植(zhi)物醇溶(rong)蛋白(bai)（Zein） ELISA檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)@說(shuo)明(ming)書(shu)

試(shi)劑(ji)盒(he)采(cai)用(yong)雙抗(kang)體壹(yi)步(bu)夾(jia)心法(fa)酶(mei)聯(lian)免(mian)疫(yi)吸附試(shi)驗(yan)（ELISA）。往(wang)預先包被(bei)醇(chun)溶(rong)蛋白(bai)（Zein）抗(kang)體的(de)包被(bei)微孔(kong)中(zhong)，依(yi)次加入(ru)標(biao)本、標準品(pin)、HRP標(biao)記的(de)檢(jian)測抗(kang)體，經(jing)過溫(wen)育(yu)並(bing)徹di洗(xi)滌。用底物TMB顯(xian)色，TMB在(zai)過(guo)氧化物酶的(de)催化下(xia)轉化成(cheng)藍色(se)，並(bing)在酸(suan)的(de)作(zuo)用下(xia)轉化成(cheng)最(zui)終的(de)黃(huang)色。顏(yan)色的(de)深(shen)淺和樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)醇(chun)溶(rong)蛋白(bai)（Zein）呈(cheng)正相(xiang)關。用酶(mei)標(biao)儀在450nm 波(bo)長下(xia)測定(ding)吸光(guang)度（OD 值(zhi)），計(ji)算(suan)樣(yang)品(pin)濃度。

樣(yang)品(pin)收集(ji)、處理及(ji)保(bao)存(cun)方法(fa)

1.  樣(yang)本不(bu)能含(han)疊氮(dan)鈉（NaN3），因(yin)為(wei)疊氮(dan)鈉（NaN3）是(shi)辣根過(guo)氧(yang)化物酶（HRP）的(de)抑(yi)制(zhi)劑(ji)。

2.  標(biao)本采(cai)集(ji)後盡(jin)早進(jin)行提取(qu)，提取(qu)按(an)相(xiang)關文獻進(jin)行。

3.  植(zhi)物萃取(qu)液(ye)或(huo)其它相(xiang)關樣(yang)本：請1000 x g離(li)心20分(fen)鐘，取(qu)上清(qing)即可檢測。

4.  保(bao)存(cun)：如果(guo)樣(yang)本收集(ji)後不(bu)及時(shi)檢(jian)測，請(qing)按(an)壹(yi)次用量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍存(cun)於-20℃，避免(mian)反(fan)復凍(dong)融，在室(shi)溫(wen)下(xia)解凍並(bing)確保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充分(fen)解凍。

自(zi)備物品

1. 酶(mei)標儀(yi)（450nm）

2. 高(gao)精(jing)度(du)加樣(yang)器(qi)及槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫箱(xiang)

操作註(zhu)意(yi)事(shi)項

1.  試(shi)劑(ji)盒(he)保(bao)存(cun)在2-8℃，使(shi)用前(qian)室溫(wen)平衡(heng)20分(fen)鐘。從冰箱(xiang)取(qu)出(chu)的(de)濃縮洗(xi)滌液(ye)會(hui)有(you)結晶(jing)，這(zhe)屬(shu)於正常現象，水浴加熱(re)使(shi)結(jie)晶wan全溶(rong)解後再(zai)使(shi)用(yong)。

2.  實(shi)驗中(zhong)不(bu)用(yong)的(de)板(ban)條應立即放回自封袋中(zhong)，密(mi)封(feng)（低(di)溫(wen)幹燥）保(bao)存(cun)。

3.  濃度為0的(de)S0號(hao)標準品(pin)即可視為陰(yin)性對(dui)照(zhao)或(huo)者(zhe)空(kong)白(bai)；按(an)照(zhao)說明書(shu)操作時(shi)樣(yang)本已(yi)經(jing)稀釋(shi)5倍(bei)，最(zui)終結(jie)果(guo)乘以5才(cai)是樣(yang)本實際濃度。

4.  嚴(yan)格按(an)照(zhao)說明書(shu)中(zhong)標(biao)明(ming)的(de)時(shi)間、加液(ye)量及(ji)順序(xu)進行溫育(yu)操作。

5.  所(suo)有(you)液(ye)體組(zu)分(fen)使用(yong)前充分(fen)搖勻(yun)。

試(shi)劑(ji)盒(he)組(zu)成(cheng)

註(zhu)：標準品(pin)（S0-S5）濃度依次為(wei)：0、0.5、1、2、4、8 ng/mL

試(shi)劑(ji)的(de)準備(bei)

 20×洗(xi)滌緩(huan)沖(chong)液(ye)的(de)稀(xi)釋(shi)：蒸(zheng)餾(liu)水按(an)1：20稀(xi)釋(shi)，即1份(fen)的(de)20×洗(xi)滌緩(huan)沖(chong)液(ye)加19份(fen)的(de)蒸(zheng)餾(liu)水。

