大鼠(shu)外周血白(bai)細(xi)胞(bao)

大鼠(shu)外周血白(bai)細(xi)胞(bao)需要(yao)準(zhun)備(bei)好細胞(bao)所(suo)要用(yong)到的(de)培養基(ji)和(he)相關(guan)試劑(ji)，雖然(ran)所(suo)有的(de)貼壁(bi)，半貼壁(bi)或(huo)者懸浮(fu)細胞(bao)處理(li)方(fang)式(shi)差(cha)不(bu)多(duo)，但(dan)是(shi)不(bu)同(tong)的實驗室(shi)培(pei)養條件(jian)和(he)處理(li)力(li)度還(hai)有(you)試劑(ji)的(de)批間(jian)差(cha)這些問題(ti)存在，也會導(dao)致(zhi)對細(xi)胞(bao)處理(li)不(bu)當，  或(huo)者環(huan)境(jing)的(de)不(bu)適應而造成(cheng)細胞(bao)的死(si)亡(wang)。
大鼠(shu)外周血白(bai)細(xi)胞(bao)培養物的(de)生理(li)環(huan)境(jing)不(bu)同(tong)時(shi)定(ding)義為其物理(li)化(hua)學(xue)環(huan)境(jing)中(zhong)，更好地理(li)解(jie)血清(qing)的(de)組(zu)件，所(suo)必需的(de)增(zeng)殖的生長(chang)因子(zi)的(de)鑒定(ding)，並更好地理(li)解(jie)細(xi)胞(bao)在培養的微(wei)環(huan)境(jing)（即，細胞(bao) - 細胞(bao)相互作用(yong)，氣(qi)體(ti)的擴(kuo)散，與基(ji)質(zhi)相互作用(yong)）現(xian)在允許在無血清(qing)培(pei)養基(ji)中(zhong)某些細胞(bao)系的(de)培養。
培養物的(de)主要(yao)優(you)點(dian)是(shi)操縱(zong)物理(li)化(hua)學(xue)（即，溫度，pH，滲(shen)透(tou)壓(ya)，O2和(he)CO2張力）和(he)生理(li)環(huan)境(jing)（即，激素和(he)營(ying)養物濃度），其中所(suo)述(shu)細(xi)胞(bao)繁殖的能(neng)力。除(chu)溫度，將培養環(huan)境(jing)是(shi)由生長(chang)培(pei)養基(ji)進(jin)行(xing)控(kong)制。
對於培(pei)養，只要我們細(xi)心操(cao)作，註意細節(jie)，並不(bu)是(shi)大家說的那(na)樣(yang)困(kun)難(nan)。對於有(you)經(jing)驗和(he)有(you)條件的客(ke)戶，建(jian)議(yi)由公(gong)司代為培養細胞(bao)及進行(xing)後(hou)續研究(jiu)。

細(xi)胞(bao)復蘇(su)技(ji)術(shu)：

1. 取(qu)出(chu)細胞(bao)，迅速(su)放入(ru)37℃溫(wen)水(shui)中快(kuai)速(su)解凍(dong)

2. 吸出細(xi)胞(bao)懸液,並加(jia)10倍(bei)以上培養液

3. 1000r/分(fen)鐘(zhong)離(li)心5分(fen)鐘(zhong)，去除(chu)上清(qing)

4. 用(yong)培養液適當稀釋後(hou)接種培養瓶,放(fang)入(ru)37℃ CO2培養箱靜(jing)置培養

5. 鏡檢(jian)細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能(neng)力，次(ci)日更(geng)換壹次(ci)培(pei)養液,繼續培養

培(pei)養方法(fa)：

收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)，在倒(dao)置顯微鏡下觀察整個(ge)細胞(bao)生長(chang)情況：

如(ru)果細(xi)胞(bao)未(wei)長(chang)滿(man)，用(yong)75%酒精(jing)噴灑(sa)整個(ge)瓶消毒(du)後(hou)放到(dao)超菌(jun)臺內，嚴(yan)格無菌(jun)操(cao)作，打開細(xi)胞(bao)培養瓶，留(liu)10ml培(pei)養液繼續培養。

