庫蚊通(tong)用PCR檢(jian)測試(shi)劑盒(he)

庫蚊通(tong)用PCR檢(jian)測試(shi)劑盒(he)

特(te)點(dian):

高特(te)異(yi)性(xing):與其(qi)他病毒(du)無交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying),無非(fei)特(te)異(yi)性(xing)擴(kuo)增;

高靈(ling)敏度:檢(jian)測靈(ling)敏度可達(da)10^100;

操作(zuo)簡(jian)便(bian):該(gai)系列所有(you)試(shi)劑均(jun)采(cai)用相(xiang)同的體(ti)系和條件(jian),可同(tong)時進行多個(ge)檢(jian)測:

高通(tong)量(liang):多(duo)種(zhong)雙(shuang)重PCR檢(jian)測以(yi)及三(san)重PCR檢(jian)測試(shi)劑盒(he)。

組(zu)成(cheng)及配制

1、酶(mei)標(biao)板(ban):-塊(kuai)(96孔)

2、標(biao)準品(pin) (凍幹(gan)品(pin)): 2瓶,請(qing)臨用前15分鐘內配制。每(mei)瓶(ping)以樣品(pin)稀釋液稀(xi)釋至0.5m1,蓋好(hao)後室溫(wen)靜置大(da)約10分(fen)鐘,同(tong)時

反(fan)復(fu)顛(dian)倒(dao)/搓(cuo)動(dong)以助(zhu)溶(rong)解(jie)，其(qi)濃度為200 U/L, 然後做系列倍比(bi)稀(xi)釋(註:不要(yao)直(zhi)接在(zai)板(ban)中(zhong)進(jin)行倍比(bi)稀(xi)釋),分別配制(zhi)成200 U/

L, 100 U/L,50 U/L,25 U/L, 12.5 U/L,6.25 U/L,3. 12 U/L,樣品(pin)稀釋液直(zhi)接作(zuo)為空白孔0 U/L。如(ru)配(pei)制(zhi)100 U/L標(biao)準品(pin):取0.3ml (不 要(yao)少(shao)於0.3m1 )200 U/L的 上(shang)述標(biao)準品(pin)加(jia)入含(han)有(you)0. 3m1樣品(pin)稀釋液的Eppendorf管(guan)中(zhong)，混勻即(ji)可，其(qi)余(yu)濃度以(yi)此(ci)類(lei)推(tui)。

特(te)點(dian)優勢(shi):

1.所有(you)產(chan)品(pin)使用的引(yin)物均(jun)經(jing)過詳盡(jin)的生物信息(xi)學(xue)分析，經自(zi)建底(di)大(da)效(xiao)據(ju)庫的比(bi)對(dui)，確(que)保(bao)所用的每(mei)壹(yi)條引(yin)物均(jun)為種(zhong)屬或(huo)血清型特(te)異(yi)的基(ji)因(yin)序列區段可實(shi)現(xian)對細(xi)菌種(zhong)屬及血清型的特(te)異(yi)檢(jian)制(zhi)，特(te)異(yi)性(xing)均(jun)達(da)到100%。

2.重現(xian)性(xing):該(gai)系列所有(you)產(chan)品(pin)均(jun)經(jing)過大(da)量(liang)實(shi)驗(yan)菌株(zhu)的驗(yan)證(zheng)，重現(xian)性(xing)為100%。

3.靈(ling)敏(min)性(xing):讀系列產(chan)品(pin)可實(shi)現(xian)對檢(jian)測菌的高靈(ling)敏檢(jian)測，當(dang)樣品(pin)中(zhong)細(xi)菌的濃度達(da)到103cfu/ml時(shi),可實(shi)現(xian)對其(qi)的直(zhi)接(jie)檢(jian)測,無需(xu)繁瑣(suo)的增(zeng)菌過程(cheng)。

4.檢(jian)測範(fan)圍廣，涵蓋了對(dui)人(ren)體(ti)危害(hai)較為嚴重的17種(zhong)及腸道致(zhi)病(bing)菌，可實(shi)現(xian)對臨床樣品(pin)及其(qi)他環境(jing)取(qu)樣的快(kuai)速檢(jian)測,整個(ge)檢(jian)測過程(cheng)為3-4個(ge)小(xiao)時(shi)。

5.序列資源(yuan)豐(feng)富，除(chu)公(gong)布(bu)的序列外，公(gong)司(si)還(hai)進(jin)行了大(da)量(liang)菌株(zhu)的序列破譯(yi)，從(cong)理(li)論上保(bao)證(zheng)所選(xuan)引(yin)物具有(you)良(liang)好(hao)的保(bao)守(shou)性(xing)和特(te)異(yi)性(xing)。

