人(ren)肺微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮細胞(bao)

人(ren)肺(fei)微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮細胞(bao)需(xu)要(yao)準(zhun)備好(hao)細胞(bao)所要(yao)用到的培(pei)養(yang)基和相關(guan)試(shi)劑，雖(sui)然(ran)所有(you)的貼(tie)壁(bi)，半(ban)貼壁(bi)或(huo)者(zhe)懸(xuan)浮細胞(bao)處(chu)理方(fang)式差(cha)不多，但是不同的實(shi)驗室(shi)培(pei)養(yang)條件(jian)和(he)處(chu)理力度還有(you)試(shi)劑的批(pi)間差這些問(wen)題(ti)存在(zai)，也會(hui)導致(zhi)對細胞(bao)處(chu)理不當，  或(huo)者(zhe)環(huan)境(jing)的不適應而(er)造(zao)成細胞(bao)的死(si)亡(wang)。
人(ren)肺(fei)微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮細胞(bao)培(pei)養(yang)物的生(sheng)理(li)環(huan)境(jing)不同時定義為(wei)其(qi)物理(li)化學環(huan)境(jing)中(zhong)，更好地(di)理(li)解(jie)血(xue)清(qing)的組(zu)件(jian)，所必需的增(zeng)殖(zhi)的生(sheng)長(chang)因(yin)子的鑒(jian)定，並(bing)更好地(di)理(li)解(jie)細胞(bao)在(zai)培(pei)養(yang)的微(wei)環(huan)境(jing)（即，細胞(bao) - 細胞(bao)相互(hu)作用，氣體(ti)的擴散(san)，與(yu)基質(zhi)相互(hu)作用）現(xian)在(zai)允(yun)許(xu)在(zai)無(wu)血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)基中某些細胞(bao)系(xi)的培(pei)養(yang)。
培(pei)養(yang)物的主(zhu)要(yao)優點是操(cao)縱物(wu)理(li)化(hua)學（即，溫(wen)度，pH，滲(shen)透(tou)壓，O2和CO2張(zhang)力）和生(sheng)理(li)環(huan)境(jing)（即，激(ji)素(su)和(he)營(ying)養(yang)物濃度(du)），其(qi)中所述細胞(bao)繁(fan)殖的能(neng)力。除溫(wen)度，將(jiang)培(pei)養(yang)環(huan)境(jing)是由(you)生(sheng)長(chang)培(pei)養(yang)基進(jin)行(xing)控制(zhi)。
對(dui)於培(pei)養(yang)，只要(yao)我們(men)細心操作(zuo)，註意細節，並不是大家說(shuo)的那(na)樣(yang)困難(nan)。對(dui)於有(you)經驗和(he)有(you)條件(jian)的客(ke)戶(hu)，建議(yi)由(you)公(gong)司(si)代為培(pei)養(yang)細胞(bao)及(ji)進(jin)行(xing)後續(xu)研(yan)究(jiu)。

細胞(bao)復(fu)蘇(su)技術(shu)：

1. 取(qu)出細胞(bao)，迅(xun)速放(fang)入(ru)37℃溫(wen)水中快速解(jie)凍(dong)

2. 吸(xi)出細胞(bao)懸(xuan)液,並加(jia)10倍(bei)以(yi)上(shang)培(pei)養(yang)液

3. 1000r/分(fen)鐘(zhong)離(li)心5分鐘(zhong)，去除(chu)上(shang)清(qing)

4. 用培(pei)養(yang)液適(shi)當稀(xi)釋後接種(zhong)培(pei)養(yang)瓶(ping),放(fang)入(ru)37℃ CO2培(pei)養(yang)箱靜置培(pei)養(yang)

5. 鏡檢(jian)細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力，次日更換壹次培(pei)養(yang)液,繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)

培(pei)養(yang)方(fang)法：

收到細胞(bao)後，在(zai)倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)整個細胞(bao)生(sheng)長(chang)情(qing)況：

如果(guo)細胞(bao)未(wei)長(chang)滿(man)，用75%酒精噴灑(sa)整個瓶(ping)消(xiao)毒(du)後放(fang)到超菌臺內(nei)，嚴格無菌操作(zuo)，打(da)開細胞(bao)培(pei)養(yang)瓶(ping)，留10ml培(pei)養(yang)液繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)。

