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          ELISA法是免疫(yi)診(zhen)斷(duan)中(zhong)的壹(yi)項新(xin)技(ji)術,現(xian)已(yi)成(cheng)功(gong)地(di)應用於(yu)多(duo)種病(bing)原(yuan)微(wei)生(sheng)物(wu)所(suo)引起(qi)的(de)傳染(ran)病(bing)、寄生(sheng)蟲病(bing)及非傳染(ran)病(bing)等方面的(de)免疫(yi)診(zhen)斷(duan)。也已應(ying)用(yong)於(yu)大(da)分(fen)子(zi)抗原(yuan)和小(xiao)分(fen)子(zi)抗原(yuan)的(de)定量測定(ding),根據已(yi)經(jing)使用(yong)的(de)結果(guo),認為(wei)ELISA法具(ju)有(you)靈敏(min)、特異、簡(jian)單、快(kuai)速、穩(wen)定及(ji)易於(yu)自(zi)動(dong)化操作等特點。不僅適用(yong)於(yu)臨床標本(ben)的檢查,而(er)且(qie)由於(yu)壹(yi)天之內可(ke)以檢(jian)查(zha)幾百(bai)甚至(zhi)上(shang)千份(fen)標(biao)本,因此(ci),也適合(he)於(yu)血(xue)清流行(xing)病(bing)學調查(zha)。本法不僅可(ke)以用(yong)來(lai)測(ce)定ti,而(er)且(qie)也可(ke)用於(yu)測(ce)定體液中(zhong)的循環(huan)抗原(yuan),所(suo)以也是壹(yi)種早(zao)期(qi)診(zhen)斷(duan)的(de)良(liang)好方法。因(yin)此(ci)ELISA法在(zai)生(sheng)物(wu)醫(yi)學各(ge)領(ling)域的(de)應(ying)用範圍日(ri)益(yi)擴大(da),

          組(zu)成(cheng)結構(gou)

          1、血(xue)清:操作過程(cheng)中(zhong)避免任何(he)細(xi)胞(bao)刺激(ji)。使(shi)用(yong)不含熱原(yuan)和內(nei)du素(su)的試(shi)管(guan)。收(shou)集(ji)血(xue)液後(hou),1000×g離心(xin)10分(fen)鐘將血(xue)紅細(xi)胞迅速小(xiao)心(xin)地(di)分(fen)離。

          2、2、血(xue)漿(jiang):EDTA、檸檬(meng)suan鹽、肝(gan)素血(xue)漿(jiang)可(ke)用於(yu)檢(jian)測。1000×g離心(xin)30分(fen)鐘去除(chu)顆(ke)粒。

          3、細胞上(shang)清(qing)液(ye):1000×g離心(xin)10分(fen)鐘去除(chu)顆(ke)粒和聚(ju)合(he)物(wu)。

          4、組(zu)織(zhi)勻漿(jiang):將組(zu)織(zhi)加入(ru)適量生(sheng)理鹽水(shui)搗碎(sui)。1000×g離心(xin)10分(fen)鐘,取上(shang)清(qing)液(ye)。

          5、保(bao)存:如(ru)果(guo)樣(yang)品不立即(ji)使(shi)用,應將其(qi)分(fen)成(cheng)小(xiao)部分(fen)-70℃保(bao)存,避(bi)免反復(fu)冷(leng)凍(dong)。盡可(ke)能(neng)的(de)不要(yao)使用(yong)溶(rong)血(xue)。如(ru)果(guo)血(xue)清中(zhong)大量顆粒,檢測前(qian)先離心(xin)或(huo)過濾。不要(yao)在37℃或(huo)更高(gao)的(de)溫(wen)度加(jia)熱(re)解(jie)凍(dong)。應在室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍(dong)並確保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻地(di)充分(fen)解(jie)凍(dong)。

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          雞非(fei)酯化(hua)脂肪酸(NEFA)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

          操作步(bu)驟:

