大鼠乳腺(xian)上皮細胞

大(da)鼠乳腺(xian)上皮細胞需(xu)要準(zhun)備好(hao)細(xi)胞(bao)所要用到的(de)培(pei)養(yang)基和(he)相(xiang)關(guan)試(shi)劑(ji)，雖然(ran)所(suo)有的(de)貼壁，半貼壁或者(zhe)懸浮細胞處(chu)理(li)方式差不多，但是不同的實(shi)驗(yan)室(shi)培(pei)養(yang)條(tiao)件和(he)處(chu)理(li)力度還(hai)有試(shi)劑(ji)的批(pi)間差這些(xie)問題(ti)存(cun)在(zai)，也會導致(zhi)對(dui)細(xi)胞(bao)處(chu)理(li)不當，  或者(zhe)環境(jing)的不(bu)適應(ying)而造(zao)成(cheng)細胞的(de)死亡。
大(da)鼠乳腺(xian)上皮細胞培(pei)養(yang)物的生理環境(jing)不同(tong)時定(ding)義為其物理化(hua)學(xue)環(huan)境(jing)中(zhong)，更好地(di)理解血清(qing)的組(zu)件，所(suo)必(bi)需(xu)的(de)增殖(zhi)的生長因(yin)子的(de)鑒定(ding)，並更好地(di)理解細胞(bao)在培(pei)養(yang)的微(wei)環境(jing)（即，細胞 - 細胞(bao)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)，氣(qi)體(ti)的(de)擴散(san)，與基質相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)）現在(zai)允(yun)許(xu)在無血(xue)清(qing)培養(yang)基中(zhong)某(mou)些(xie)細(xi)胞(bao)系(xi)的(de)培(pei)養(yang)。
培(pei)養(yang)物的主要優點是操縱(zong)物理化(hua)學(xue)（即，溫(wen)度，pH，滲透(tou)壓，O2和(he)CO2張(zhang)力）和(he)生(sheng)理環(huan)境(jing)（即，激素和(he)營(ying)養(yang)物濃(nong)度），其中(zhong)所述(shu)細胞繁(fan)殖(zhi)的(de)能力。除溫(wen)度，將(jiang)培養(yang)環境(jing)是由(you)生(sheng)長(chang)培養(yang)基進行控(kong)制(zhi)。
對(dui)於(yu)培(pei)養(yang)，只要我們(men)細(xi)心操作(zuo)，註(zhu)意細(xi)節，並(bing)不是大家說的那樣(yang)困(kun)難(nan)。對(dui)於(yu)有經(jing)驗(yan)和(he)有條(tiao)件的(de)客戶(hu)，建(jian)議由(you)公(gong)司(si)代(dai)為(wei)培(pei)養(yang)細胞及(ji)進(jin)行後續研究。

細(xi)胞復蘇技(ji)術(shu)：

1. 取(qu)出細胞，迅速(su)放入(ru)37℃溫(wen)水中(zhong)快速(su)解凍(dong)

2. 吸(xi)出細胞懸液(ye),並加10倍以上(shang)培(pei)養(yang)液

3. 1000r/分鐘(zhong)離心(xin)5分鐘(zhong)，去除(chu)上清

4. 用(yong)培養(yang)液適當稀釋後接種培養(yang)瓶(ping),放入(ru)37℃ CO2培養(yang)箱靜置培(pei)養(yang)

5. 鏡(jing)檢細胞貼壁能(neng)力，次日更(geng)換(huan)壹(yi)次培養(yang)液,繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)

培(pei)養(yang)方法：

收到細(xi)胞(bao)後，在倒置顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)整(zheng)個(ge)細胞(bao)生(sheng)長(chang)情況(kuang)：

如果(guo)細(xi)胞未長滿(man)，用(yong)75%酒(jiu)精噴灑(sa)整(zheng)個(ge)瓶(ping)消毒後放到超(chao)菌(jun)臺(tai)內，嚴格(ge)無菌(jun)操作(zuo)，打(da)開細(xi)胞(bao)培養(yang)瓶(ping)，留(liu)10ml培(pei)養(yang)液繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)。