如果(guo)細胞(bao)已長(chang)滿(man)（達80-90%）。即可(ke)進(jin)行(xing)傳代(dai)，具體(ti)步驟如下(xia)：

a，棄(qi)去培(pei)養(yang)液，用PBS洗1-2次。

b，向(xiang)瓶(ping)內(nei)加(jia)入1.0-2.0ml酶(mei)液(ye)，在(zai)倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)消(xiao)化(hua)情況，若細胞(bao)大部分變(bian)圓，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作臺，吸取(qu)酶(mei)，加(jia)含有(you)6ml 含10%血(xue)清(qing)的培(pei)養(yang)液，輕輕吹打(da)細胞(bao)。

c，加(jia)入等(deng)量(liang)的的培(pei)養(yang)液，輕輕吹打(da)混勻(yun)後吸(xi)出壹半(ban)，分到新的培(pei)養(yang)

d，傳(chuan)代(dai)比例(li)：1:2-1:3

保(bao)存和(he)應(ying)用：

客(ke)戶(hu)可(ke)以根(gen)據自(zi)己(ji)的需(xu)求(qiu)選擇(ze)新鮮或(huo)者(zhe)凍(dong)存的原(yuan)代(dai)細胞(bao)，如是新鮮原(yuan)代(dai)細胞(bao)，客(ke)戶(hu)收到細胞(bao)後應(ying)立(li)即將(jiang)其(qi)放(fang)入(ru)CO2細胞(bao)培(pei)養(yang)箱內(nei)靜置後2-3h，再(zai)進(jin)行(xing)後續(xu)的實(shi)驗操(cao)作(zuo)。如是凍(dong)存細胞(bao)，客(ke)戶(hu)收到細胞(bao)後應(ying)立(li)即將(jiang)其(qi)放(fang)入(ru)液(ye)氮、-80℃冰箱(xiang)或(huo)立(li)即進(jin)行(xing)復蘇(su)。

細胞(bao)復(fu)蘇(su)的原(yuan)則(ze)：

在(zai)實(shi)際(ji)操作中，凍存細胞(bao)要(yao)進(jin)行(xing)復蘇(su)，再培(pei)養(yang)傳代(dai)。復蘇(su)細胞(bao)壹般(ban)采用快速(su)融(rong)化(hua)法。以保證細胞(bao)外(wai)結(jie)晶(jing)快速(su)融(rong)化(hua)，以避(bi)免(mian)慢速融(rong)化(hua)水分滲(shen)入細胞(bao)內(nei)，再(zai)次形成胞(bao)內(nei)結(jie)晶(jing)損傷(shang)細胞(bao)。

1）該細胞(bao)只(zhi)能(neng)用於科研(yan)，不得用於臨(lin)床(chuang)。

2）收到細胞(bao)後首(shou)先觀察(cha)細胞(bao)瓶(ping)是否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若有(you)上(shang)述現(xian)象(xiang)發生(sheng)請(qing)及時和(he)我(wo)們聯系。

3）仔(zai)細閱讀(du)細胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了(le)解(jie)細胞(bao)相關(guan)信息，如細胞(bao)形(xing)態、所用培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比例(li)、所需(xu)細胞(bao)因(yin)子等(deng)。

4）用75%酒精擦拭細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)貼(tie)壁(bi)細胞(bao)會(hui)有(you)少量(liang)從瓶(ping)壁(bi)脫(tuo)落(luo)，將(jiang)細胞(bao)置於培(pei)養(yang)箱內(nei)靜置培(pei)養(yang)過(guo)夜，隔天(tian)再取出觀察(cha)。此時多(duo)數細胞(bao)均(jun)會(hui)貼壁(bi)，若細胞(bao)仍不能(neng)貼(tie)壁(bi)請用臺盼(pan)藍染(ran)色測定細胞(bao)活(huo)力，如果(guo)證實(shi)細胞(bao)活(huo)力正(zheng)常，請(qing)將(jiang)細胞(bao)離(li)心後用新鮮培(pei)養(yang)基再次貼壁(bi)培(pei)養(yang)；如果(guo)染(ran)色結(jie)果(guo)顯示(shi)細胞(bao)無(wu)活力，請拍下(xia)照片(pian)及時和(he)我(wo)們聯系，信息確認(ren)後我(wo)們(men)為(wei)您再免(mian)費寄送(song)壹次。

