人肺泡(pao)上(shang)皮(pi)細(xi)胞

人(ren)肺泡(pao)上(shang)皮(pi)細(xi)胞需(xu)要(yao)準(zhun)備好(hao)細(xi)胞所(suo)要(yao)用到(dao)的培(pei)養(yang)基(ji)和(he)相(xiang)關試劑，雖(sui)然所(suo)有的貼壁(bi)，半(ban)貼壁(bi)或(huo)者(zhe)懸(xuan)浮細胞處理(li)方(fang)式(shi)差不(bu)多，但(dan)是(shi)不(bu)同的實驗室培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)和(he)處理(li)力(li)度(du)還有試劑的批間(jian)差這些問題(ti)存(cun)在(zai)，也(ye)會(hui)導(dao)致(zhi)對細胞處理(li)不(bu)當，  或(huo)者(zhe)環境(jing)的不(bu)適應而造成細(xi)胞的死(si)亡。
人(ren)肺泡(pao)上(shang)皮(pi)細(xi)胞培(pei)養(yang)物(wu)的生理(li)環境(jing)不(bu)同時(shi)定(ding)義(yi)為其(qi)物(wu)理(li)化(hua)學環境(jing)中(zhong)，更(geng)好(hao)地(di)理解(jie)血(xue)清(qing)的組件(jian)，所(suo)必(bi)需(xu)的增殖(zhi)的生長(chang)因(yin)子的鑒定(ding)，並(bing)更好(hao)地(di)理解(jie)細(xi)胞在培(pei)養(yang)的微環境(jing)（即(ji)，細(xi)胞 - 細胞相(xiang)互作用，氣(qi)體的擴散(san)，與基(ji)質相(xiang)互作用）現在(zai)允許(xu)在無(wu)血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)基(ji)中某些細胞系(xi)的培(pei)養(yang)。
培(pei)養(yang)物(wu)的主要(yao)優(you)點是(shi)操縱物理(li)化(hua)學（即，溫度(du)，pH，滲透(tou)壓(ya)，O2和(he)CO2張力(li)）和(he)生理(li)環境(jing)（即(ji)，激(ji)素和(he)營(ying)養(yang)物(wu)濃度），其(qi)中(zhong)所(suo)述細(xi)胞繁殖(zhi)的能力(li)。除(chu)溫(wen)度，將培(pei)養(yang)環境(jing)是(shi)由生長(chang)培(pei)養(yang)基(ji)進行(xing)控制(zhi)。
對(dui)於培(pei)養(yang)，只要(yao)我(wo)們細心(xin)操作，註意(yi)細節(jie)，並不(bu)是大(da)家(jia)說(shuo)的那(na)樣(yang)困(kun)難(nan)。對(dui)於(yu)有經驗和(he)有條(tiao)件(jian)的客戶(hu)，建(jian)議由公司代(dai)為培(pei)養(yang)細(xi)胞及進行(xing)後續(xu)研(yan)究(jiu)。

細(xi)胞復蘇(su)技(ji)術(shu)：

1. 取出(chu)細(xi)胞，迅速放入37℃溫水中快(kuai)速解(jie)凍(dong)

2. 吸(xi)出(chu)細(xi)胞懸液,並(bing)加10倍(bei)以上(shang)培(pei)養(yang)液

3. 1000r/分鐘(zhong)離(li)心(xin)5分鐘(zhong)，去(qu)除(chu)上(shang)清(qing)

4. 用培(pei)養(yang)液適當稀釋(shi)後接(jie)種(zhong)培(pei)養(yang)瓶,放入37℃ CO2培(pei)養(yang)箱靜置(zhi)培(pei)養(yang)

5. 鏡(jing)檢細(xi)胞貼壁(bi)能力(li)，次(ci)日(ri)更(geng)換(huan)壹(yi)次(ci)培(pei)養(yang)液,繼(ji)續培(pei)養(yang)

培(pei)養(yang)方(fang)法(fa)：

收(shou)到(dao)細(xi)胞後，在(zai)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察整個細胞生長(chang)情(qing)況：

