| 品(pin)牌(pai) | 其他品(pin)牌(pai) | 貨(huo)號(hao) | RQ-TW29324 |
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| 規(gui)格(ge) | 96T/48T | 供(gong)貨(huo)周(zhou)期 | 現貨(huo) |
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| 主(zhu)要(yao)用(yong)途 | 科(ke)研試(shi)驗(yan) | 品(pin)牌(pai) | 瑞清 |
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| 檢(jian)測樣本 | 血(xue)清.血(xue)漿(jiang).組織(zhi).相關(guan)液體(ti)等(deng) | 產(chan)品(pin)優(you)勢 | 靈敏(min)性(xing)高特(te)異性強 |
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| 售(shou)後 | 專(zhuan)屬(shu)服(fu)務(wu) | | |
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我司產(chan)品(pin)齊(qi)全(quan)，因(yin)上(shang)架(jia)數量有(you)限(xian)，未(wei)能(neng)全(quan)部(bu)上(shang)架(jia)，如需訂購(gou)或(huo)者產(chan)品(pin)詳(xiang)情請直(zhi)接(jie)聯系(xi)我司銷(xiao)售！
大(da)鼠雷帕(pa)黴素(su)靶(ba)蛋(dan)白(bai)C1（mTORC1）試(shi)劑(ji)盒(he)
僅(jin)供(gong)體(ti)外(wai)研究(jiu)使用(yong)，不用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)!
本試(shi)劑(ji)盒(he)用(yong)於(yu)體(ti)外(wai)定量檢(jian)測血(xue)清、血(xue)漿(jiang)、組織(zhi)勻漿(jiang)及(ji)相關(guan)液體(ti)樣本中(zhong)大(da)鼠 腫(zhong)瘤壞(huai)死因(yin)子a（TNF-a）的含(han)量(liang)。
有(you)效期：6個(ge)月(yue)
保存(cun)條(tiao)件：2-8℃
[實(shi)驗(yan)原理]
試(shi)劑(ji)盒(he)采(cai)用(yong)雙抗(kang)體(ti)壹(yi)步(bu)夾心法酶聯免疫吸附(fu)試(shi)驗(yan)（ELISA）。往(wang)預先(xian)包(bao)被(bei)大(da)鼠 腫(zhong)瘤壞(huai)死因(yin)子a（TNF-a）捕(bu)獲(huo)抗(kang)體(ti)的包(bao)被(bei)微(wei)孔中(zhong)，依(yi)次加入標(biao)本、標(biao)準品(pin)、HRP標(biao)記的檢(jian)測抗(kang)體(ti)，經過(guo)溫育並(bing)徹di洗(xi)滌(di)。用(yong)底(di)物TMB顯(xian)色，TMB在過氧化(hua)物(wu)酶(mei)的催(cui)化(hua)下轉(zhuan)化成藍色，並(bing)在酸的作用下轉(zhuan)化成最終的黃色。顏(yan)色的深(shen)淺(qian)和(he)樣品(pin)中(zhong)的大(da)鼠 腫(zhong)瘤壞(huai)死因(yin)子a（TNF-a）呈正(zheng)相關(guan)。用酶(mei)標(biao)儀(yi)在450nm 波長下測(ce)定吸光度(du)（OD 值），計(ji)算樣品(pin)濃(nong)度(du)。
[樣本處理及(ji)要(yao)求(qiu)]
1. 血(xue)清：將(jiang)收(shou)集(ji)於(yu)血(xue)清分離(li)管(guan)的全(quan)血(xue)標(biao)本在室溫放(fang)置(zhi)2小時(shi)或(huo)4℃過(guo)夜(ye)，然(ran)後1000×g離(li)心20 分鐘，取上清(qing)即可(ke)，或(huo)將上清(qing)置於(yu)-20℃或-80℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避免反(fan)復凍(dong)融。