該(gai)系列試制(zhi)盒(he)均(jun)經(jing)過大(da)量(liang)的保(bao)守(shou)性(xing)及特(te)異(yi)性(xing)實(shi)驗(yan)證,憑借(jie)公(gong)同(tong)擁(yong)有(you)的豐(feng)富的菌種(zhong)資源，每(mei)壹(yi)種(zhong)檢(jian)測試(shi)制盒(he)均(jun)經(jing)過了20余(yu)種(zhong)標(biao)準菌株(zhu)和(he)臨床菌樣的保(bao)守(shou)性(xing)驗征及(ji)40余(yu)種(zhong)近(jin)緣準(zhun)菌株(zhu)和(he)臨床菌株(zhu)的特(te)異(yi)性(xing)驗證確(que)保(bao)在(zai)使用過程(cheng)中(zhong)不會出現(xian)任何(he)的假陽性(xing)及假陰性(xing)報告結(jie)果。

技(ji)術原(yuan)理(li):

DNA的半(ban)保(bao)留(liu)復(fu)制(zhi)是生物進化(hua)和傳(chuan)代的重要(yao)途(tu)徑。雙(shuang)鏈(lian)DNA在(zai)多(duo)種(zhong)酶的作(zuo)用下可以(yi)變性(xing)解(jie)鏈(lian)成(cheng)單(dan)鏈(lian)，在(zai)DNA聚合(he)酵與啟動子的參(can)與下，根(gen)據堿基(ji)互(hu)補配(pei)對原(yuan)則(ze)復(fu)制(zhi)成(cheng)同樣的兩(liang)分(fen)子挎(kua)貝。

在(zai)聚合(he)酶錯(cuo)式反應(ying)實(shi)驗(yan)中(zhong)發(fa)現(xian)。DNA在(zai)高溫(wen)時(shi)也可以(yi)發(fa)生變性(xing)解(jie)鏈(lian)，當(dang)溫(wen)度降低(di)後又(you)可以(yi)復性(xing)成為雙(shuang)鏈(lian)。因(yin)此(ci)，通(tong)過溫(wen)度變化控(kong)制DNA的變性(xing)和復性(xing),並(bing)設計(ji)引物做啟動子,加(jia)入DNA聚合(he)酶、dNTP就(jiu)可以(yi)完(wan)成(cheng)特(te)定基(ji)因(yin)的體(ti)外復(fu)制。( DNA高溫(wen)變性(xing)低溫(wen)復(fu)性(xing))發(fa)現(xian)耐熱DNA聚合(he)同酶(mei)--Taq酶(mei)對(dui)於PCR的應(ying)用有(you)裏程(cheng)碑(bei)的意(yi)義(yi)，該(gai)酶(mei)可以(yi)耐受90℃以(yi)上(shang)的高溫(wen)而不失活(huo)，不需要(yao)每(mei)個(ge)循(xun)環(huan)加(jia)酶，使PCR技(ji)術變得非常簡(jian)捷、同時(shi)也(ye)大(da)大(da)降低(di)了成本(ben), PCR技(ji)術得以大(da)量(liang)應(ying)用,並(bing)逐步(bu)應(ying)用於臨床。

2

特(te)點(dian)優勢(shi):

1.  特(te)異(yi)性(xing):所有(you)產(chan)品(pin)使用的引(yin)物均(jun)經(jing)過詳盡(jin)的生物信息(xi)學(xue)分析,經過GenBank及自(zi)建龐(pang)大(da)數據(ju)庫的比(bi)對(dui),確(que)保(bao)所用的每(mei)壹(yi)條引(yin)物均(jun)為種(zhong)屬或(huo)血清型特(te)異(yi)的基(ji)因(yin)序列區段,可實(shi)現(xian)對種(zhong)屬及血清型的特(te)異(yi)檢(jian)測,特(te)異(yi)性(xing)均(jun)達(da)到100%。

2. 重現(xian)性(xing):該(gai)系列所有(you)產(chan)品(pin)均(jun)經(jing)過大(da)量(liang)實(shi)驗(yan)菌株(zhu)的驗(yan)證(zheng),重現(xian)性(xing)為100%。

3. 靈(ling)敏(min)性(xing):該(gai)系列產(chan)品(pin)可實(shi)現(xian)對檢(jian)測菌的高靈(ling)敏檢(jian)測,當(dang)樣品(pin)中(zhong)的濃度達(da)到103cfu/ml時,可實(shi)現(xian)對其(qi)的直(zhi)接(jie)檢(jian)測,無需(xu)繁瑣(suo)的增(zeng)菌過程(cheng)。

