大(da)鼠(shu)小(xiao)腸(chang)血(xue)管內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)

大(da)鼠(shu)小(xiao)腸(chang)血(xue)管內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)需要準(zhun)備(bei)好細(xi)胞(bao)所(suo)要用(yong)到(dao)的(de)培養(yang)基(ji)和(he)相(xiang)關(guan)試(shi)劑，雖然(ran)所(suo)有(you)的(de)貼(tie)壁(bi)，半(ban)貼壁或者懸浮(fu)細(xi)胞(bao)處(chu)理(li)方(fang)式差(cha)不(bu)多，但(dan)是不(bu)同(tong)的(de)實驗室(shi)培養(yang)條(tiao)件(jian)和(he)處(chu)理(li)力(li)度還有(you)試(shi)劑的(de)批(pi)間(jian)差這(zhe)些(xie)問題存(cun)在，也會(hui)導(dao)致對細(xi)胞(bao)處(chu)理(li)不(bu)當，  或(huo)者環(huan)境的(de)不(bu)適(shi)應(ying)而造成(cheng)細(xi)胞(bao)的(de)死亡。
大(da)鼠(shu)小(xiao)腸(chang)血(xue)管內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)培養(yang)物(wu)的(de)生(sheng)理環(huan)境不(bu)同(tong)時定義為(wei)其物(wu)理化(hua)學環(huan)境中(zhong)，更(geng)好地理解血(xue)清(qing)的(de)組件，所(suo)必需(xu)的(de)增(zeng)殖的(de)生(sheng)長因子(zi)的(de)鑒(jian)定，並更(geng)好地理解細(xi)胞(bao)在培養(yang)的(de)微(wei)環(huan)境（即，細(xi)胞(bao) - 細(xi)胞(bao)相(xiang)互(hu)作用，氣體(ti)的(de)擴(kuo)散，與基(ji)質(zhi)相(xiang)互(hu)作用）現(xian)在允許在(zai)無血(xue)清(qing)培養(yang)基(ji)中(zhong)某(mou)些(xie)細(xi)胞(bao)系的(de)培養(yang)。
培養(yang)物(wu)的(de)主(zhu)要優(you)點(dian)是操(cao)縱(zong)物理(li)化學(xue)（即，溫度，pH，滲(shen)透壓，O2和(he)CO2張力）和生(sheng)理環(huan)境（即，激(ji)素和營養(yang)物(wu)濃(nong)度），其中(zhong)所(suo)述(shu)細(xi)胞(bao)繁殖的(de)能(neng)力(li)。除(chu)溫度，將培養(yang)環(huan)境是由(you)生(sheng)長培養(yang)基(ji)進行(xing)控(kong)制(zhi)。
對於(yu)培養(yang)，只(zhi)要我(wo)們(men)細(xi)心(xin)操(cao)作(zuo)，註意細(xi)節(jie)，並不(bu)是大(da)家(jia)說(shuo)的(de)那(na)樣困(kun)難。對(dui)於有(you)經驗和有(you)條(tiao)件(jian)的(de)客(ke)戶(hu)，建(jian)議由(you)公司代為(wei)培養(yang)細(xi)胞(bao)及進行(xing)後(hou)續研究。

細(xi)胞(bao)復蘇技術：

1. 取(qu)出(chu)細(xi)胞(bao)，迅(xun)速放入(ru)37℃溫水中(zhong)快速(su)解凍

2. 吸(xi)出(chu)細(xi)胞(bao)懸液(ye),並加(jia)10倍以上(shang)培養(yang)液(ye)

3. 1000r/分(fen)鐘離心(xin)5分鐘，去除(chu)上(shang)清(qing)

4. 用(yong)培養(yang)液(ye)適(shi)當稀(xi)釋後接(jie)種培養(yang)瓶,放入(ru)37℃ CO2培養(yang)箱(xiang)靜(jing)置(zhi)培養(yang)

5. 鏡檢(jian)細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能力，次(ci)日更(geng)換(huan)壹次(ci)培養(yang)液(ye),繼(ji)續培養(yang)

培養(yang)方(fang)法：

收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後，在(zai)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察整個(ge)細(xi)胞(bao)生(sheng)長情(qing)況：