2. 血(xue)漿(jiang)：用EDTA或(huo)肝素(su)作(zuo)為(wei)抗(kang)凝劑(ji)采集(ji)標(biao)本，並(bing)將(jiang)標(biao)本在采集後的30分鐘內(nei)於(yu)2-8℃ 1000×g離(li)心15分鐘，取上清(qing)即可(ke)檢(jian)測，或(huo)將(jiang)上(shang)清置於(yu)-20℃或-80℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避免反(fan)復凍(dong)融。
3. 組織(zhi)勻漿(jiang)：用預(yu)冷(leng)的PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗(xi)組織(zhi)，去除(chu)殘留(liu)血(xue)液（勻(yun)漿(jiang)中(zhong)裂(lie)解的紅細(xi)胞會影(ying)響測量結(jie)果(guo)），稱(cheng)重後將(jiang)組織(zhi)jian碎(sui)。將剪(jian)碎(sui)的組織(zhi)與(yu)對應(ying)體(ti)積(ji)的PBS（壹(yi)般(ban)按1:9的重量體(ti)積(ji)比，比如1g的組織(zhi)樣品(pin)對應(ying)9mL的PBS，具體(ti)體(ti)積(ji)可(ke)根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需要(yao)適當(dang)調(tiao)整，並(bing)做(zuo)好(hao)記(ji)錄(lu)。推薦(jian)在PBS中(zhong)加(jia)入蛋(dan)白(bai)酶(mei)抑制劑(ji)）加入(ru)玻璃(li)勻(yun)漿(jiang)器中(zhong)，於(yu)冰上充(chong)分研磨。為(wei)了(le)進(jin)壹(yi)步(bu)裂解組織(zhi)細(xi)胞，可(ke)以對勻(yun)漿(jiang)液進(jin)行(xing)超聲(sheng)破碎(sui)，或反復凍(dong)融。最後將(jiang)勻漿(jiang)液於(yu)5000×g離(li)心5~10分鐘，取上清(qing)檢(jian)測。
4. 細(xi)胞培養物(wu)上(shang)清或(huo)其它生物(wu)標(biao)本：請(qing)1000×g離(li)心20分鐘，取上清(qing)即可(ke)檢(jian)測，或(huo)將(jiang)上(shang)清置於(yu)-20℃或-80℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避免反(fan)復凍(dong)融。
註：標(biao)本溶(rong)血(xue)會影(ying)響最後檢(jian)測結(jie)果(guo)，因(yin)此(ci)溶(rong)血(xue)標(biao)本不宜進行(xing)此項(xiang)檢(jian)測。
[需(xu)要(yao)而未(wei)提(ti)供(gong)的試(shi)劑(ji)和(he)器材(cai)]
1.酶標(biao)儀(yi)（450nm）
2.高精度(du)加樣器及(ji)槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒溫箱
4.蒸餾(liu)水或(huo)去離(li)子水(shui)
[試(shi)劑(ji)盒(he)組成]
備註：
1. 標(biao)準品(pin)濃(nong)度(du)依次為(wei)：4000、2000、1000、500、250、125 pg/mL
2. 經過(guo)大(da)量(liang)正(zheng)常(chang)標(biao)本檢(jian)驗(yan)，標(biao)本的正(zheng)常(chang)濃(nong)度(du)值均在試(shi)劑(ji)盒(he)提(ti)供(gong)的檢(jian)測範(fan)圍(wei)內(nei)，實驗(yan)過程中(zhong)直(zhi)接(jie)取50μL樣本上(shang)樣即可(ke)。當(dang)有(you)部(bu)分樣本值超過(guo)最大(da)標(biao)準品(pin)濃(nong)度(du)時(shi)，可(ke)用(yong)樣本稀釋ye將標(biao)本進(jin)行(xing)適當(dang)稀釋後再(zai)進行(xing)實驗(yan)。
大(da)鼠雷帕(pa)黴素(su)靶(ba)蛋(dan)白(bai)C1（mTORC1）試(shi)劑(ji)盒(he)
[註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)]
1.嚴(yan)格按照規(gui)定的時(shi)間(jian)和(he)溫度(du)進行(xing)溫育以保證準確(que)結(jie)果(guo)。所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)都必(bi)須在使用(yong)前達到室(shi)溫20-25℃。使用(yong)後立即冷(leng)藏(zang)保存(cun)試(shi)劑(ji)。