4. 實(shi)用性(xing):檢(jian)測範(fan)圍廣,涵蓋了對(dui)人(ren)體(ti)危害(hai)較為嚴重的17種(zhong)及腸道致(zhi)病(bing)菌,可實(shi)現(xian)對臨床樣品(pin)及其(qi)他環境(jing)取(qu)樣的快(kuai)速檢(jian)測,整個(ge)檢(jian)測過程(cheng)為3-4個(ge)小(xiao)時(shi)。

5. 優(you)勢(shi)1:序列資源(yuan)豐(feng)富,除(chu)GenBank公(gong)布(bu)的序列外,公(gong)司(si)還(hai)進(jin)行了大(da)量(liang)菌株(zhu)的序列破譯(yi),從(cong)理(li)論上保(bao)證(zheng)所選(xuan)引(yin)物具有(you)良(liang)好(hao)的保(bao)守(shou)性(xing)和特(te)異(yi)性(xing)。

6. 優(you)勢(shi)2:該(gai)系列試劑(ji)盒(he)均(jun)經(jing)過大(da)量(liang)的保(bao)守(shou)性(xing)及特(te)異(yi)性(xing)實(shi)驗(yan)驗證,憑借(jie)公(gong)司(si)擁(yong)有(you)的豐(feng)富的菌種(zhong)資源,每(mei)壹(yi)種(zhong)檢(jian)測試(shi)劑盒(he)均(jun)經(jing)過了20余(yu)種(zhong)標(biao)準菌株(zhu)和(he)臨床菌株(zhu)的保(bao)守(shou)性(xing)驗證及(ji)40余(yu)種(zhong)近緣標(biao)準菌株(zhu)和(he)臨床菌株(zhu)的特(te)異(yi)性(xing)驗證,確(que)保(bao)在(zai)使用過程(cheng)中(zhong)不會出現(xian)任何(he)的假陽性(xing)及假陰性(xing)報告結(jie)果。

庫蚊通(tong)用PCR檢(jian)測試(shi)劑盒(he)

樣本采(cai)集、存(cun)放及運輸(shu):

1、樣本采(cai)集:各類(lei)型樣本按(an)照(zhao)常規(gui)方法采(cai)集。

2、存(cun)放:樣本在(zai)2~8℃條件(jian)下(xia)保(bao)存(cun)應(ying)不超過72h,-70℃以下可長期保(bao)存(cun),但(dan)應(ying)避免(mian)反復(fu)凍融(zui多凍融3次)。

3、運(yun)輸(shu):采用泡沫箱(xiang)加(jia)冰密封進行運輸(shu)。

使用方法:

註(zhu):所有(you)試(shi)劑使用前需解(jie)凍,混合(he)均(jun)勻(yun),6,000rpm離(li)心數秒後使用。

1. 樣本處(chu)理(樣本處(chu)理區(qu))

待(dai)檢(jian)樣本的核(he)酸(suan)提(ti)取可采(cai)用病毒(du)RNA提(ti)取試(shi)劑(ji)盒(he)或(huo)自(zi)動化核酸(suan)提(ti)取儀(yi)等,具體(ti)提(ti)取方法請(qing)參照(zhao)相(xiang)關(guan)說明書。陽性(xing)質控(kong)品(pin)及陰性(xing)質控(kong)品(pin)無需(xu)提(ti)取,可直(zhi)接使用。

2. 擴(kuo)增試劑(ji)準備(PCR前準備區(qu))

取(qu)N個(ge)(N=陰性(xing)質控(kong)品(pin)+待(dai)檢(jian)樣本+陽性(xing)質控(kong)品(pin))PCR反應(ying)管,每(mei)管(guan)分別加(jia)入FMD RT-PCR反(fan)應(ying)液19μl、RT-PCR酶(mei)1 μl (也可根(gen)據每(mei)頭(tou)份用量(liang)計(ji)算(suan)N+1份FMD RT-PCR反(fan)應(ying)液、RT-PCR酶(mei)所需(xu)總量(liang),兩(liang)者(zhe)混勻離(li)心後分裝(zhuang)20 μl至單(dan)個(ge)PCR反(fan)應(ying)管)。

組(zu)分(fen)每(mei)頭(tou)份用量(liang)FMD  RT-PCR反(fan)應(ying)液19 μlRT-PCR酶(mei)。

1 .將(jiang)所有(you)PCR反(fan)應(ying)管於6,000rpm離(li)心30s,轉(zhuan)移至樣本處(chu)理區(qu)。

2.加(jia)樣(樣本處(chu)理區(qu))

