大鼠(shu)肝實質細(xi)胞(bao)

大鼠(shu)肝實質細(xi)胞(bao)需要(yao)準備(bei)好細胞(bao)所(suo)要(yao)用(yong)到的(de)培(pei)養(yang)基和相(xiang)關(guan)試(shi)劑，雖(sui)然(ran)所(suo)有的(de)貼壁(bi)，半貼壁(bi)或者(zhe)懸(xuan)浮細胞(bao)處(chu)理方式(shi)差不(bu)多，但(dan)是(shi)不(bu)同(tong)的實(shi)驗室培(pei)養(yang)條件(jian)和處理力(li)度還(hai)有試(shi)劑的(de)批間(jian)差(cha)這些問題存在(zai)，也(ye)會導(dao)致對細胞(bao)處(chu)理不(bu)當，  或者(zhe)環(huan)境(jing)的(de)不(bu)適應(ying)而造(zao)成細胞(bao)的(de)死亡。
大鼠(shu)肝實質細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)物(wu)的(de)生理環(huan)境(jing)不(bu)同(tong)時(shi)定(ding)義(yi)為(wei)其物(wu)理化學(xue)環(huan)境(jing)中，更好地理解血(xue)清(qing)的組件(jian)，所(suo)必(bi)需的增殖的生長(chang)因(yin)子(zi)的鑒定(ding)，並更好地理解細(xi)胞(bao)在(zai)培(pei)養(yang)的微環(huan)境(jing)（即，細(xi)胞(bao) - 細(xi)胞(bao)相(xiang)互作用(yong)，氣體(ti)的(de)擴散(san)，與基質相(xiang)互作用(yong)）現在(zai)允(yun)許在(zai)無血清(qing)培養(yang)基中某些細(xi)胞(bao)系的培(pei)養(yang)。
培(pei)養(yang)物(wu)的(de)主要(yao)優點(dian)是操(cao)縱物(wu)理化學(xue)（即，溫(wen)度(du)，pH，滲(shen)透壓，O2和CO2張力(li)）和生理環(huan)境(jing)（即，激素(su)和營(ying)養(yang)物(wu)濃(nong)度(du)），其中所(suo)述細胞(bao)繁(fan)殖的能(neng)力(li)。除溫(wen)度(du)，將(jiang)培養(yang)環(huan)境(jing)是(shi)由生長(chang)培(pei)養(yang)基進行(xing)控制(zhi)。
對於培(pei)養(yang)，只要(yao)我們細(xi)心操作，註意細節，並不(bu)是大家(jia)說的(de)那(na)樣困(kun)難。對於有經驗(yan)和有條件(jian)的客(ke)戶(hu)，建(jian)議(yi)由公司(si)代為(wei)培養(yang)細胞(bao)及(ji)進行(xing)後(hou)續研(yan)究(jiu)。

細胞(bao)復蘇技術(shu)：

1. 取出(chu)細胞(bao)，迅(xun)速(su)放(fang)入(ru)37℃溫(wen)水中快速(su)解凍(dong)

2. 吸出細胞(bao)懸(xuan)液,並加10倍(bei)以(yi)上培養(yang)液

3. 1000r/分鐘(zhong)離(li)心5分鐘(zhong)，去除(chu)上清

4. 用(yong)培養(yang)液適當(dang)稀(xi)釋(shi)後接(jie)種培(pei)養(yang)瓶,放(fang)入(ru)37℃ CO2培(pei)養(yang)箱(xiang)靜置培養(yang)

5. 鏡檢細胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力(li)，次(ci)日(ri)更(geng)換(huan)壹(yi)次(ci)培養(yang)液,繼續培養(yang)

培養(yang)方法：

收到(dao)細胞(bao)後(hou)，在(zai)倒(dao)置顯微鏡下觀(guan)察整(zheng)個細(xi)胞(bao)生長(chang)情(qing)況：

如果細(xi)胞(bao)未長(chang)滿(man)，用(yong)75%酒精(jing)噴灑(sa)整(zheng)個瓶(ping)消(xiao)毒後(hou)放(fang)到超(chao)菌臺(tai)內(nei)，嚴(yan)格無菌操(cao)作，打開(kai)細胞(bao)培(pei)養(yang)瓶，留10ml培(pei)養(yang)液繼續培養(yang)。