5）請(qing)客(ke)戶(hu)用相同(tong)條件(jian)的培(pei)養(yang)基用於細胞(bao)培(pei)養(yang)。培(pei)養(yang)瓶(ping)內(nei)多(duo)余的培(pei)養(yang)基可(ke)收集備用，細胞(bao)傳(chuan)代時可(ke)以壹定比例(li)和客(ke)戶(hu)自(zi)備的培(pei)養(yang)基混合，使(shi)細胞(bao)逐(zhu)漸適應(ying)培(pei)養(yang)條件(jian);建(jian)議(yi)直(zhi)接購買(mai)我司(si)提(ti)供(gong)的培(pei)養(yang)基。

6）建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收到細胞(bao)後qian3天(tian)各(ge)拍(pai)幾張細胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於和我(wo)司技(ji)術(shu)部溝(gou)通(tong)交(jiao)流(liu)。

細胞(bao)培(pei)養(yang)操作(zuo)

1）復(fu)蘇(su)細胞(bao)：將(jiang)含有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混合均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所有(you)細胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入10 cm皿中，加(jia)入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第(di)二天換液(ye)並檢查細胞(bao)密(mi)度(du)。

2）細胞(bao)傳(chuan)代：如果(guo)細胞(bao)密(mi)度(du)達80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的PBS潤(run)洗細胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸潤(run)所有(you)細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置於37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞(bao)情(qing)況而(er)定），然(ran)後在(zai)顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細胞(bao)消(xiao)化(hua)情況，若細胞(bao)大部分變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作臺，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液按1:2比例(li)分到新的含8 mL培(pei)養(yang)基的新皿中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置於培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)。

3）細胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好時，可(ke)進(jin)行(xing)細胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；

a、收集細胞(bao)，裝(zhuang)入無菌離心管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據細胞(bao)數量(liang)加(jia)入無(wu)血(xue)清(qing)細胞(bao)凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註意凍存管(guan)做好標(biao)識(shi)。

c、將(jiang)凍存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存。記錄(lu)凍存管(guan)位(wei)置以(yi)便下(xia)次拿取。

深(shen)圳(zhen)瑞清(qing)生(sheng)物(wu)信息科技(ji)有(you)限公(gong)司(si)經過(guo)數年(nian)的努力發展(zhan)已迅(xun)速成(cheng)為集產品(pin)研發、經營(ying)為壹體(ti)的專(zhuan)業(ye)化生(sheng)物(wu)工程公(gong)司(si)。公(gong)司(si)具有(you)完(wan)善(shan)的實(shi)驗技(ji)術(shu)開發平(ping)臺，成熟(shu)的抗(kang)原(yuan)、抗(kang)體(ti)研(yan)發系(xi)統(tong)，熟(shu)練(lian)掌(zhang)握(wo)各(ge)種(zhong)酶(mei)聯技術(shu)，結(jie)合(he)公(gong)司(si)的研(yan)發團(tuan)隊(dui)，可(ke)以有(you)效(xiao)的保(bao)證公(gong)司(si)產品強(qiang)的穩(wen)定性和(he)高(gao)的準(zhun)確性，同(tong)時又(you)具有(you)競爭(zheng)力的價(jia)格(ge)。 公(gong)司(si)主營(ying)ELISA試(shi)劑盒，目前(qian)可(ke)以提(ti)供(gong)生(sheng)化(hua)試(shi)劑、分子生(sheng)物(wu)學試(shi)劑及試(shi)劑盒，各種(zhong)抗(kang)體及免(mian)疫(yi)學試(shi)劑盒、實(shi)驗耗材等(deng)多門(men)類(lei)上(shang)萬(wan)種(zhong)產(chan)品，產品(pin)涉及(ji)分(fen)子生(sheng)物(wu)學、細胞(bao)生(sheng)物(wu)學、免(mian)疫(yi)學等(deng)生(sheng)命(ming)科學的各(ge)個(ge)領域(yu)。