土壤(rang)過(guo)氧(yang)化物酶(pod)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

土壤(rang)過(guo)氧(yang)化物酶(pod)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

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ELISA法(fa)是(shi)免疫(yi)診斷中(zhong)的(de)壹項(xiang)新(xin)技(ji)術，現(xian)已(yi)成功(gong)地應(ying)用於多種(zhong)病原微生物(wu)所(suo)引起的傳染(ran)病、寄生蟲(chong)病及非傳(chuan)染(ran)病等(deng)方(fang)面(mian)的免(mian)疫(yi)診斷。也(ye)已(yi)應(ying)用於大(da)分(fen)子(zi)抗原和小分(fen)子抗(kang)原(yuan)的(de)定量測(ce)定，根(gen)據(ju)已(yi)經(jing)使(shi)用的結果(guo)，認(ren)為ELISA法(fa)具(ju)有靈(ling)敏(min)、特(te)異(yi)、簡(jian)單、快(kuai)速、穩(wen)定及易於自(zi)動化操作(zuo)等(deng)特(te)點。不(bu)僅(jin)適(shi)用於臨床標本(ben)的(de)檢(jian)查(zha)，而(er)且(qie)由(you)於壹天之內可以檢(jian)查(zha)幾(ji)百(bai)甚(shen)至上千份標本(ben),因(yin)此(ci)，也(ye)適(shi)合(he)於血(xue)清(qing)流行(xing)病學(xue)調(tiao)查(zha)。本(ben)法(fa)不(bu)僅(jin)可(ke)以用來測(ce)定抗(kang)ti，而(er)且(qie)也(ye)可(ke)用於測(ce)定體液(ye)中(zhong)的(de)循(xun)環抗(kang)原(yuan)，所(suo)以也(ye)是(shi)壹種(zhong)早(zao)期診斷的(de)良(liang)好方法(fa)。因(yin)此(ci)ELISA法(fa)在(zai)生(sheng)物(wu)醫學(xue)各(ge)領(ling)域(yu)的(de)應(ying)用範(fan)圍日(ri)益擴大(da)，

組(zu)成結構(gou)

1、血(xue)清(qing)：操作(zuo)過(guo)程中避免(mian)任何細(xi)胞刺激。使(shi)用不(bu)含熱(re)原(yuan)和內du素的試(shi)管(guan)。收(shou)集血(xue)液(ye)後(hou)，1000×g離心10分鐘將血(xue)紅細(xi)胞迅速小(xiao)心(xin)地分離。

2、2、血(xue)漿(jiang)：EDTA、檸檬(meng)suan鹽(yan)、肝(gan)素血(xue)漿(jiang)可用於檢(jian)測(ce)。1000×g離心30分鐘去除顆(ke)粒(li)。

3、細(xi)胞上清(qing)液：1000×g離心10分鐘去除顆(ke)粒(li)和聚合(he)物。

4、組織(zhi)勻漿(jiang)：將組織(zhi)加入適量生(sheng)理(li)鹽(yan)水搗(dao)碎(sui)。1000×g離心10分鐘，取(qu)上清(qing)液。

5、保存：如果樣品不(bu)立(li)即(ji)使用，應(ying)將其(qi)分(fen)成小部(bu)分(fen)-70℃保存，避免反復(fu)冷(leng)凍。盡可能(neng)的不(bu)要(yao)使(shi)用溶血(xue)。如(ru)果血(xue)清(qing)中大(da)量(liang)顆(ke)粒(li)，檢(jian)測(ce)前(qian)先離心或(huo)過(guo)濾。不(bu)要(yao)在(zai)37℃或(huo)更高的(de)溫(wen)度加熱(re)解(jie)凍。應(ying)在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍並(bing)確(que)保樣品均(jun)勻地(di)充(chong)分解(jie)凍。

土壤(rang)過(guo)氧(yang)化物酶(pod)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)：

1、使(shi)用前(qian)，將所(suo)有試(shi)劑(ji)充(chong)分混(hun)勻(yun)。不(bu)要(yao)使(shi)液(ye)體產(chan)生(sheng)大(da)量(liang)的(de)泡沫，以免(mian)加(jia)樣時加(jia)入大(da)量(liang)的(de)氣泡，產(chan)生(sheng)加樣上的誤差。

2、根(gen)據(ju)待(dai)測(ce)樣品數(shu)量(liang)加(jia)上標準品的數(shu)量(liang)決(jue)定所(suo)需(xu)的板條數(shu)。每(mei)個(ge)標準品和空白(bai)孔(kong)建議做(zuo)復(fu)孔(kong)。每個(ge)樣品根(gen)據(ju)自(zi)己(ji)的(de)數(shu)量(liang)來(lai)定，能(neng)使用復(fu)孔(kong)的盡量做(zuo)復(fu)孔(kong)。