如果細(xi)胞(bao)已(yi)長(chang)滿(man)（達(da)80-90%）。即可進行(xing)傳代，具(ju)體步(bu)驟(zhou)如下：

a，棄去培(pei)養(yang)液，用(yong)PBS洗1-2次(ci)。

b，向瓶(ping)內加入(ru)1.0-2.0ml酶(mei)液，在(zai)倒(dao)置顯微鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化情(qing)況，若(ruo)細胞(bao)大部(bu)分變圓，迅速(su)拿(na)回(hui)操作臺，吸取酶(mei)，加含有6ml 含(han)10%血(xue)清的培(pei)養(yang)液，輕輕吹打細(xi)胞(bao)。

c，加入(ru)等(deng)量的(de)的培(pei)養(yang)液，輕輕吹打混勻後(hou)吸出壹半，分到新(xin)的(de)培(pei)養(yang)

d，傳代比例(li)：1:2-1:3

保存和應用(yong)：

客(ke)戶(hu)可以(yi)根(gen)據自(zi)己(ji)的(de)需求選擇(ze)新(xin)鮮(xian)或者(zhe)凍存的(de)原代細胞(bao)，如是新(xin)鮮(xian)原(yuan)代細胞(bao)，客(ke)戶(hu)收到(dao)細胞(bao)後(hou)應立(li)即將(jiang)其放(fang)入(ru)CO2細胞(bao)培(pei)養(yang)箱(xiang)內靜置後2-3h，再進行(xing)後(hou)續的實(shi)驗(yan)操作。如是凍(dong)存細(xi)胞(bao)，客(ke)戶(hu)收到(dao)細胞(bao)後(hou)應立(li)即將(jiang)其放(fang)入(ru)液氮、-80℃冰(bing)箱(xiang)或立(li)即進(jin)行(xing)復蘇。

細胞(bao)復蘇的原則：

在(zai)實(shi)際操作中，凍存細(xi)胞(bao)要(yao)進行(xing)復蘇，再培養(yang)傳代。復蘇細胞(bao)壹(yi)般采用(yong)快速(su)融(rong)化(hua)法。以(yi)保證細胞(bao)外(wai)結晶快(kuai)速(su)融(rong)化(hua)，以(yi)避(bi)免(mian)慢速(su)融(rong)化(hua)水分滲(shen)入(ru)細(xi)胞(bao)內(nei)，再次(ci)形成胞(bao)內(nei)結晶損(sun)傷(shang)細胞(bao)。

1）該細胞(bao)只(zhi)能(neng)用(yong)於科(ke)研(yan)，不(bu)得用(yong)於臨床。

2）收到(dao)細胞(bao)後(hou)首先(xian)觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否完(wan)好，培養(yang)液是否有漏(lou)液、渾濁(zhuo)等(deng)現象，若(ruo)有上述現象發(fa)生請及(ji)時(shi)和我們聯(lian)系。

3）仔(zai)細閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了(le)解細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信息(xi)，如細胞(bao)形態、所(suo)用(yong)培養(yang)基、血清(qing)比例(li)、所(suo)需細胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)。

4）用(yong)75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)貼壁(bi)細胞(bao)會(hui)有少(shao)量從瓶壁(bi)脫落(luo)，將(jiang)細胞(bao)置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)內靜置培養(yang)過夜(ye)，隔天(tian)再取出觀(guan)察。此(ci)時(shi)多數(shu)細(xi)胞(bao)均(jun)會貼壁(bi)，若(ruo)細胞(bao)仍(reng)不(bu)能(neng)貼壁(bi)請用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染(ran)色測定(ding)細胞(bao)活(huo)力(li)，如果證實細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)正(zheng)常，請將(jiang)細(xi)胞(bao)離(li)心後用(yong)新(xin)鮮(xian)培(pei)養(yang)基再次(ci)貼壁(bi)培養(yang)；如果染(ran)色結(jie)果(guo)顯示細胞(bao)無活力(li)，請拍(pai)下照片及(ji)時(shi)和我們聯(lian)系，信息(xi)確認後我們為(wei)您再免(mian)費(fei)寄(ji)送壹(yi)次(ci)。