如(ru)果細(xi)胞(bao)未(wei)長滿(man)，用75%酒精噴(pen)灑(sa)整個(ge)瓶消(xiao)毒(du)後(hou)放到超菌臺內(nei)，嚴(yan)格(ge)無菌操(cao)作(zuo)，打開(kai)細(xi)胞(bao)培養(yang)瓶，留(liu)10ml培養(yang)液(ye)繼(ji)續培養(yang)。

如(ru)果細(xi)胞(bao)已(yi)長滿(man)（達80-90%）。即(ji)可(ke)進行(xing)傳(chuan)代(dai)，具(ju)體(ti)步驟(zhou)如(ru)下(xia)：

a，棄(qi)去(qu)培養(yang)液(ye)，用(yong)PBS洗1-2次(ci)。

b，向(xiang)瓶內加(jia)入(ru)1.0-2.0ml酶(mei)液，在(zai)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分變(bian)圓，迅(xun)速拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺，吸(xi)取(qu)酶(mei)，加含(han)有(you)6ml 含10%血(xue)清(qing)的(de)培養(yang)液(ye)，輕(qing)輕吹打細(xi)胞(bao)。

c，加(jia)入(ru)等(deng)量(liang)的(de)的(de)培養(yang)液(ye)，輕(qing)輕吹打混勻(yun)後(hou)吸(xi)出(chu)壹半(ban)，分(fen)到(dao)新(xin)的(de)培養(yang)

d，傳(chuan)代(dai)比(bi)例(li)：1:2-1:3

保存(cun)和應用(yong)：

客(ke)戶(hu)可以(yi)根據自己(ji)的(de)需(xu)求(qiu)選(xuan)擇新(xin)鮮(xian)或(huo)者凍存(cun)的(de)原(yuan)代細(xi)胞(bao)，如(ru)是新(xin)鮮(xian)原(yuan)代細(xi)胞(bao)，客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後應(ying)立(li)即(ji)將(jiang)其(qi)放入(ru)CO2細(xi)胞(bao)培養(yang)箱(xiang)內(nei)靜置(zhi)後2-3h，再(zai)進行(xing)後(hou)續的(de)實驗操(cao)作(zuo)。如(ru)是凍存(cun)細(xi)胞(bao)，客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後應(ying)立(li)即(ji)將(jiang)其(qi)放入(ru)液(ye)氮、-80℃冰箱(xiang)或(huo)立(li)即(ji)進行(xing)復蘇。

細(xi)胞(bao)復蘇的(de)原(yuan)則(ze)：

在(zai)實際操(cao)作(zuo)中(zhong)，凍存(cun)細(xi)胞(bao)要進行(xing)復蘇，再培養(yang)傳(chuan)代(dai)。復蘇細(xi)胞(bao)壹般(ban)采(cai)用(yong)快速(su)融(rong)化(hua)法。以(yi)保證(zheng)細(xi)胞(bao)外結(jie)晶(jing)快(kuai)速(su)融化，以避(bi)免慢(man)速融(rong)化水分滲(shen)入(ru)細(xi)胞(bao)內，再(zai)次(ci)形成(cheng)胞(bao)內結(jie)晶(jing)損(sun)傷(shang)細(xi)胞(bao)。

1）該細(xi)胞(bao)只能(neng)用於科研，不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)。

2）收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後首先(xian)觀察細(xi)胞(bao)瓶是否完好，培養(yang)液(ye)是否有(you)漏液(ye)、渾濁等(deng)現(xian)象，若(ruo)有(you)上述(shu)現(xian)象發生(sheng)請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯(lian)系。

3）仔細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)說明(ming)書，了(le)解細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用(yong)培養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比例(li)、所(suo)需(xu)細(xi)胞(bao)因子(zi)等(deng)。

4）用(yong)75%酒精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因運輸(shu)問題貼壁(bi)細(xi)胞(bao)會有(you)少量(liang)從(cong)瓶壁脫(tuo)落(luo)，將細(xi)胞(bao)置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)內(nei)靜置(zhi)培養(yang)過(guo)夜，隔天(tian)再取(qu)出(chu)觀(guan)察。此時多數(shu)細(xi)胞(bao)均(jun)會(hui)貼(tie)壁(bi)，若細(xi)胞(bao)仍不(bu)能(neng)貼(tie)壁請(qing)用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染色測(ce)定細(xi)胞(bao)活力(li)，如(ru)果證(zheng)實細(xi)胞(bao)活力(li)正(zheng)常，請(qing)將(jiang)細(xi)胞(bao)離心(xin)後用新(xin)鮮(xian)培養(yang)基(ji)再(zai)次(ci)貼(tie)壁(bi)培養(yang)；如(ru)果染色結(jie)果顯(xian)示細(xi)胞(bao)無活(huo)力，請(qing)拍下(xia)照(zhao)片(pian)及時和我(wo)們(men)聯(lian)系，信(xin)息(xi)確(que)認(ren)後我(wo)們(men)為(wei)您(nin)再免(mian)費(fei)寄送(song)壹次(ci)。