如(ru)果細胞未長(chang)滿(man)，用75%酒(jiu)精噴(pen)灑整個瓶消毒(du)後放到(dao)超(chao)菌臺(tai)內(nei)，嚴(yan)格(ge)無(wu)菌操作，打開(kai)細(xi)胞培(pei)養(yang)瓶，留(liu)10ml培(pei)養(yang)液繼(ji)續培(pei)養(yang)。

如(ru)果細胞已長(chang)滿(man)（達80-90%）。即(ji)可進(jin)行(xing)傳代，具體步(bu)驟(zhou)如(ru)下(xia)：

a，棄(qi)去培(pei)養(yang)液，用PBS洗(xi)1-2次(ci)。

b，向瓶內(nei)加入(ru)1.0-2.0ml酶(mei)液，在(zai)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察細胞消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細胞大部分變(bian)圓(yuan)，迅(xun)速拿回操作臺，吸(xi)取酶(mei)，加含(han)有6ml 含(han)10%血清(qing)的培(pei)養(yang)液，輕輕吹打細(xi)胞。

c，加入(ru)等量(liang)的的培(pei)養(yang)液，輕輕吹打混(hun)勻(yun)後吸出(chu)壹(yi)半(ban)，分到(dao)新(xin)的培(pei)養(yang)

d，傳代比例(li)：1:2-1:3

保(bao)存(cun)和(he)應用：

客(ke)戶(hu)可(ke)以根(gen)據自己(ji)的需(xu)求選擇新(xin)鮮或(huo)者(zhe)凍(dong)存(cun)的原代(dai)細(xi)胞，如(ru)是(shi)新(xin)鮮原代(dai)細(xi)胞，客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞後應(ying)立即將其(qi)放入CO2細(xi)胞培(pei)養(yang)箱內(nei)靜置(zhi)後(hou)2-3h，再進行(xing)後續(xu)的實驗操作。如(ru)是(shi)凍(dong)存(cun)細(xi)胞，客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞後應(ying)立即將其(qi)放入液氮、-80℃冰(bing)箱或(huo)立(li)即(ji)進(jin)行(xing)復蘇(su)。

細(xi)胞復蘇(su)的原則(ze)：

在(zai)實際操作中，凍(dong)存(cun)細(xi)胞要(yao)進(jin)行(xing)復蘇(su)，再(zai)培(pei)養(yang)傳代。復蘇(su)細胞壹(yi)般(ban)采(cai)用快(kuai)速融化(hua)法(fa)。以保(bao)證細(xi)胞外結(jie)晶快速融化(hua)，以避(bi)免(mian)慢速融化(hua)水分滲(shen)入(ru)細胞內(nei)，再次(ci)形成胞內(nei)結晶(jing)損傷細胞。

1）該(gai)細胞只能用於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)得用於(yu)臨(lin)床(chuang)。

2）收(shou)到(dao)細(xi)胞後首(shou)先(xian)觀察細胞瓶是否完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是(shi)否有漏(lou)液、渾(hun)濁等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有上(shang)述現象(xiang)發生請(qing)及時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)。

3）仔(zai)細閱(yue)讀細(xi)胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了解(jie)細(xi)胞相(xiang)關信(xin)息，如(ru)細(xi)胞形態(tai)、所(suo)用培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比例(li)、所(suo)需(xu)細胞因子等(deng)。

