人乙(yi)酰(xian)肝素(su)酶(HPA)ELISA試劑盒

人(ren)乙(yi)酰(xian)肝素(su)酶(HPA)ELISA試劑盒

ELISA法是(shi)免疫診(zhen)斷(duan)中的(de)壹(yi)項(xiang)新(xin)技術，現已成功(gong)地(di)應用(yong)於多種病(bing)原(yuan)微生(sheng)物(wu)所引起(qi)的(de)傳(chuan)染(ran)病(bing)、寄(ji)生蟲病及(ji)非(fei)傳(chuan)染(ran)病(bing)等方面(mian)的(de)免疫診(zhen)斷(duan)。也(ye)已應用(yong)於大(da)分(fen)子抗(kang)原(yuan)和(he)小分子抗(kang)原(yuan)的(de)定(ding)量測定(ding)，根據(ju)已經(jing)使用(yong)的(de)結(jie)果(guo)，認(ren)為(wei)ELISA法具(ju)有(you)靈(ling)敏、特(te)異、簡(jian)單、快速、穩(wen)定及(ji)易於自(zi)動化(hua)操作等特點(dian)。不僅(jin)適用(yong)於臨(lin)床(chuang)標本(ben)的(de)檢(jian)查(zha)，而(er)且由於壹(yi)天(tian)之內可以檢(jian)查(zha)幾(ji)百甚至(zhi)上千份(fen)標本(ben),因(yin)此(ci)，也(ye)適(shi)合於血清流行病(bing)學(xue)調查。本法不(bu)僅(jin)可以用(yong)來測定(ding)抗ti，而(er)且也(ye)可用(yong)於測(ce)定(ding)體液(ye)中的(de)循環(huan)抗(kang)原，所以也(ye)是(shi)壹(yi)種早(zao)期診(zhen)斷(duan)的(de)良(liang)好方(fang)法。因(yin)此(ci)ELISA法在(zai)生(sheng)物醫學(xue)各(ge)領域的(de)應(ying)用(yong)範圍日益擴(kuo)大，

免責聲(sheng)明

1. 試劑盒僅供研(yan)究使(shi)用(yong)，不得用(yong)於臨(lin)床(chuang)實(shi)驗(yan)或(huo)人體實(shi)驗(yan)，否(fou)則(ze)所產(chan)生的(de)壹(yi)切(qie)後(hou)果(guo)，由(you)實(shi)驗(yan)者(zhe)承(cheng)擔(dan)，本公司概不負(fu)責。

2. 嚴格(ge)按(an)照(zhao)說明書操作，實(shi)驗(yan)者(zhe)違(wei)反說明書操作，後(hou)果(guo)由(you)實(shi)驗(yan)者(zhe)承(cheng)擔(dan)。

3. 產品特點

壹(yi)、高效(xiao)、靈(ling)敏、特(te)異的(de)抗(kang)ti；

二、穩(wen)定的(de)重復(fu)性(xing)和(he)可靠(kao)性(xing)；

三、吸(xi)附性(xing)能(neng)好，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔底(di)透(tou)明度高的(de)固(gu)相(xiang)載體；

四、適(shi)用(yong)血清、血漿(jiang)、組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)液(ye)、細胞培(pei)養(yang)上清液(ye)、尿(niao)液(ye)等等多種標本(ben)類(lei)型(xing)；

五、節省實(shi)驗(yan)經(jing)費。

elisa試劑盒回(hui)收(shou)率(lv)是(shi)反(fan)應待測(ce)物在樣(yang)品分析(xi)過程(cheng)中的(de)損(sun)失的(de)程(cheng)度，損(sun)失越少(shao)，回(hui)收(shou)率(lv)越高，如(ru)果(guo)作(zuo)標液(ye)1PPM，就(jiu)是(shi)1毫(hao)克(ke)/升(sheng)，而(er)作出(chu)標準(zhun)數(shu)據為(wei)0.99毫(hao)克(ke)/升(sheng)，就(jiu)是(shi)說(shuo)妳(ni)的(de)回(hui)收(shou)率(lv)是(shi)99%，這(zhe)個(ge)與(yu)真實(shi)成(cheng)分(fen)有密(mi)切的(de)關(guan)系，說(shuo)明方法的(de)準(zhun)確度。比如(ru)水中總(zong)無機(ji)氯(lv)含(han)量(liang)測(ce)定，樣(yang)品水中含(han)有(you)無機(ji)氯(lv)20mg/L，取(qu)100mL被測(ce)水(shui)樣(yang)品，加入(ru)0.1mL濃(nong)度為(wei)10mg/mL的(de)含(han)無機(ji)氯(lv)標準(zhun)樣(yang)品，測定時忽略體積變化，如(ru)果(guo)測(ce)定(ding)出(chu)樣(yang)品中無機(ji)氯(lv)為(wei)29.8mg/L，則(ze)認為(wei)回(hui)收(shou)率(lv)為(wei)99%。