          1、使(shi)用(yong)前(qian),將所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)充分(fen)混(hun)勻。不要(yao)使液(ye)體產生(sheng)大(da)量的泡(pao)沫,以免加樣(yang)時(shi)加入(ru)大量的氣(qi)泡(pao),產(chan)生(sheng)加(jia)樣上(shang)的(de)誤(wu)差。

          2、根據待(dai)測樣(yang)品數量加上(shang)標(biao)準(zhun)品(pin)的(de)數量決(jue)定所(suo)需(xu)的(de)板(ban)條(tiao)數。每個標(biao)準品(pin)和空(kong)白(bai)孔(kong)建議做(zuo)復(fu)孔(kong)。每個樣(yang)品根據自(zi)己(ji)的(de)數量來定(ding),能(neng)使(shi)用(yong)復(fu)孔(kong)的(de)盡(jin)量做(zuo)復(fu)孔(kong)。

          3、加(jia)入(ru)稀釋好後(hou)的標準品(pin)50ul於(yu)反(fan)應孔(kong)、加(jia)入(ru)待測(ce)樣品(pin)50ul於(yu)反(fan)應孔(kong)內(nei)。立即(ji)加(jia)入(ru)50ul標記(ji)的抗體。蓋上(shang)膜(mo)板(ban),輕輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻,37℃溫(wen)育45分(fen)鐘。

          4、甩(shuai)去(qu)孔(kong)內(nei)液(ye)體,每孔(kong)加(jia)滿洗滌液,振(zhen)蕩(dang)30秒(miao),甩去洗滌液,用吸(xi)水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復(fu)此(ci)操作4次。如(ru)果(guo)用(yong)洗板(ban)機洗滌,洗滌次數增(zeng)加壹(yi)次。

          5、每孔(kong)加(jia)入(ru)100ul的親(qin)和鏈(lian)酶(mei)素-HRP,輕輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻,37℃溫(wen)育30分(fen)鐘。

          6、甩(shuai)去(qu)孔(kong)內(nei)液(ye)體,每孔(kong)加(jia)滿洗滌液,振(zhen)蕩(dang)30秒(miao),甩去洗滌液,用吸(xi)水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復(fu)此(ci)操作4次。如(ru)果(guo)用(yong)洗板(ban)機洗滌,洗滌次數增(zeng)加壹(yi)次。

          7、每孔(kong)加(jia)入(ru)底(di)物(wu)A、B各(ge)50ul,輕輕振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻,37℃溫(wen)育5分(fen)鐘。避免光照(zhao)。

          8、取出(chu)酶(mei)標(biao)板(ban),迅速加(jia)入(ru)50ul終止(zhi)液,加(jia)入(ru)終止(zhi)液後(hou)應立即(ji)測(ce)定結果(guo)。

          9、在(zai)450nm波(bo)長(chang)處(chu)測定(ding)各(ge)孔(kong)的(de)OD值(zhi)。

          操作註(zhu)意事(shi)項:

          1、試(shi)劑(ji)應(ying)按標簽說明書儲存,使(shi)用前(qian)恢復(fu)到室(shi)溫(wen)。稀稀過後(hou)的標準品(pin)應丟(diu)棄,不可(ke)保存

          2、實(shi)驗中(zhong)不用(yong)的板(ban)條(tiao)應立即(ji)放(fang)回(hui)包(bao)裝袋中(zhong),密(mi)封(feng)保(bao)存,以免變(bian)質(zhi)。

          3、不用(yong)的其(qi)它(ta)試(shi)劑(ji)應(ying)包裝好或(huo)蓋好。不同(tong)批(pi)號(hao)的試(shi)劑(ji)不要(yao)混(hun)用。保(bao)質(zhi)前(qian)使用(yong)。

          4、使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)的(de)吸頭(tou)以免交叉(cha)汙染(ran),吸(xi)取終止液和底(di)物(wu)A、B液(ye)時(shi),避免使用(yong)帶金(jin)屬(shu)部分(fen)的(de)加(jia)樣器(qi)。