2.洗(xi)板不正(zheng)確(que)可(ke)以導致(zhi)不準確(que)的結(jie)果(guo)。在加入底(di)物前(qian)確(que)保盡(jin)量吸幹孔內(nei)液體(ti)。溫育過程(cheng)中(zhong)不要(yao)讓(rang)微(wei)孔幹燥掉。
3.消除(chu)板底(di)殘留(liu)的液體(ti)和(he)手指印，否(fou)則影(ying)響OD值。
4.底(di)物顯(xian)色液應(ying)呈無色或很淺的顏(yan)色，已(yi)經變(bian)藍(lan)的底(di)物液(ye)不能使用(yong)。
5.避免試(shi)劑(ji)和(he)標(biao)本的交(jiao)叉(cha)汙染(ran)以免造(zao)成錯誤結(jie)果(guo)。
6.在儲(chu)存(cun)和(he)溫育時(shi)避免強(qiang)光直接(jie)照射(she)。
7.平衡至(zhi)室溫後再(zai)打(da)開密(mi)封(feng)袋(dai)以防水滴(di)凝聚(ju)在冷(leng)板條(tiao)上。
8.任(ren)何反(fan)應試(shi)劑(ji)不能接(jie)觸漂(piao)白(bai)溶(rong)劑(ji)或漂(piao)白(bai)溶(rong)劑(ji)所散發的強烈(lie)氣(qi)體(ti)。任(ren)何漂(piao)白(bai)成分都會破壞(huai)試(shi)劑(ji)盒(he)中(zhong)反(fan)應試(shi)劑(ji)的生物(wu)活(huo)性(xing)。
9.不能使用(yong)過期產(chan)品(pin)。
10.如果可(ke)能(neng)傳播疾(ji)病，所有(you)的樣品(pin)都(dou)應管(guan)理(li)好，按照規(gui)定的程序處理樣品(pin)和(he)檢(jian)測裝置。
[試(shi)劑(ji)準備]
試(shi)劑(ji)盒(he)從(cong)冷(leng)藏(zang)環(huan)境中(zhong)取(qu)出(chu)應(ying)在室溫平衡後方(fang)可(ke)使用(yong)。
20×洗(xi)滌(di)緩沖(chong)液(ye)的稀釋：蒸餾(liu)水按1：20稀釋，即1份20×洗(xi)滌(di)緩沖(chong)液(ye)加19份蒸餾(liu)水。
[操作步(bu)驟(zhou)]
1. 從(cong)室溫平衡20min後的鋁箔(bo)袋(dai)中(zhong)取(qu)出(chu)所(suo)需板條(tiao)，剩余板條(tiao)用自(zi)封袋(dai)密(mi)封(feng)放(fang)回(hui)4℃。
2. 設(she)置標(biao)準品(pin)孔和(he)樣本孔，標(biao)準品(pin)孔各(ge)加不同(tong)濃(nong)度(du)的標(biao)準品(pin)50μL；
3. 樣本孔中(zhong)加(jia)入待測(ce)樣本50μL；空白(bai)孔不加。
4. 除(chu)空白(bai)孔外(wai)，標(biao)準品(pin)孔和(he)樣本孔中(zhong)每(mei)孔加(jia)入辣根(gen)過氧(yang)化(hua)物(wu)酶（HRP）標(biao)記的檢(jian)測抗(kang)體(ti)100μL，用(yong)封板膜封(feng)住(zhu)反(fan)應(ying)孔，37℃水(shui)浴鍋(guo)或恒(heng)溫箱溫育60min。
5. 棄去液體(ti)，吸水(shui)紙上拍(pai)幹，每(mei)孔加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye)（350μL），靜置1min，甩(shuai)去洗(xi)滌(di)液(ye)，吸水(shui)紙上拍(pai)幹，如此重復洗(xi)板5次（也(ye)可(ke)用(yong)洗(xi)板機(ji)洗(xi)板）。
6. 每(mei)孔加(jia)入底(di)物A、B各(ge)50μL，37℃避光孵(fu)育(yu)15min。
7. 每(mei)孔加(jia)入終止(zhi)液(ye)50μL，15min內(nei)，在450nm波長處測定各(ge)孔的OD值。
[實驗(yan)結(jie)果(guo)計(ji)算]
試(shi)劑(ji)盒(he)以所測標(biao)準品(pin)的OD值為(wei)橫坐(zuo)標(biao)，標(biao)準品(pin)的濃(nong)度(du)值為(wei)縱坐(zuo)標(biao)，在坐標(biao)紙上(shang)或用相關(guan)軟件繪(hui)制(zhi)標(biao)準曲(qu)線(xian)，並(bing)得(de)到直(zhi)線(xian)回(hui)歸(gui)方(fang)程，將(jiang)樣品(pin)的OD值代入(ru)方(fang)程，計(ji)算出(chu)樣品(pin)的濃(nong)度(du)。