人(ren)乙(yi)酰(xian)肝素(su)酶(HPA)ELISA試劑盒

組(zu)成(cheng)結構(gou)

1、血(xue)清：操作過程(cheng)中避(bi)免任何(he)細(xi)胞刺(ci)激(ji)。使(shi)用(yong)不含(han)熱(re)原(yuan)和(he)內du素的(de)試管。收(shou)集(ji)血(xue)液(ye)後(hou)，1000×g離心(xin)10分(fen)鐘將血(xue)紅(hong)細胞迅(xun)速小心(xin)地(di)分離。

2、血漿(jiang)：EDTA、檸(ning)檬suan鹽(yan)、肝素(su)血(xue)漿(jiang)可用(yong)於檢(jian)測(ce)。1000×g離(li)心(xin)30分(fen)鐘去除顆粒。

3、細(xi)胞上清液(ye)：1000×g離心(xin)10分(fen)鐘去除顆粒和(he)聚合物(wu)。

4、組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)：將組(zu)織(zhi)加入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。1000×g離心(xin)10分(fen)鐘，取(qu)上清液(ye)。

5、保存：如(ru)果(guo)樣(yang)品不立即使(shi)用(yong)，應將其分(fen)成(cheng)小部分-70℃保存，避(bi)免反復(fu)冷凍。盡可能(neng)的(de)不(bu)要使用(yong)溶(rong)血或(huo)高血脂血。如(ru)果(guo)血(xue)清中大量(liang)顆粒(li)，檢(jian)測(ce)前(qian)先離(li)心(xin)或(huo)過濾(lv)。不(bu)要在37℃或(huo)更高的(de)溫(wen)度加(jia)熱(re)解凍。應在室(shi)溫(wen)下解凍並確保樣(yang)品均勻地(di)充分解凍。

試劑盒成分(fen)

1 預(yu)包被板: 抗小(xiao)鼠白(bai)介(jie)素(su)-6兔(tu)子IgG,親(qin)合純化 96T

2 酶標記(ji)抗ti: (30倍濃(nong)縮)HRP標記(ji)抗小鼠(shu)白介素(su)-6兔(tu)子IgG,親(qin)合純化 0.4mL x 1

3 標準(zhun)品: 重組(zu)小(xiao)鼠白介素(su)-6 0.5mL x 2

4 EIA緩(huan)沖液(ye): 含(han)1% BSA, 0.05%吐(tu)溫(wen)20 BPS 30mL x 1

5 標記(ji)抗ti稀(xi)釋液(ye): 含(han)1% BSA, 0.05%吐(tu)溫(wen)20 BPS 12mL x 1

6 顯(xian)色(se)劑: TMB底物液(ye) 15mL x 1

7 終(zhong)止液(ye): 1N硫suan 12mL x 1

8 濃(nong)縮洗滌(di)液(ye): (40倍濃(nong)縮) 含(han)1% BSA, 0.05%吐(tu)溫(wen)20 BPS 50mL x 1 操作說(shuo)明 1實(shi)驗(yan)所需(xu)器材(但試劑盒沒有(you)提供) 酶標儀(450nm) 微移(yi)液(ye)管及(ji)其吸(xi)嘴(zui) 量筒及(ji)燒(shao)杯(bei) 去離子水(shui) 冰(bing)箱(4°C) 坐(zuo)標紙(log/log) 吸(xi)水紙 試管(用(yong)於標準(zhun)品稀(xi)釋) 溫(wen)育(yu)箱(37°C ± 1°C) 洗(xi)瓶(ping) (用(yong)於洗(xi)板) 壹(yi)次性試劑管(用(yong)於濃(nong)縮酶標記(ji)抗ti和(he)顯(xian)色(se)劑)

實(shi)驗(yan)詳細(xi)操作程(cheng)序

1.  從室(shi)溫(wen)平(ping)衡(heng)20min後(hou)的(de)鋁(lv)箔袋(dai)中取(qu)出(chu)所需(xu)板條，剩(sheng)余板條用(yong)自(zi)封(feng)袋(dai)密(mi)封(feng)放(fang)回(hui)4℃。

2.  設(she)置標準(zhun)品孔和(he)樣(yang)本(ben)孔，標準(zhun)品孔各(ge)加不同(tong)濃度的(de)標準(zhun)品50μL；樣(yang)本(ben)孔加(jia)待測(ce)樣(yang)本(ben)50μL。