如(ru)果細(xi)胞(bao)已(yi)長(chang)滿(man)（達(da)80-90%）。即可進(jin)行(xing)傳代，具(ju)體(ti)步驟如(ru)下：

a，棄(qi)去培(pei)養液，用(yong)PBS洗1-2次。

b，向(xiang)瓶(ping)內加(jia)入(ru)1.0-2.0ml酶液，在倒(dao)置顯微鏡下觀察細(xi)胞(bao)消化情況，若(ruo)細胞(bao)大部(bu)分變(bian)圓(yuan)，迅速(su)拿回操作臺，吸取酶(mei)，加(jia)含有6ml 含10%血清(qing)的(de)培(pei)養液，輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)。

c，加(jia)入(ru)等量的的(de)培(pei)養液，輕輕吹(chui)打(da)混(hun)勻後(hou)吸出壹(yi)半，分(fen)到新(xin)的(de)培(pei)養

d，傳代比例(li)：1:2-1:3

保存和(he)應用(yong)：

客(ke)戶可以(yi)根(gen)據(ju)自己(ji)的需求(qiu)選(xuan)擇新(xin)鮮或(huo)者凍(dong)存的原(yuan)代細胞(bao)，如(ru)是新(xin)鮮原(yuan)代細胞(bao)，客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)應立即將其放入(ru)CO2細胞(bao)培養箱內靜(jing)置後(hou)2-3h，再進(jin)行(xing)後(hou)續的實驗操作。如(ru)是凍(dong)存細胞(bao)，客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)應立即將其放入(ru)液氮、-80℃冰(bing)箱或(huo)立即進行(xing)復(fu)蘇(su)。

細胞(bao)復蘇(su)的原(yuan)則(ze)：

在實際操作中，凍(dong)存細胞(bao)要進(jin)行(xing)復(fu)蘇(su)，再(zai)培(pei)養傳代。復蘇細胞(bao)壹般采用(yong)快速(su)融化(hua)法(fa)。以(yi)保證(zheng)細胞(bao)外結(jie)晶(jing)快速(su)融化(hua)，以(yi)避免慢速(su)融化(hua)水(shui)分滲(shen)入(ru)細(xi)胞(bao)內，再(zai)次形(xing)成(cheng)胞(bao)內結(jie)晶(jing)損(sun)傷細胞(bao)。

1）該細(xi)胞(bao)只能(neng)用(yong)於科研(yan)，不(bu)得(de)用(yong)於臨床(chuang)。

2）收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀察細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否完(wan)好，培養液是否有(you)漏(lou)液、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有上述(shu)現(xian)象(xiang)發(fa)生請(qing)及時(shi)和(he)我們聯系。

3）仔細閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相關(guan)信息，如(ru)細胞(bao)形(xing)態、所(suo)用(yong)培養基(ji)、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需細(xi)胞(bao)因子(zi)等(deng)。

4）用(yong)75%酒精(jing)擦拭細胞(bao)瓶表(biao)面，顯微鏡下觀察細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因運輸問題(ti)貼壁(bi)細(xi)胞(bao)會有少(shao)量從瓶(ping)壁脫(tuo)落，將細胞(bao)置於培(pei)養箱內靜(jing)置培養過(guo)夜，隔天(tian)再(zai)取(qu)出(chu)觀察。此(ci)時(shi)多(duo)數(shu)細胞(bao)均(jun)會貼壁(bi)，若(ruo)細胞(bao)仍(reng)不(bu)能(neng)貼壁(bi)請(qing)用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)測定(ding)細(xi)胞(bao)活(huo)力，如(ru)果證(zheng)實細胞(bao)活(huo)力正常，請(qing)將細胞(bao)離(li)心後(hou)用(yong)新鮮培養基(ji)再(zai)次貼壁(bi)培(pei)養；如(ru)果染(ran)色(se)結果顯示(shi)細(xi)胞(bao)無活(huo)力，請(qing)拍下(xia)照(zhao)片(pian)及時(shi)和(he)我們聯系，信息確認後(hou)我們為(wei)您再免(mian)費寄(ji)送壹次(ci)。

