PCR檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒樣本如(ru)何處理(li)

PCR檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒的樣本(ben)處理涉及幾個(ge)關鍵步(bu)驟(zhou)，具體取決於(yu)所使(shi)用的試劑(ji)盒類(lei)型和(he)待(dai)檢測(ce)的(de)樣(yang)本。以下(xia)是(shi)壹些(xie)典型的(de)步(bu)驟(zhou)和(he)註意(yi)事(shi)項：

樣(yang)本處(chu)理（樣本處(chu)理(li)區）過(guo)程(cheng)：

1、先對痰液樣本進行目(mu)測(ce)，若樣(yang)本(ben)中(zhong)唾液占大部(bu)分(fen)，則需重(zhong)新采集(ji)樣(yang)本(ben)

2、目(mu)測(ce)合(he)格後(hou)，在樣(yang)本中(zhong)加入(ru)2～3倍體積4%的NaOH溶(rong)液，<采希(xi)?50rpm、37℃條件下(xia)處(chu)理(li)30min或常(chang)溫下(xia)1Hr，使(shi)其(qi)充(chong)分(fen)液化(hua)（無(wu)明(ming)顯固(gu)狀(zhuang)物(wu)並(bing)且吸(xi)出時(shi)無拖(tuo)絲(si)現(xian)象(xiang)即(ji)為液化(hua)*；若(ruo)液(ye)化(hua)不(bu)*，可(ke)適(shi)當(dang)再加入(ru)少(shao)量(liang)4%的(de)NaOH溶(rong)液直(zhi)至液(ye)化(hua)*）。

3、取(qu)液(ye)化(hua)後(hou)的樣(yang)本900ul以及試劑(ji)盒中(zhong)的陰性對照、強陽性對照和(he)臨陽性對照各(ge)500ul於(yu)1.5ml無菌(jun)離心(xin)管(guan)中(zhong)，13,000rpm離心(xin)10min。

4、棄(qi)上(shang)清（先(xian)倒出大部分液(ye)體，再用移液器(qi)盡量(liang)吸(xi)幹至無(wu)明(ming)顯液(ye)滴為止），沈(chen)澱中(zhong)加入(ru)1ml滅(mie)菌(jun)生理(li)鹽(yan)水，大豆RR PCR檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒振(zhen)蕩懸(xuan)浮(fu)（註意(yi)：按緊(jin)離心(xin)管(guan)蓋後(hou)，橫(heng)向(xiang)按在旋渦振(zhen)蕩器(qi)上(shang)將沈(chen)澱振(zhen)起），13,000rpm離心(xin)10min。

5、棄(qi)上(shang)清，用1ml滅(mie)菌(jun)生理(li)鹽(yan)水洗滌沈(chen)澱，13,000rpm離心(xin)10min。

6、棄(qi)上(shang)清，向(xiang)沈(chen)澱中(zhong)加入(ru)DNA提取(qu)液(ye)30ul，振(zhen)蕩混勻(yun)，2,000rpm離心(xin)5sec，放37℃溫浴(yu)30min，再放入(ru)100℃水浴(yu)/幹浴(yu)10min，13,000rpm離心(xin)10min，保(bao)留(liu)上(shang)清備(bei)用。（如果(guo)樣本裂解(jie)產(chan)物當(dang)天(tian)不使(shi)用，請於(yu)-20℃保存(cun)。）

支原體PCR檢測(ce)：這(zhe)種(zhong)試劑盒用於(yu)檢測(ce)細(xi)胞(bao)培養(yang)物和(he)其(qi)他生物基質(zhi)中(zhong)的支原體。樣本預處(chu)理(li)包(bao)括從(cong)細胞(bao)培養(yang)液中(zhong)取100µl上(shang)清至(zhi)1.5 ml反(fan)應管(guan)中(zhong)，然後(hou)在95℃下(xia)孵(fu)育(yu)10分(fen)鐘(zhong)，接著(zhe)以最大(da)轉(zhuan)速(su)離心(xin)15秒。之後(hou)，可以直(zhi)接使(shi)用2µl進行PCR，或者(zhe)在特定溫度(du)下(xia)保(bao)存(cun)樣(yang)本(ben)長(chang)達6天(tian)1。

血液樣本(ben)的直(zhi)接PCR：這(zhe)種(zhong)試(shi)劑盒允許直(zhi)接對全血樣本進行PCR擴增(zeng)，無(wu)需進行DNA純(chun)化(hua)或樣(yang)本預(yu)處理(li)。它(ta)兼(jian)容含(han)EDTA、肝(gan)素、檸檬酸(suan)鹽等常(chang)規抗(kang)凝(ning)劑(ji)的新鮮血液、冷藏(zang)（凍）血液及商用幹xue漬。試(shi)劑盒(he)中(zhong)的DNA Polymerase組(zu)合(he)具有高(gao)保真(zhen)性和(he)對PCR抑制劑的高(gao)耐(nai)受(shou)性2。

熒光定量(liang)PCR：熒(ying)光定量(liang)PCR（Real-time PCR）是(shi)壹種(zhong)在標準(zhun)PCR技術(shu)基(ji)礎上(shang)發展起來(lai)的(de)方法，用於(yu)定量(liang)樣(yang)本中(zhong)的DNA或RNA。它(ta)通過(guo)在(zai)PCR擴增(zeng)反(fan)應體系(xi)中(zhong)加入(ru)熒(ying)光基(ji)團，實現擴增(zeng)反(fan)應中(zhong)每(mei)個(ge)循(xun)環(huan)產物(wu)熒光(guang)信號(hao)的實時(shi)檢測(ce)，從(cong)而(er)進行定量(liang)分(fen)析3。

RT-PCR方法檢測(ce)xin冠病毒：在(zai)RT-PCR檢測(ce)中(zhong)，通常(chang)包括(kuo)RNA提取(qu)、RT反(fan)應和(he)PCR反(fan)應三(san)個環(huan)節。質(zhi)控品的(de)使用對於(yu)試劑(ji)盒(he)生產過(guo)程(cheng)中(zhong)的質(zhi)量(liang)分(fen)析和(he)質(zhi)量(liang)控制(zhi)至(zhi)關(guan)重(zhong)要。例(li)如(ru)，模擬病毒質(zhi)控品可(ke)用於(yu)樣本(ben)采集(ji)、保(bao)存(cun)、轉(zhuan)運(yun)和(he)RNA提取(qu)及其後(hou)續實驗操作(zuo)等過(guo)程(cheng)的質(zhi)量(liang)控制(zhi)4。

這(zhe)些(xie)步(bu)驟(zhou)展示(shi)了PCR檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒樣本處(chu)理的多(duo)樣(yang)性和(he)復(fu)雜(za)性。具體操作(zuo)需要(yao)根(gen)據(ju)試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)和(he)實驗要求(qiu)進行。