3.  樣(yang)本(ben)孔先(xian)加(jia)待測(ce)樣(yang)本(ben)10μL，再加樣(yang)ben稀(xi)釋ye40μL；空(kong)白(bai)孔(kong)不(bu)加。

4.  除空(kong)白(bai)孔(kong)外(wai)，標準(zhun)品孔和(he)樣(yang)本(ben)孔中每孔加入(ru)辣(la)根過氧(yang)化(hua)物酶（HRP）標記(ji)的(de)檢(jian)測(ce)抗(kang)體100μL，用(yong)封(feng)板膜(mo)封(feng)住反(fan)應(ying)孔(kong)，37℃水浴鍋或(huo)恒(heng)溫(wen)箱(xiang)溫(wen)育(yu)60min。

5.  棄去液(ye)體，吸水紙上拍幹(gan)，每孔加滿洗滌(di)液(ye)，靜置1min，甩(shuai)去洗滌(di)液(ye)，吸水紙上拍幹(gan)，如(ru)此(ci)重復(fu)洗(xi)板5次（也(ye)可用(yong)洗板機(ji)洗(xi)板）。

6.  每孔加入(ru)底(di)物(wu)A、B各(ge)50μL，37℃避(bi)光(guang)孵(fu)育(yu)15min。

7.  每孔加入(ru)終(zhong)止液(ye)50μL，15min內，在450nm波長處(chu)測定(ding)各(ge)孔的(de)OD值(zhi)。

常用(yong)方法及(ji)原(yuan)理(li)如(ru)下：

1. 夾(jia)心(xin)法：

夾(jia)心(xin)法常(chang)用(yong)於檢(jian)測(ce)大分子抗(kang)原(yuan)，壹(yi)般(ban)的(de)操作步(bu)驟為(wei):

a. 將具(ju)有(you)專(zhuan)壹(yi)性(xing)的(de)抗ti固(gu)著(zhu)（coating）於塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤(pan)上，完成後(hou)洗去多余抗ti

b. 加入(ru)待測(ce)檢(jian)體，檢(jian)體中若含(han)有(you)待測(ce)的(de)抗(kang)原，則其會(hui)與(yu)塑膠孔盤(pan)上的(de)抗ti進行專(zhuan)壹(yi)性(xing)鍵(jian)結(jie)

c. 洗去多余待測(ce)檢(jian)體，加入(ru)另(ling)壹(yi)種對(dui)抗原(yuan)專(zhuan)壹(yi)的(de)壹(yi)次抗ti，與(yu)待測(ce)抗原進行鍵結(jie)

d. 洗去多余未(wei)鍵(jian)結(jie)壹(yi)次抗ti，加入(ru)帶(dai)有(you)酶的(de)二(er)次抗ti，與(yu)壹(yi)次抗ti鍵結

e. 洗去多余未(wei)鍵(jian)結(jie)二(er)次抗ti，加入(ru)酶底物(wu)使酵素呈(cheng)色(se)，以肉眼(yan)或(huo)儀器讀取(qu)呈(cheng)色(se)結果(guo)

原理(li)：針對(dui)抗原(yuan)分子上2個(ge)不(bu)同(tong)抗原(yuan)決定簇的(de)單克隆抗ti分別作為(wei)固(gu)相(xiang)抗ti和(he)酶標抗ti，將大分子抗(kang)原(yuan)分別(bie)制備固(gu)相(xiang)抗原和(he)酶標抗(kang)原(yuan)結合(he)物。

2. 間(jian)接法

間(jian)接法常(chang)用(yong)於檢(jian)測(ce)抗ti，壹(yi)般(ban)的(de)操作步(bu)驟為(wei)：

a. 將已知的(de)抗(kang)原固(gu)著(zhu)於塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤(pan)上，完成後(hou)洗去多余的(de)抗(kang)原。

b. 加入(ru)待測(ce)檢(jian)體，檢(jian)體中若含(han)有(you)待測(ce)的(de)壹(yi)次抗ti，則其會(hui)與(yu)塑膠孔盤(pan)上的(de)抗(kang)原進行專(zhuan)壹(yi)性(xing)鍵(jian)結(jie)。

c. 洗去多余待測(ce)檢(jian)體，加入(ru)帶(dai)有(you)酶的(de)二(er)次抗ti，與(yu)待測(ce)的(de)壹(yi)次抗ti鍵結。

d. 洗去多余未(wei)鍵(jian)結(jie)二(er)次抗ti，加入(ru)酶底物(wu)使酶呈(cheng)色(se)，藉(ji)儀器（ELISA reader）測定塑膠(jiao)盤(pan)中的(de)吸(xi)光值（OD值），以評估(gu)有色(se)終(zhong)產(chan)物(wu)的(de)含(han)量(liang)即(ji)可測(ce)量(liang)待測(ce)抗ti的(de)含(han)量(liang)。