3.在(zai)上(shang)述的PCR反(fan)應(ying)管中(zhong)分(fen)別加(jia)入待(dai)檢(jian)樣本RNA提(ti)取物、陰性(xing)質控(kong)品(pin)和陽性(xing)質控(kong)品(pin)各5 μl,蓋緊管蓋,於6,000rpm離(li)心10s,轉(zhuan)移至擴(kuo)增區。

組(zu)成(cheng)及試劑配(pei)制:

1、 酶(mei)標(biao)板(ban):壹(yi)塊(96孔)

2、 標(biao)準品(pin)(凍幹(gan)品(pin)): 2瓶,請(qing)臨用前15分鐘內配制。每(mei)瓶(ping)以樣品(pin)稀釋液稀(xi)釋至0.5ml,蓋好(hao)後室溫(wen)靜置大(da)約10分(fen)鐘,同(tong)時反(fan)復顛(dian)倒(dao)/搓(cuo)動(dong)以(yi)助溶(rong)解(jie),其(qi)濃度為200 U/L,然後做系列倍比(bi)稀(xi)釋(註:不要(yao)直(zhi)接在(zai)板(ban)中(zhong)進(jin)行倍比(bi)稀(xi)釋),分別配制(zhi)成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品(pin)稀釋液直(zhi)接作(zuo)為空白孔 0 U/L。如(ru)配(pei)制(zhi)100 U/L標(biao)準品(pin):取0.3ml (不要(yao)少(shao)於0.3ml )200 U/L的上(shang)述標(biao)準品(pin)加(jia)入含(han)有(you)0.3ml樣品(pin)稀釋液的Eppendorf管(guan)中(zhong),（加(jia)產(chan)品(pin)名(ming)稱）混勻即(ji)可,其(qi)余(yu)濃度以(yi)此(ci)類(lei)推(tui)。

3、 樣品(pin)稀釋液:1×20ml。

4、 檢(jian)測稀(xi)釋液A:1×10ml。

5、 檢(jian)測稀(xi)釋液B:1×10ml。

PCR檢(jian)測試(shi)劑盒(he)特(te)點(dian):

1.即(ji)開即(ji)用，用戶只(zhi)需要(yao)提(ti)供病(bing)毒(du)樣品(pin)。

2.根(gen)據高腦(nao)脊譴(譴)炎(yan)病(bing)毒(du)RT-保(bao)守(shou)序列設計(ji)的專(zhuan)壹(yi)性(xing)引物, 與相(xiang)關(guan)病毒(du)無交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)。

3.靈(ling)敏(min)度可以(yi)達(da)到幾百(bai)拷(kao)貝(bei)/反(fan)應(ying)。

4.-管(guan) 式熒光定量(liang)PCR檢(jian)測,避免(mian)後續(xu)汙染(ran)。

5.本(ben)試(shi)劑盒(he)足(zu)夠50次(ci)20μL反(fan)應(ying)體(ti)系的熒光定量(liang)PCR。

本(ben)產(chan)品(pin)只適(shi)用於科(ke)研(yan),不能用於臨床診斷。

運(yun)輸(shu)及保(bao)存(cun):

低(di)溫(wen)運(yun)輸(shu).-20°C保(bao)存(cun),保(bao)存(cun)期限(xian)壹年(nian)。

註(zhu)意(yi)事項:

1. 建議(yi)使用新(xin)鮮采(cai)取的動(dong)物組(zu)織(zhi)，若(ruo)為冷凍組(zu)織(zhi)，應(ying)盡量(liang)避免(mian)反復(fu)凍融，否則會導(dao)致(zhi)模(mo)板(ban)的降解(jie)，影響PCR效(xiao)率(lv)。

2. 試(shi)劑(ji)Buffer AL若(ruo)低(di)溫(wen)保(bao)存(cun)，易(yi)產(chan)生沈澱。在(zai)使用前務(wu)必將(jiang)其(qi)在室溫(wen)中(zhong)放(fang)置壹段時(shi)間，也可在(zai)37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)預熱10 min，以(yi)溶(rong)解(jie)沈澱，混勻後再使用。

3. 電(dian)泳(yong)檢(jian)測時(shi)，切(qie)勿(wu)使用含有(you)SDS的Loading Buffer。否則，電(dian)泳(yong)時會在(zai)泳(yong)道中(zhong)出現(xian)壹大(da)團(tuan)拖(tuo)尾亮帶(dai)，影響實(shi)驗(yan)結果。

4. 建議(yi)擴(kuo)增片(pian)段長度1 kb以(yi)內，以便(bian)擴(kuo)增效(xiao)率(lv)佳(jia)。

5. 為了您(nin)的安全(quan)和健康，請穿(chuan)實(shi)驗(yan)服並(bing)佩戴(dai)壹次性(xing)手(shou)套(tao)操作(zuo)。