          5、使(shi)用(yong)幹(gan)凈的(de)塑(su)料容器(qi)配(pei)置(zhi)洗滌液。使用(yong)前(qian)充分(fen)混(hun)勻試(shi)劑(ji)盒(he)裏的各(ge)種(zhong)成(cheng)份(fen)及(ji)樣品。

          6、底(di)物(wu)A應(ying)揮(hui)發(fa),避(bi)免長(chang)時(shi)間打(da)開(kai)蓋(gai)子。底(di)物(wu)B對(dui)光敏(min)感(gan),避(bi)免長(chang)時(shi)間暴(bao)露於(yu)光下(xia)。避(bi)免用手(shou)接(jie)觸(chu),有(you)毒。實(shi)驗完成(cheng)後(hou)應立即(ji)讀取OD值(zhi)。

          7、加(jia)入(ru)試(shi)劑(ji)的(de)順(shun)序(xu)應壹(yi)致,以保(bao)證(zheng)所(suo)有(you)反應(ying)板(ban)孔(kong)溫(wen)育的時(shi)間壹(yi)樣。按(an)照說明書中(zhong)標明(ming)的時(shi)間、加(jia)液的(de)量及順(shun)序(xu)進行(xing)溫(wen)育操作。

          壹(yi)般來(lai)講,96T能(neng)檢(jian)測(ce)90個(ge)樣本,48T能(neng)檢(jian)測(ce)42個(ge)樣本,這裏面(mian)需(xu)要(yao)用(yong)標(biao)樣(yang)來做(zuo)標(biao)準(zhun)曲線,所(suo)以各(ge)位(wei)需(xu)要(yao)做(zuo)實(shi)驗的(de)老師們,請(qing)在購買(mai)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)的時(shi)候註(zhu)意,需(xu)要(yao)做(zuo)多(duo)少(shao)個樣本(ben),在(zai)決(jue)定買(mai)多(duo)大規格(ge)的(de)試(shi)劑(ji)盒(he),以免做(zuo)實(shi)驗時(shi)出(chu)現(xian)試(shi)劑(ji)盒(he)不夠用或(huo)者(zhe)浪(lang)費(fei)!

          原(yuan)理:將特(te)異性(xing)抗體包被(bei)於(yu)固(gu)相(xiang)載體表面(mian),經(jing)洗滌後(hou)分(fen)成(cheng)兩組(zu):壹(yi)組(zu)加酶(mei)標記(ji)抗原(yuan)和被(bei)測(ce)抗原(yuan)的(de)混(hun)合(he)液,另壹(yi)組(zu)只(zhi)加(jia)酶標記(ji)抗原(yuan),經(jing)孵(fu)育洗滌後(hou)加底(di)物(wu)顯色,這兩組(zu)底(di)物(wu)降解量之差,即(ji)為(wei)所(suo)要測(ce)定(ding)的(de)未(wei)知抗原(yuan)的(de)量。



          禽牛(niu)結核(Mycobacterium bovis)elisa檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          蛇蛇毒因子(zi)(CVF)elisa檢測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

          犬胸苷激(ji)酶(mei)1TK1 ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

          犬血(xue)小(xiao)板(ban)因子4PF-4;CXCL4 elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

          犬可(ke)溶性(xing)補(bu)體激(ji)活(huo)產物(wu)SC5b9 elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

          犬皰(pao)疹(zhen)病(bing)毒抗體V-Ab elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

          犬線粒體分(fen)裂(lie)蛋(dan)白Drp-1 elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

          犬巴貝斯(si)抗體Babesia Ab elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

          犬流感(gan)H3N2亞(ya)型抗體FLU-H3N2 Ab ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

          雞13,14二氫(qing)15-酮(tong)前(qian)列(lie)腺素F2α(PGFM)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

          雞MAX二聚(ju)化蛋(dan)白1(mxd1)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

          雞Mx基因(Mx Gene)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)
















































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