4）用75%酒(jiu)精擦拭細胞瓶表面(mian)，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察細胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)貼(tie)壁(bi)細胞會(hui)有少量從(cong)瓶壁(bi)脫(tuo)落，將細胞置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱內(nei)靜置(zhi)培(pei)養(yang)過夜，隔天(tian)再(zai)取出(chu)觀察。此時多數細胞均會(hui)貼(tie)壁(bi)，若(ruo)細胞仍不(bu)能貼(tie)壁(bi)請(qing)用臺(tai)盼(pan)藍染色(se)測(ce)定細胞活(huo)力(li)，如(ru)果證實細胞活(huo)力(li)正(zheng)常(chang)，請(qing)將細胞離(li)心(xin)後(hou)用新(xin)鮮培(pei)養(yang)基(ji)再次(ci)貼(tie)壁(bi)培(pei)養(yang)；如(ru)果染色(se)結(jie)果顯(xian)示(shi)細胞無(wu)活(huo)力(li)，請(qing)拍下(xia)照片(pian)及時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)，信(xin)息確(que)認(ren)後我(wo)們為您再免(mian)費寄(ji)送壹(yi)次(ci)。

5）請(qing)客戶(hu)用相(xiang)同條(tiao)件(jian)的培(pei)養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)。培(pei)養(yang)瓶內(nei)多余(yu)的培(pei)養(yang)基(ji)可收集(ji)備用，細(xi)胞傳代時可(ke)以壹(yi)定(ding)比例(li)和(he)客戶(hu)自備的培(pei)養(yang)基(ji)混合，使(shi)細(xi)胞逐(zhu)漸(jian)適應培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian);建議直接(jie)購(gou)買我(wo)司提(ti)供(gong)的培(pei)養(yang)基(ji)。

6）建(jian)議客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞後qian3天(tian)各拍幾張細胞照片(pian)，記錄細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司技(ji)術(shu)部溝(gou)通(tong)交流。

細(xi)胞培(pei)養(yang)操作

1）復(fu)蘇細(xi)胞：將含(han)有1 mL細(xi)胞懸液的凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅速搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹勻。然後(hou)將所(suo)有細(xi)胞懸液加入(ru)含(han)適量培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜（或(huo)將細胞懸液加入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過夜）。第(di)二天換(huan)液並(bing)檢查(zha)細胞密度(du)。

2）細(xi)胞傳代：如(ru)果細胞密度(du)達80%-90%，即可(ke)進行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子的PBS潤洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤(run)所(suo)有細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細胞情況(kuang)而定），然後(hou)在(zai)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察細胞消化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細胞大部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速拿回操作臺，輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止消化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹勻。

c、將細胞懸液按(an)1:2比例(li)分到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的新(xin)皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)。

3）細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待(dai)細胞生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可進(jin)行(xing)細胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為例；

a、收(shou)集(ji)細胞，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞計數(shu)。

b、根(gen)據細(xi)胞數量(liang)加入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識。

c、將凍(dong)存(cun)管(guan)放入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮灌(guan)儲存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取。

深圳瑞(rui)清(qing)生物(wu)信(xin)息科(ke)技(ji)有限(xian)公司經過數年的努力(li)發展(zhan)已(yi)迅速成為集(ji)產(chan)品(pin)研(yan)發、經營(ying)為壹(yi)體的專業化(hua)生物(wu)工程(cheng)公司。公(gong)司具(ju)有完(wan)善(shan)的實驗技(ji)術(shu)開(kai)發平臺(tai)，成熟(shu)的抗(kang)原、抗(kang)體研(yan)發系(xi)統，熟(shu)練掌握(wo)各種酶(mei)聯(lian)技(ji)術(shu)，結(jie)合公司的研(yan)發團隊(dui)，可以有效(xiao)的保(bao)證公(gong)司產(chan)品(pin)強的穩定(ding)性和(he)高的準(zhun)確(que)性(xing)，同時又具(ju)有競(jing)爭力(li)的價(jia)格(ge)。 公司主(zhu)營(ying)ELISA試劑盒(he)，目(mu)前(qian)可以提(ti)供(gong)生化(hua)試劑、分子生(sheng)物學試劑及試劑盒(he)，各種抗(kang)體及免(mian)疫(yi)學試劑盒(he)、實驗耗材(cai)等多(duo)門(men)類上萬種(zhong)產(chan)品(pin)，產(chan)品(pin)涉(she)及分子生(sheng)物學、細胞生物(wu)學、免(mian)疫(yi)學等生命(ming)科學的各個領(ling)域。