5）請(qing)客(ke)戶(hu)用相(xiang)同(tong)條(tiao)件(jian)的(de)培養(yang)基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培養(yang)。培養(yang)瓶內多余的(de)培養(yang)基(ji)可(ke)收(shou)集備(bei)用，細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)時(shi)可(ke)以(yi)壹定比(bi)例(li)和客(ke)戶(hu)自備(bei)的(de)培養(yang)基(ji)混合(he)，使(shi)細(xi)胞(bao)逐漸(jian)適(shi)應培養(yang)條(tiao)件(jian);建(jian)議直(zhi)接(jie)購買(mai)我司提(ti)供(gong)的(de)培養(yang)基(ji)。

6）建(jian)議客(ke)戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後qian3天(tian)各拍幾張細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便於和我司技術部(bu)溝通交流。

細(xi)胞(bao)培養(yang)操(cao)作(zuo)

1）復蘇細(xi)胞(bao)：將(jiang)含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速搖晃(huang)解凍，加4 mL培養(yang)基(ji)混合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入(ru)含(han)適量培養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過(guo)夜（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二天(tian)換液(ye)並檢(jian)查細(xi)胞(bao)密度。

2）細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細(xi)胞(bao)密度達80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳(chuan)代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的(de)PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)培養(yang)瓶中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將培養(yang)瓶置(zhi)於37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況而(er)定），然(ran)後(hou)在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分變(bian)圓並脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲幾(ji)下(xia)培養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝入(ru)無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液(ye)按1:2比(bi)例(li)分到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿中(zhong)或者瓶中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)。

3）細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態(tai)良(liang)好時，可(ke)進行(xing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例；

a、收(shou)集細(xi)胞(bao)，裝入(ru)無菌離心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根據細(xi)胞(bao)數(shu)量加(jia)入(ru)無血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)液，使細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支凍存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註意凍存(cun)管做(zuo)好標識(shi)。

c、將(jiang)凍(dong)存(cun)管放入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入(ru)液(ye)氮灌儲(chu)存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管位置(zhi)以便(bian)下(xia)次(ci)拿取(qu)。

深(shen)圳瑞(rui)清(qing)生(sheng)物信(xin)息(xi)科(ke)技有(you)限公司經過(guo)數(shu)年(nian)的(de)努力發展已(yi)迅(xun)速成(cheng)為(wei)集產品研發、經(jing)營為(wei)壹體(ti)的(de)專(zhuan)業化(hua)生(sheng)物工程公司。公司具(ju)有(you)完善(shan)的(de)實驗技術開發平(ping)臺，成(cheng)熟的(de)抗原(yuan)、抗體(ti)研發系統(tong)，熟練(lian)掌握(wo)各(ge)種酶(mei)聯技術，結合(he)公司的(de)研發團隊，可以(yi)有(you)效的(de)保證(zheng)公司產品強的(de)穩定性(xing)和(he)高(gao)的(de)準(zhun)確(que)性(xing)，同(tong)時又(you)具(ju)有(you)競爭(zheng)力的(de)價(jia)格(ge)。 公司主營ELISA試(shi)劑盒，目前(qian)可以(yi)提(ti)供(gong)生(sheng)化試(shi)劑、分子(zi)生(sheng)物學(xue)試(shi)劑及試(shi)劑盒，各種抗體(ti)及免(mian)疫(yi)學試(shi)劑盒、實驗耗(hao)材等(deng)多門(men)類(lei)上萬種產品，產品涉及(ji)分(fen)子(zi)生(sheng)物學(xue)、細(xi)胞(bao)生(sheng)物學(xue)、免疫(yi)學等(deng)生(sheng)命科(ke)學的(de)各(ge)個(ge)領域(yu)。