3、加(jia)入稀(xi)釋好後(hou)的(de)標準品50ul於反應(ying)孔(kong)、加入待(dai)測(ce)樣品50ul於反應(ying)孔(kong)內。立(li)即(ji)加入50ul標記的抗(kang)體。蓋(gai)上膜板，輕輕振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育45分(fen)鐘。

4、甩(shuai)去孔(kong)內液體，每(mei)孔(kong)加滿洗滌(di)液(ye)，振(zhen)蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去洗滌(di)液(ye)，用吸水紙(zhi)拍幹。重復(fu)此(ci)操(cao)作(zuo)4次。如(ru)果(guo)用洗板機(ji)洗滌(di)，洗滌(di)次(ci)數(shu)增(zeng)加壹次(ci)。

5、每(mei)孔(kong)加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育30分(fen)鐘。

6、甩(shuai)去孔(kong)內液體，每(mei)孔(kong)加滿洗滌(di)液(ye)，振(zhen)蕩(dang)30秒(miao)，甩(shuai)去洗滌(di)液(ye)，用吸水紙(zhi)拍幹。重復(fu)此(ci)操(cao)作(zuo)4次。如(ru)果(guo)用洗板機(ji)洗滌(di)，洗滌(di)次(ci)數(shu)增(zeng)加壹次(ci)。

7、每(mei)孔(kong)加入底物(wu)A、B各(ge)50ul，輕輕振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育5分(fen)鐘。避免光照。

8、取(qu)出(chu)酶標板，迅速加(jia)入50ul終止液(ye)，加入終止液(ye)後(hou)應(ying)立(li)即(ji)測(ce)定結果(guo)。

9、在(zai)450nm波長(chang)處(chu)測(ce)定各(ge)孔(kong)的OD值。

操(cao)作(zuo)註(zhu)意事項：

1、試(shi)劑(ji)應(ying)按(an)標簽說明(ming)書(shu)儲存(cun)，使(shi)用前(qian)恢復(fu)到(dao)室溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過(guo)後(hou)的(de)標準品應(ying)丟(diu)棄，不(bu)可保存

2、實(shi)驗(yan)中(zhong)不(bu)用的板條應(ying)立(li)即(ji)放(fang)回(hui)包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中(zhong)，密封(feng)保存，以免(mian)變(bian)質。

3、不(bu)用的其(qi)它(ta)試(shi)劑(ji)應(ying)包(bao)裝(zhuang)好或(huo)蓋(gai)好。不(bu)同批號的(de)試(shi)劑(ji)不(bu)要(yao)混(hun)用。保質前(qian)使(shi)用。

4、使(shi)用壹次(ci)性(xing)的(de)吸頭以免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染(ran)，吸(xi)取(qu)終止液(ye)和底物(wu)A、B液(ye)時，避(bi)免(mian)使用帶(dai)金(jin)屬部(bu)分(fen)的加樣器(qi)。

5、使(shi)用幹凈(jing)的(de)塑料容器(qi)配(pei)置洗滌(di)液(ye)。使(shi)用前(qian)充(chong)分混(hun)勻(yun)試(shi)劑(ji)盒(he)裏的各(ge)種(zhong)成份及樣品。

6、底物(wu)A應(ying)揮(hui)發，避(bi)免長(chang)時間(jian)打開(kai)蓋(gai)子。底物(wu)B對(dui)光敏感，避免(mian)長(chang)時間(jian)暴露(lu)於光下。避免用手接(jie)觸，有毒(du)。實(shi)驗(yan)完成後(hou)應(ying)立(li)即(ji)讀取(qu)OD值(zhi)。

7、加(jia)入試(shi)劑(ji)的(de)順序應(ying)壹致(zhi)，以保證(zheng)所(suo)有反應(ying)板孔(kong)溫(wen)育的(de)時間(jian)壹樣。按照說明(ming)書(shu)中標明(ming)的時間(jian)、加液的(de)量(liang)及順序進行溫(wen)育操(cao)作(zuo)。

壹般(ban)來(lai)講，96T能(neng)檢(jian)測(ce)90個(ge)樣本(ben)，48T能(neng)檢(jian)測(ce)42個(ge)樣本(ben)，這(zhe)裏面需(xu)要(yao)用標樣來做(zuo)標準曲線(xian)，所(suo)以各(ge)位(wei)需(xu)要(yao)做(zuo)實(shi)驗(yan)的(de)老(lao)師(shi)們，請在購(gou)買(mai)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)的時候(hou)註(zhu)意，需(xu)要(yao)做(zuo)多少個(ge)樣本(ben)，在(zai)決(jue)定買(mai)多大(da)規(gui)格(ge)的試(shi)劑(ji)盒(he)，以免(mian)做(zuo)實(shi)驗(yan)時出(chu)現(xian)試(shi)劑(ji)盒(he)不(bu)夠用或(huo)者(zhe)浪(lang)費！

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