(pin)加入(ru)含(han)有0. 3m1樣(yang)品(pin)稀釋液(ye)的(de)Eppendorf管中(zhong)，混勻(yun)即(ji)可，其余(yu)濃度以此(ci)類推(tui)。

技(ji)術原理(li):

DNA的(de)半保(bao)留復(fu)制是(shi)生(sheng)物(wu)進(jin)化(hua)和傳(chuan)代的(de)重(zhong)要(yao)途(tu)徑。雙鏈(lian)DNA在多種(zhong)酶(mei)的(de)作(zuo)用(yong)下(xia)可以變(bian)性(xing)解(jie)鏈(lian)成單鏈(lian)，在DNA聚合(he)酵(jiao)與啟(qi)動子(zi)的(de)參(can)與(yu)下(xia)，根據堿基互補配(pei)對原則復(fu)制成同樣的(de)兩分子(zi)挎貝(bei)。

在聚合(he)酶(mei)錯(cuo)式反應(ying)實(shi)驗(yan)中(zhong)發現。DNA在高溫時也(ye)可以發生(sheng)變(bian)性(xing)解(jie)鏈(lian)，當溫度降低(di)後又可以復(fu)性(xing)成為雙鏈(lian)。因此(ci)，通(tong)過(guo)溫度變(bian)化控(kong)制DNA的(de)變(bian)性(xing)和復(fu)性(xing),並(bing)設計(ji)引物(wu)做啟動子(zi),加(jia)入(ru)DNA聚合(he)酶(mei)、dNTP就可以完(wan)成特定(ding)基(ji)因的(de)體(ti)外復(fu)制。( DNA高(gao)溫變(bian)性(xing)低(di)溫復(fu)性(xing))發現耐熱DNA聚合(he)同酶(mei)--Taq酶(mei)對於(yu)PCR的(de)應(ying)用(yong)有(you)裏(li)程(cheng)碑的(de)意義(yi)，該(gai)酶(mei)可以耐受(shou)90℃以上的(de)高溫而不(bu)失(shi)活(huo)，不(bu)需(xu)要(yao)每(mei)個循環(huan)加(jia)酶(mei)，使(shi)PCR技術變(bian)得非(fei)常簡捷(jie)、同(tong)時也(ye)大(da)大降低(di)了成本, PCR技術得以大量(liang)應(ying)用(yong),並(bing)逐步應(ying)用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)。

樣(yang)本(ben)采集(ji)、存放及(ji)運(yun)輸:

1、樣本(ben)采集(ji):各(ge)類型樣本(ben)按(an)照常規方(fang)法(fa)采集(ji)。

2、存放:樣(yang)本在2~8℃條件下保存應(ying)不(bu)超過(guo)72h,-70℃以下可長(chang)期保存(cun),但應(ying)避(bi)免反復(fu)凍融(rong)(多凍(dong)融3次(ci))。

3、運(yun)輸:采用(yong)泡沫箱(xiang)加(jia)冰密封進(jin)行(xing)運(yun)輸。

豬(zhu)劄如病毒(du)劄(zha)幌病毒(du)PCR檢測試(shi)劑盒(he)

使(shi)用(yong)方(fang)法(fa):

註:所(suo)有(you)試(shi)劑使用(yong)前需(xu)解(jie)凍,混合(he)均(jun)勻(yun),6,000rpm離心(xin)數(shu)秒(miao)後使用(yong)。

1. 樣(yang)本處(chu)理(li)(樣(yang)本處(chu)理(li)區)

待檢樣本的(de)核酸(suan)提(ti)取(qu)可采用(yong)病毒(du)RNA提(ti)取(qu)試劑盒(he)或(huo)自(zi)動化(hua)核(he)酸提(ti)取(qu)儀(yi)等,具(ju)體(ti)提(ti)取(qu)方(fang)法(fa)請參(can)照相(xiang)關說明(ming)書。陽(yang)性(xing)質(zhi)控(kong)品(pin)及(ji)陰(yin)性(xing)質(zhi)控(kong)品(pin)無需(xu)提(ti)取(qu),可直接使用(yong)。

2. 擴增試(shi)劑準備(bei)(PCR前準備(bei)區)

取(qu)N個(N=陰性(xing)質(zhi)控(kong)品(pin)+待檢樣本+陽(yang)性(xing)質(zhi)控(kong)品(pin))PCR反應(ying)管(guan),每(mei)管分別加(jia)入FMD RT-PCR反(fan)應(ying)液(ye)19μl、RT-PCR酶(mei)1 μl (也(ye)可根據每(mei)頭(tou)份(fen)用(yong)量(liang)計(ji)算N+1份FMD RT-PCR反應(ying)液(ye)、RT-PCR酶(mei)所(suo)需(xu)總量,兩(liang)者(zhe)混(hun)勻(yun)離心(xin)後分裝(zhuang)20 μl至(zhi)單個PCR反應(ying)管(guan))。