[試(shi)劑(ji)盒(he)性(xing)能(neng)]
1. 檢(jian)測範(fan)圍(wei)：125 pg/mL – 4000 pg/mL。
2. 靈敏(min)度(du)：最di檢(jian)測濃(nong)度(du)小於(yu)10 pg/mL。
3. 特(te)異性：不與(yu)其(qi)它可(ke)溶(rong)性(xing)結(jie)構類(lei)似物(wu)交(jiao)叉(cha)反應。
4. 重復性(xing)：板內(nei)變異(yi)系(xi)數(shu)小於(yu)10% ，板間變(bian)異系(xi)數(shu)小於(yu)15% 。
[說明]
1.由於(yu)現有(you)條(tiao)件及(ji)科學(xue)技(ji)術(shu)水平(ping)尚不能對所(suo)有(you)供(gong)貨(huo)商提供(gong)的所有(you)原(yuan)料進(jin)行(xing)全(quan)面(mian)的鑒定(ding)與(yu)分析，本產(chan)品(pin)可(ke)能(neng)存(cun)在壹(yi)定(ding)的質(zhi)量技(ji)術(shu)風險。
2.最終的實驗(yan)結(jie)果(guo)與(yu)試(shi)劑(ji)的有(you)效性(xing)、實(shi)驗(yan)者的相關(guan)操作以及(ji)當(dang)時(shi)的實驗(yan)環境密(mi)切(qie)相關(guan)，請務(wu)必準(zhun)備充足(zu)的標(biao)本備份。
3.不同(tong)批(pi)次的同(tong)壹(yi)產(chan)品(pin)可(ke)能(neng)會有(you)少(shao)許差別，如：檢(jian)測限(xian)、靈敏(min)度(du)以及(ji)顯色(se)時(shi)間(jian)等(deng)，請依(yi)據(ju)試(shi)劑(ji)盒(he)內(nei)說明書(shu)進行(xing)實驗(yan)操作，網(wang)站電子版(ban)說明書(shu)僅作參(can)考(kao)。
4.只(zhi)有(you)全(quan)部(bu)使用(yong)本試(shi)劑(ji)盒(he)配(pei)套(tao)試(shi)劑(ji)才能(neng)保證檢(jian)測效果(guo)，不能混(hun)用(yong)其他制造(zao)商的產(chan)品(pin)。只(zhi)有(you)嚴(yan)格(ge)遵(zun)守本試(shi)劑(ji)盒(he)的實驗(yan)說明才會(hui)得(de)到最(zui)佳的檢(jian)測結(jie)果(guo)。
5.本公司只(zhi)對試(shi)劑(ji)盒(he)本身(shen)負責(ze)，不對因(yin)使用(yong)該(gai)試(shi)劑(ji)盒(he)所(suo)造(zao)成的樣本消(xiao)耗負責(ze)，請(qing)使用(yong)者使用(yong)前充(chong)分考慮(lv)到樣本的可(ke)能(neng)使用(yong)量，預(yu)留(liu)充足(zu)的樣本。
6.使用(yong)化學(xue)裂(lie)解(jie)液制備的組織(zhi)勻漿(jiang)或細(xi)胞提取(qu)液(ye)可(ke)能(neng)會由於(yu)某些(xie)化(hua)學(xue)物質(zhi)的引(yin)入導(dao)致(zhi)ELISA實驗(yan)結(jie)果(guo)偏(pian)差。
7.若(ruo)樣本為(wei)細(xi)胞培養上(shang)清(qing)，因該(gai)類(lei)樣本幹擾(rao)因素(su)較(jiao)多(duo)，如：細(xi)胞狀態(tai)、細(xi)胞數量(liang)、采(cai)樣時(shi)間(jian)等(deng)，所以可(ke)能(neng)存(cun)在檢(jian)測不出(chu)的情況。
8.某(mou)些(xie)天然(ran)蛋(dan)白(bai)或(huo)重組蛋(dan)白(bai)，包(bao)括(kuo)原核(he)及(ji)真核(he)重組蛋(dan)白(bai)，可(ke)能(neng)因為(wei)與(yu)本產(chan)品(pin)所(suo)使用(yong)的檢(jian)測抗(kang)體(ti)及(ji)捕獲(huo)抗(kang)體(ti)不匹配(pei)，而不被(bei)檢(jian)測出(chu)。
關鍵詞：
2023-09-06 
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