5）請(qing)客戶用(yong)相同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養基(ji)用(yong)於細(xi)胞(bao)培養。培養瓶內多(duo)余(yu)的(de)培(pei)養基(ji)可收(shou)集備(bei)用(yong)，細胞(bao)傳代時(shi)可以(yi)壹(yi)定(ding)比(bi)例(li)和(he)客(ke)戶自(zi)備(bei)的培(pei)養基(ji)混(hun)合(he)，使細胞(bao)逐漸(jian)適應培養條件(jian);建(jian)議(yi)直接購買(mai)我司提供(gong)的培養基(ji)。

6）建(jian)議(yi)客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)qian3天(tian)各(ge)拍幾(ji)張細胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄細胞(bao)狀態(tai)，便於和(he)我司技(ji)術(shu)部(bu)溝通(tong)交流(liu)。

細(xi)胞(bao)培養操作

1）復蘇(su)細(xi)胞(bao)：將含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液的凍(dong)存管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條件下離(li)心3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將所(suo)有細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)含適量(liang)培(pei)養基(ji)的(de)培養瓶中(zhong)培(pei)養過(guo)夜（或(huo)將細胞(bao)懸液加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養基(ji)，培(pei)養過(guo)夜）。第二天(tian)換(huan)液並檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密度。

2）細胞(bao)傳代：如(ru)果細(xi)胞(bao)密度達(da)80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳代培養。

a、棄(qi)去培(pei)養上清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗細胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液培養瓶中(zhong)，使消化液浸潤所(suo)有細(xi)胞(bao)，將培養瓶置於37℃培(pei)養箱中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情況而定(ding)），然(ran)後(hou)在顯微鏡下觀察細(xi)胞(bao)消化情況，若(ruo)細胞(bao)大部(bu)分變(bian)圓(yuan)並脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿回操作臺，輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止消化。輕(qing)輕打勻後(hou)裝入(ru)無菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹勻。

c、將細胞(bao)懸液按(an)1:2比例(li)分到(dao)新的(de)含8 mL培養基(ji)的(de)新皿中或(huo)者瓶(ping)中，置於培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養。

3）細胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時(shi)，可進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面 T25 瓶(ping)為例(li)；

a、收(shou)集細(xi)胞(bao)，裝入(ru)無菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數(shu)量加(jia)入(ru)無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞(bao)懸液，註意凍(dong)存管(guan)做好標(biao)識。

c、將凍(dong)存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入(ru)液氮灌儲(chu)存。記錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置以便(bian)下次(ci)拿取。

深(shen)圳(zhen)瑞清(qing)生物信息科技(ji)有(you)限(xian)公(gong)司經過(guo)數(shu)年(nian)的(de)努(nu)力(li)發(fa)展(zhan)已(yi)迅(xun)速(su)成(cheng)為集產(chan)品(pin)研發(fa)、經(jing)營為(wei)壹體(ti)的專(zhuan)業化(hua)生物工(gong)程公(gong)司。公(gong)司具(ju)有完(wan)善的(de)實驗技(ji)術(shu)開發(fa)平(ping)臺，成(cheng)熟的抗原(yuan)、抗體(ti)研發(fa)系(xi)統，熟練掌握(wo)各(ge)種(zhong)酶聯技(ji)術(shu)，結(jie)合(he)公(gong)司的研(yan)發(fa)團隊(dui)，可以(yi)有(you)效(xiao)的(de)保證(zheng)公(gong)司產品(pin)強(qiang)的(de)穩(wen)定(ding)性和(he)高(gao)的準確性，同(tong)時(shi)又具(ju)有競爭力(li)的(de)價格。 公(gong)司主營(ying)ELISA試劑(ji)盒(he)，目前(qian)可以(yi)提供(gong)生化試劑(ji)、分(fen)子(zi)生物學(xue)試劑(ji)及試劑(ji)盒(he)，各(ge)種(zhong)抗體(ti)及免疫(yi)學(xue)試劑(ji)盒(he)、實驗耗材(cai)等多(duo)門(men)類上(shang)萬(wan)種產(chan)品(pin)，產品(pin)涉(she)及分子(zi)生物學(xue)、細胞(bao)生物學(xue)、免疫(yi)學(xue)等生命(ming)科學(xue)的各(ge)個(ge)領域。