5）請客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條件(jian)的培(pei)養(yang)基用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。培養(yang)瓶內多余(yu)的(de)培養(yang)基可收集(ji)備(bei)用(yong)，細胞(bao)傳代時(shi)可以(yi)壹定(ding)比例(li)和客(ke)戶(hu)自(zi)備(bei)的培(pei)養(yang)基混合，使(shi)細胞(bao)逐(zhu)漸適(shi)應培(pei)養(yang)條件(jian);建(jian)議(yi)直(zhi)接(jie)購(gou)買(mai)我司提(ti)供(gong)的培養(yang)基。

6）建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收到(dao)細胞(bao)後(hou)qian3天(tian)各拍(pai)幾張細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記錄細(xi)胞(bao)狀態，便(bian)於和我司技術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong)交(jiao)流。

細胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1）復蘇細胞(bao)：將含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中迅速(su)搖晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培養(yang)基混合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離(li)心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yang)基後吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所(suo)有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)含(han)適量(liang)培養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶中培養(yang)過夜(ye)（或將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基，培養(yang)過夜(ye)）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並檢查細胞(bao)密(mi)度。

2）細胞(bao)傳代：如果細(xi)胞(bao)密(mi)度達80%-90%，即可進行(xing)傳代培養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上清，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化液培養(yang)瓶中，使(shi)消化(hua)液浸潤(run)所(suo)有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培養(yang)瓶置於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況而定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯微鏡下觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化情(qing)況，若(ruo)細胞(bao)大部(bu)分變圓並脫落，迅速(su)拿(na)回(hui)操作臺，輕敲幾下培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培養(yang)基終止消(xiao)化。輕輕打勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yang)液後吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比例(li)分到新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的新(xin)皿(min)中或者(zhe)瓶中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。

3）細胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細胞(bao)生長(chang)狀態良好時(shi)，可進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；

a、收集(ji)細胞(bao)，裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心管中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心4 min，棄去上清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計數。

b、根(gen)據細(xi)胞(bao)數(shu)量加入(ru)無血清(qing)細胞(bao)凍(dong)存液，使(shi)細胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每(mei)支凍存管(guan)凍存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意(yi)凍存管(guan)做好標識。

c、將凍(dong)存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液氮灌(guan)儲存。記錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

深圳瑞清生物(wu)信(xin)息(xi)科技有限(xian)公司(si)經過數(shu)年的(de)努(nu)力(li)發(fa)展已迅速(su)成為(wei)集產(chan)品(pin)研(yan)發(fa)、經營(ying)為(wei)壹體(ti)的(de)專(zhuan)業化生物(wu)工(gong)程公司(si)。公司(si)具(ju)有完(wan)善(shan)的(de)實(shi)驗(yan)技術(shu)開(kai)發(fa)平臺，成熟的(de)抗(kang)原、抗(kang)體研(yan)發(fa)系統(tong)，熟練(lian)掌(zhang)握各種酶(mei)聯技術(shu)，結合公司(si)的研(yan)發(fa)團(tuan)隊(dui)，可以(yi)有效(xiao)的(de)保證公司(si)產(chan)品(pin)強(qiang)的穩(wen)定(ding)性(xing)和高(gao)的準確性(xing)，同(tong)時(shi)又(you)具(ju)有競爭力(li)的價(jia)格(ge)。 公司(si)主營(ying)ELISA試(shi)劑盒(he)，目前(qian)可以(yi)提(ti)供(gong)生化試(shi)劑、分子(zi)生物(wu)學(xue)試(shi)劑及(ji)試(shi)劑盒(he)，各(ge)種抗(kang)體及(ji)免(mian)疫學(xue)試(shi)劑盒(he)、實(shi)驗(yan)耗(hao)材(cai)等(deng)多門類上萬種產(chan)品(pin)，產(chan)品(pin)涉(she)及(ji)分子(zi)生物(wu)學(xue)、細(xi)胞(bao)生物(wu)學(xue)、免(mian)疫學(xue)等(deng)生命(ming)科學(xue)的(de)各個領域。