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技術(shu)文(wen)章(zhang)/ article
更新(xin)時間(jian):2023-07-04
瀏覽(lan)次數:1061實(shi)驗(yan)的時候總(zong)是(shi)會出現壹些(xie)誤(wu)差(cha),那(na)麽在(zai)ELISA試劑(ji)盒(he)實(shi)驗前(qian)我們(men)該(gai)如何(he)避免(mian)這些誤區呢(ne)?在(zai)實(shi)驗(yan)前(qian)我(wo)們(men)又(you)有哪(na)些(xie)需要註(zhu)意事(shi)項(xiang)呢(ne)?
2、確(que)定試劑(ji)盒(he)在(zai)有效(xiao)期(qi)內;
4、標本制備要(yao)規範(fan),每(mei)份(fen)標(biao)本體(ti)積(ji)要按2-3個復(fu)孔以上的量制(zhi)備(bei)(貯(zhu)存),盡(jin)量分裝(zhuang)做備(bei)份(fen)。短(duan)期(qi)內無(wu)法實(shi)驗者,註意低溫(wen)保存;
6、根據檢測標本數量確(que)定所需試劑(ji)的量;
7、按(an)說(shuo)明(ming)書(shu)將(jiang)所(suo)用試劑(ji)平衡至(zhi)室溫(wen),配制所(suo)需試劑(ji)。
1.正(zheng)式試驗時,應分別(bie)以陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)與(yu)陰性(xing)對(dui)照(zhao)控(kong)制(zhi)試驗條件(jian),待(dai)檢(jian)樣(yang)品應(ying)作壹(yi)式二(er)份(fen),以保證(zheng)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)的準(zhun)確(que)性(xing)。有時本底(di)較高(gao),說(shuo)明(ming)有非(fei)特異性(xing)反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封(feng)閉。
ELISA試劑(ji)盒(he)實(shi)驗中(zhong),進行(xing)各(ge)項(xiang)實驗條件(jian)的選擇是(shi)很重(zhong)要的,其中(zhong)包(bao)括(kuo):
(1)固相載(zai)體(ti)的選擇:許(xu)多(duo)物質(zhi)可作為(wei)固相載(zai)體(ti),如(ru)聚(ju)氯(lv)乙(yi)烯、聚(ju)苯(ben)乙(yi)烯、聚(ju)丙(bing)酰(xian)胺(an)和纖維(wei)素(su)等。其(qi)形(xing)式可(ke)以是(shi)凹(ao)孔平板、試管、珠粒等。目前常(chang)用的是40孔聚(ju)苯(ben)乙(yi)烯凹(ao)孔板。不(bu)管何(he)種載(zai)體(ti),在(zai)使(shi)用前均(jun)可進行(xing)篩選(xuan):用等量抗(kang)原(yuan)包(bao)被(bei),在(zai)同(tong)壹(yi)實驗條件(jian)下進行(xing)反(fan)應,觀察其(qi)顯(xian)色(se)反應(ying)是否(fou)均壹性(xing),據此判(pan)明(ming)其吸附(fu)性(xing)能是否(fou)良好(hao)。
(2)包(bao)被(bei)抗(kang)體(ti)(或抗(kang)原(yuan))的選擇:將(jiang)抗(kang)體(ti)(或抗(kang)原(yuan))吸附(fu)在(zai)固相載(zai)體(ti)表(biao)面(mian)時,要求(qiu)純(chun)度(du)要好(hao),吸(xi)附(fu)時壹般要(yao)求(qiu)PH在(zai)9.0~9.6之(zhi)間(jian)。吸附(fu)溫(wen)度(du),時間(jian)及其(qi)蛋白(bai)量也(ye)有壹(yi)定影響,壹般多(duo)采用4℃18~24小時。蛋白(bai)質(zhi)包(bao)被(bei)的濃(nong)度(du)需進行(xing)滴定:Elisa試劑(ji)盒(he)即(ji)用不同(tong)的蛋白(bai)質(zhi)濃(nong)度(du)(0.1、1.0和10μg/ml等)進行(xing)包(bao)被(bei)後(hou),在(zai)其(qi)它(ta)試驗條件(jian)相同(tong)時,觀察(cha)陽(yang)性(xing)標本的OD值。選擇OD值(zhi)大(da)而蛋白(bai)量少(shao)的濃(nong)度(du)。對(dui)於(yu)多(duo)數蛋白(bai)質(zhi)來說(shuo)通常(chang)為(wei)1~10μg/ml。
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