如果(guo)細(xi)胞已(yi)長滿(man)（達(da)80-90%）。即可進行傳(chuan)代(dai)，具(ju)體(ti)步驟(zhou)如下：

a，棄(qi)去培(pei)養(yang)液，用PBS洗(xi)1-2次。

b，向(xiang)瓶(ping)內加入(ru)1.0-2.0ml酶液(ye)，在(zai)倒置顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞消化(hua)情況(kuang)，若細胞大(da)部分變(bian)圓，迅速(su)拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，吸取酶，加(jia)含有6ml 含(han)10%血(xue)清的(de)培養(yang)液，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞(bao)。

c，加(jia)入(ru)等量的的培(pei)養(yang)液，輕(qing)輕(qing)吹打(da)混勻後吸出壹(yi)半，分到新(xin)的(de)培養(yang)

d，傳(chuan)代(dai)比(bi)例：1:2-1:3

保(bao)存(cun)和(he)應(ying)用(yong)：

客戶(hu)可(ke)以(yi)根(gen)據(ju)自(zi)己的(de)需求選擇新(xin)鮮(xian)或者(zhe)凍(dong)存(cun)的(de)原代(dai)細(xi)胞(bao)，如是新鮮(xian)原代(dai)細(xi)胞(bao)，客戶(hu)收到細(xi)胞(bao)後應(ying)立即將(jiang)其放(fang)入(ru)CO2細(xi)胞培養(yang)箱內靜置後2-3h，再(zai)進行後續的實驗(yan)操作(zuo)。如是凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)，客戶(hu)收到細(xi)胞(bao)後應(ying)立即將(jiang)其放(fang)入(ru)液氮(dan)、-80℃冰(bing)箱(xiang)或立即進行復蘇(su)。

細(xi)胞復蘇的原則：

在(zai)實際(ji)操作(zuo)中(zhong)，凍(dong)存(cun)細(xi)胞(bao)要進行復蘇(su)，再(zai)培養(yang)傳(chuan)代(dai)。復(fu)蘇(su)細胞壹(yi)般采(cai)用(yong)快速(su)融化(hua)法。以(yi)保證(zheng)細胞(bao)外結(jie)晶快速(su)融化(hua)，以(yi)避(bi)免慢(man)速(su)融化(hua)水分滲入(ru)細胞(bao)內(nei)，再(zai)次形成(cheng)胞內結(jie)晶損(sun)傷細胞。

1）該(gai)細胞(bao)只能用於科(ke)研，不(bu)得(de)用於(yu)臨床。

2）收到細(xi)胞(bao)後首先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是否完(wan)好，培(pei)養(yang)液是否有漏液、渾濁(zhuo)等現象(xiang)，若有上(shang)述(shu)現象(xiang)發生(sheng)請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)。

3）仔細閱讀細(xi)胞(bao)說明(ming)書，了(le)解細胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如細(xi)胞(bao)形態(tai)、所用培養(yang)基、血清(qing)比(bi)例、所(suo)需細胞(bao)因(yin)子等。

4）用(yong)75%酒精擦拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表面，顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀態(tai)。因(yin)運輸問題(ti)貼壁細(xi)胞(bao)會(hui)有少量從瓶(ping)壁脫落，將(jiang)細胞(bao)置於(yu)培(pei)養(yang)箱內靜置培(pei)養(yang)過夜(ye)，隔(ge)天再(zai)取出(chu)觀(guan)察(cha)。此(ci)時(shi)多(duo)數(shu)細胞均會貼壁，若細胞仍(reng)不能(neng)貼壁請(qing)用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染色(se)測定(ding)細胞活力，如果(guo)證(zheng)實細(xi)胞活力正常，請將(jiang)細胞(bao)離心(xin)後用新鮮(xian)培養(yang)基再(zai)次貼壁培(pei)養(yang)；如果(guo)染色(se)結(jie)果顯示(shi)細胞(bao)無活力，請拍下照片及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)，信(xin)息(xi)確(que)認後我們為您再(zai)免費寄送(song)壹(yi)次。