組(zu)分每(mei)頭(tou)份(fen)用(yong)量(liang)FMD  RT-PCR反應(ying)液(ye)19 μlRT-PCR酶(mei)。

1 .將(jiang)所(suo)有(you)PCR反(fan)應(ying)管(guan)於(yu)6,000rpm離(li)心30s,轉移(yi)至樣本(ben)處(chu)理(li)區。

2.加樣(樣本處理區(qu))

3.在上述的(de)PCR反應(ying)管(guan)中(zhong)分別加(jia)入待(dai)檢樣本RNA提(ti)取(qu)物(wu)、陰性(xing)質(zhi)控(kong)品(pin)和陽(yang)性(xing)質(zhi)控(kong)品(pin)各(ge)5 μl,蓋(gai)緊(jin)管(guan)蓋(gai),於(yu)6,000rpm離(li)心10s,轉移(yi)至擴增區(qu)。

註(zhu)意事項:

1. 建議(yi)使(shi)用新(xin)鮮(xian)采取(qu)的(de)動物(wu)組(zu)織(zhi)，若(ruo)為(wei)冷(leng)凍組(zu)織(zhi)，應(ying)盡(jin)量(liang)避(bi)免反復(fu)凍融(rong)，否則會(hui)導(dao)致(zhi)模板(ban)的(de)降解(jie)，影(ying)響PCR效率。

2. 試(shi)劑Buffer AL若(ruo)低(di)溫保存，易(yi)產生(sheng)沈(chen)澱(dian)。在使用(yong)前(qian)務(wu)必將其(qi)在室溫中放置壹段(duan)時(shi)間(jian)，也(ye)可在37℃水浴中(zhong)預熱10 min，以溶解(jie)沈澱(dian)，混(hun)勻(yun)後再(zai)使(shi)用。

3. 電(dian)泳檢測時(shi)，切勿(wu)使用(yong)含(han)有SDS的(de)Loading Buffer。否則，電(dian)泳時會(hui)在泳道(dao)中(zhong)出(chu)現壹大(da)團(tuan)拖(tuo)尾亮(liang)帶，影(ying)響實驗(yan)結(jie)果(guo)。

4. 建議(yi)擴(kuo)增片(pian)段(duan)長(chang)度1 kb以內，以便擴增效率佳(jia)。

5. 為了(le)您(nin)的(de)安全(quan)和健(jian)康(kang)，請穿實(shi)驗(yan)服(fu)並(bing)佩(pei)戴壹次(ci)性(xing)手套操(cao)作(zuo)。

深圳(zhen)瑞(rui)清生(sheng)物(wu)信(xin)息(xi)科技(ji)有限(xian)公司經(jing)過(guo)數(shu)年的(de)努力(li)發展已(yi)迅速(su)成為集產品(pin)研發、經(jing)營為(wei)壹體(ti)的(de)專業(ye)化生(sheng)物(wu)工(gong)程(cheng)公司。公司具(ju)有(you)完(wan)善(shan)的(de)實驗(yan)技(ji)術開發平(ping)臺(tai)，成熟的(de)抗(kang)原(yuan)、抗(kang)體(ti)研發系(xi)統，熟練掌(zhang)握(wo)各(ge)種(zhong)酶(mei)聯技(ji)術，結(jie)合(he)公司的(de)研發團(tuan)隊(dui)，可以有效的(de)保證公司產品(pin)強的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)和高(gao)的(de)準確性(xing)，同時又(you)具(ju)有(you)競爭(zheng)力(li)的(de)價格。 公司主營ELISA試(shi)劑盒(he)，目前可以提(ti)供(gong)生(sheng)化(hua)試劑、分子(zi)生(sheng)物(wu)學試(shi)劑及(ji)試(shi)劑盒(he)，各(ge)種(zhong)抗(kang)體(ti)及(ji)免疫學(xue)試劑盒(he)、實(shi)驗(yan)耗(hao)材(cai)等多門類上萬(wan)種產品(pin)，產品(pin)涉及(ji)分子(zi)生(sheng)物(wu)學、細(xi)胞生(sheng)物(wu)學、免疫學(xue)等生(sheng)命(ming)科學(xue)的(de)各(ge)個領(ling)域。