洗(xi)板方法(fa)

1.  手工洗(xi)板：甩盡孔(kong)內(nei)液(ye)體，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)滌液(ye)，靜置(zhi)1min後(hou)甩盡(jin)孔(kong)內(nei)液(ye)體，在(zai)吸水紙(zhi)上拍幹，如(ru)此(ci)洗(xi)板5次。

2.  自(zi)動洗(xi)板機：每(mei)孔(kong)註(zhu)入(ru)洗(xi)液(ye)350μL，浸(jin)泡(pao)1min，洗(xi)板5次。

操作步(bu)驟

1.  從(cong)室溫(wen)平衡(heng)20min後(hou)的(de)鋁(lv)箔袋(dai)中(zhong)取(qu)出(chu)所(suo)需板條(tiao)，剩(sheng)余(yu)板條(tiao)用(yong)自封(feng)袋密封放回4℃。

2.  設(she)置(zhi)標(biao)準品(pin)孔(kong)和(he)樣(yang)本孔(kong)，標(biao)準品(pin)孔(kong)各加不同濃度的(de)標(biao)準品(pin)50μL；

3.  樣(yang)本孔(kong)先加待測樣(yang)本10μL，再(zai)加樣(yang)本稀釋(shi)液(ye)40μL；空白(bai)孔(kong)不(bu)加。

4.  除(chu)空(kong)白(bai)孔(kong)外(wai)，標準品(pin)孔(kong)和(he)樣(yang)本孔(kong)中(zhong)每(mei)孔(kong)加入(ru)辣根過(guo)氧(yang)化物酶（HRP）標(biao)記的(de)檢(jian)測抗(kang)體100μL，用(yong)封板(ban)膜封住反應(ying)孔(kong)，37℃水(shui)浴鍋(guo)或(huo)恒溫箱(xiang)溫育(yu)60min。

5.  棄去(qu)液(ye)體，吸水紙(zhi)上拍幹，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)滌液(ye)，靜置(zhi)1min，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌液(ye)，吸水紙(zhi)上拍幹，如(ru)此(ci)重復(fu)洗(xi)板5次（也可用洗(xi)板機洗(xi)板）。

6.  每(mei)孔(kong)加入(ru)底物A、B各50μL，37℃避光(guang)孵(fu)育(yu)15min。

7.  每(mei)孔(kong)加入(ru)終(zhong)止液(ye)50μL，15min內(nei)，在450nm波(bo)長處測定(ding)各孔(kong)的(de)OD值(zhi)。

結(jie)果(guo)判斷

 繪制(zhi)標(biao)準曲(qu)線(xian)：在Excel工作表中(zhong)，以標(biao)準品(pin)濃度作橫坐標，對應OD值(zhi)作(zuo)縱(zong)坐(zuo)標(biao)，繪制(zhi)出(chu)標(biao)準品(pin)線(xian)性回(hui)歸曲線(xian)，按(an)曲(qu)線方程(cheng)計(ji)算(suan)各樣(yang)本濃度值(zhi)。 

試(shi)劑(ji)盒(he)性能

1.  準確(que)性：標(biao)準品(pin)線(xian)性回(hui)歸與預期(qi)濃度相(xiang)關系數(shu)R值(zhi)，大於等(deng)於0.9900。

2.  靈(ling)敏度(du)：最(zui)di檢測濃度小於0.1 ng/mL。

3.  特(te)異性：不(bu)與(yu)其(qi)它(ta)可溶(rong)性結(jie)構(gou)類似(si)物交叉(cha)反應(ying)。

4.  重復(fu)性：板(ban)內(nei)、板(ban)間變(bian)異系(xi)數(shu)均(jun)小於15%。

5.  貯(zhu)藏(zang)：2-8℃，避光(guang)防(fang)潮保(bao)存(cun)。

6.  有(you)效期(qi)：6個(ge)月

免(mian)責(ze)聲(sheng)明

1.   試(shi)劑(ji)盒(he)僅(jin)供研(yan)究(jiu)使用(yong)，不得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)實(shi)驗(yan)或(huo)人(ren)體實(shi)驗，否(fou)則所(suo)產生的(de)壹(yi)切後果(guo)，由(you)實(shi)驗者(zhe)承(cheng)擔(dan)，本公司(si)概(gai)不(bu)負(fu)責(ze)。

2.   嚴(yan)格按(an)照(zhao)說明書(shu)操作，實(shi)驗(yan)者(zhe)違(wei)反(fan)說(shuo)明書(shu)操作，後(hou)果(guo)由(you)實(shi)驗者(zhe)承(cheng)擔(dan)。