5）請(qing)客戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條(tiao)件的(de)培(pei)養(yang)基用於(yu)細(xi)胞培養(yang)。培養(yang)瓶(ping)內多余(yu)的培(pei)養(yang)基可收集(ji)備用(yong)，細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)時(shi)可(ke)以壹(yi)定(ding)比例和(he)客戶(hu)自(zi)備的(de)培(pei)養(yang)基混合，使細胞(bao)逐漸(jian)適應(ying)培(pei)養(yang)條(tiao)件;建(jian)議直接(jie)購(gou)買我司(si)提供(gong)的(de)培養(yang)基。

6）建(jian)議客戶(hu)收到細(xi)胞(bao)後qian3天各拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照片，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀態(tai)，便於和(he)我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部溝(gou)通交(jiao)流。

細(xi)胞培養(yang)操作(zuo)

1）復(fu)蘇細胞：將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基混合均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基後吹勻。然(ran)後將(jiang)所有細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入(ru)含適量培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過夜(ye)（或將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培養(yang)過夜(ye)）。第(di)二天換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查細胞(bao)密(mi)度。

2）細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如果(guo)細(xi)胞密(mi)度達(da)80%-90%，即可進行傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上清，用(yong)不(bu)含鈣、鎂離(li)子的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液(ye)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消化(hua)液(ye)浸潤所(suo)有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置於37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細胞(bao)情況(kuang)而定(ding)），然(ran)後在顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞消化(hua)情況(kuang)，若細胞大(da)部分變(bian)圓並(bing)脫落，迅速(su)拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾下培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培養(yang)基終(zhong)止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後裝入(ru)無菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去上(shang)清液，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液後吹勻。

c、將(jiang)細胞(bao)懸液(ye)按(an)1:2比例分到新(xin)的(de)含8 mL培養(yang)基的新(xin)皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置於培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。

3）細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待細胞(bao)生長(chang)狀態(tai)良(liang)好時，可(ke)進(jin)行細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為例；

a、收集(ji)細(xi)胞(bao)，裝入(ru)無菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進行細胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數(shu)量(liang)加入(ru)無血(xue)清(qing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使細胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識。

c、將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位置(zhi)以便下次拿(na)取。

深(shen)圳(zhen)瑞清生物信(xin)息(xi)科(ke)技(ji)有限(xian)公(gong)司(si)經(jing)過數年(nian)的(de)努力發展(zhan)已(yi)迅速(su)成(cheng)為集產品(pin)研(yan)發、經(jing)營(ying)為(wei)壹(yi)體的(de)專(zhuan)業化(hua)生(sheng)物工程(cheng)公(gong)司(si)。公司(si)具(ju)有完(wan)善(shan)的(de)實(shi)驗(yan)技(ji)術(shu)開發(fa)平(ping)臺(tai)，成(cheng)熟的抗(kang)原、抗體(ti)研發(fa)系(xi)統，熟練(lian)掌(zhang)握各種酶聯技(ji)術(shu)，結(jie)合公(gong)司(si)的研發(fa)團(tuan)隊(dui)，可(ke)以有效(xiao)的(de)保證(zheng)公司(si)產品(pin)強的穩定(ding)性和(he)高(gao)的準(zhun)確(que)性，同(tong)時(shi)又具(ju)有競爭力的價(jia)格(ge)。 公司(si)主營ELISA試(shi)劑(ji)盒，目(mu)前可(ke)以(yi)提(ti)供(gong)生(sheng)化(hua)試(shi)劑(ji)、分子生(sheng)物學(xue)試(shi)劑(ji)及(ji)試(shi)劑(ji)盒，各種抗體及(ji)免疫(yi)學(xue)試(shi)劑(ji)盒、實(shi)驗(yan)耗材等多門(men)類上(shang)萬種產品(pin)，產品(pin)涉及(ji)分子生(sheng)物學(xue)、細(xi)胞生物學(xue)、免疫(yi)學(xue)等生命科(ke)學(xue)的(de)各個(ge)領域(yu)。