原理(li)：利(li)用(yong)酶標記(ji)的(de)抗(kang)抗ti以檢(jian)測(ce)已與(yu)固(gu)相(xiang)結合的(de)受(shou)檢(jian)抗ti。

3. 競爭(zheng)法

競爭(zheng)法是(shi)壹(yi)種較(jiao)少(shao)用(yong)到的(de)ELISA檢(jian)測(ce)機(ji)制(zhi)，壹(yi)般(ban)用(yong)於檢(jian)測(ce)小(xiao)分子抗(kang)原(yuan)，其操作步(bu)驟為(wei)：

a. 將具(ju)有(you)專(zhuan)壹(yi)性(xing)的(de)抗ti固(gu)著(zhu)於塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤(pan)上，完成後(hou)洗去多余抗ti

b. 加入(ru)待測(ce)檢(jian)體，使檢(jian)體中的(de)待測(ce)抗原與(yu)塑膠孔盤(pan)上的(de)抗ti進行專(zhuan)壹(yi)性(xing)鍵(jian)結(jie)

c. 加入(ru)帶(dai)有(you)酶的(de)抗(kang)原，此(ci)抗原(yuan)也(ye)可與(yu)塑膠孔盤(pan)上的(de)抗ti進行專(zhuan)壹(yi)性(xing)鍵(jian)結(jie)，由於塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤(pan)上固(gu)著(zhu)的(de)抗ti數(shu)量有(you)限，因(yin)此(ci)當(dang)檢(jian)體中抗原(yuan)的(de)量(liang)越多，則(ze)帶有酶的(de)抗(kang)原可鍵(jian)結(jie)的(de)固(gu)著(zhu)抗ti就(jiu)越少(shao)，亦即，兩(liang)種抗(kang)原(yuan)皆(jie)競相(xiang)與(yu)塑膠孔盤(pan)上抗ti鍵結，即所謂(wei)競爭(zheng)法之由(you)來。

d. 洗去檢(jian)體與(yu)帶有酶的(de)抗(kang)原，加入(ru)酶底物(wu)使酶呈(cheng)色(se)，當(dang)檢(jian)體中抗原(yuan)量越多，代(dai)表(biao)塑膠(jiao)孔盤(pan)內留下之帶(dai)有(you)酶的(de)抗(kang)原越少(shao)，顯(xian)色(se)也(ye)就(jiu)越淺。

e. 當(dang)需要偵測無法獲得兩(liang)種以上單壹(yi)性(xing)抗ti的(de)抗(kang)原，或(huo)是(shi)不(bu)易得到足(zu)夠(gou)的(de)純化抗ti以固(gu)著(zhu)於孔(kong)盤(pan)上時，壹(yi)般(ban)會(hui)考(kao)慮使用(yong)競爭(zheng)法ELISA。

常見(jian)問題(ti)解析(xi)：

1、試劑的(de)選(xuan)擇：選擇(ze)優(you)良(liang)試劑大家都是(shi)知道(dao)的(de)，但是(shi)在(zai)檢(jian)測(ce)之前(qian)還應(ying)該(gai)提前(qian)半(ban)個(ge)小(xiao)時將試劑拿(na)到常(chang)溫(wen)下進行解凍。

2、加樣(yang)中可能(neng)遇到的(de)問(wen)題。

3、洗板時容(rong)易造成誤差(cha)。

4、顯(xian)色(se)問題(ti)：使(shi)用(yong)了過期的(de)顯(xian)色(se)劑或(huo)者是(shi)顯(xian)色(se)劑用(yong)過後(hou)放(fang)置時間(jian)太長，都有可能(neng)造成(cheng)顯(xian)色(se)劑不顯(xian)色(se)。

5、終(zhong)止反(fan)應：在加(jia)終(zhong)止劑的(de)時候(hou)由於傾倒(dao)速(su)度快(kuai)，產(chan)生氣泡(pao)，造(zao)成(cheng)假(jia)陽性(xing)結果(guo)，所以在倒(dao)終(zhong)止劑的(de)時候(hou)要緩(huan)慢(man)倒(dao)。

6、讀板：讀板的(de)時候(hou)首先應該(gai)保證板的(de)清潔幹(gan)凈。

訂購說明:

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