大(da)鼠淋(lin)巴成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)

大鼠淋(lin)巴成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)需(xu)要(yao)準備(bei)好細(xi)胞所要(yao)用(yong)到的(de)培(pei)養(yang)基(ji)和相關(guan)試(shi)劑，雖然所有(you)的(de)貼(tie)壁，半(ban)貼(tie)壁或(huo)者(zhe)懸(xuan)浮(fu)細胞處理方式(shi)差不(bu)多(duo)，但(dan)是(shi)不(bu)同(tong)的(de)實驗室培(pei)養(yang)條(tiao)件和處理(li)力(li)度(du)還有試(shi)劑的(de)批間(jian)差這些問(wen)題(ti)存在(zai)，也(ye)會(hui)導(dao)致(zhi)對(dui)細胞(bao)處理不(bu)當，  或(huo)者(zhe)環(huan)境的(de)不(bu)適(shi)應而造(zao)成(cheng)細胞(bao)的(de)死亡。
大鼠淋(lin)巴成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)物(wu)的(de)生(sheng)理環(huan)境不(bu)同(tong)時定義為其物(wu)理(li)化(hua)學(xue)環境中，更(geng)好地理(li)解(jie)血清的(de)組(zu)件，所必(bi)需(xu)的(de)增殖的(de)生(sheng)長因(yin)子(zi)的(de)鑒(jian)定，並更(geng)好地理(li)解(jie)細胞(bao)在(zai)培(pei)養(yang)的(de)微環(huan)境（即，細胞 - 細胞(bao)相(xiang)互(hu)作用(yong)，氣體(ti)的(de)擴散，與基(ji)質相互(hu)作(zuo)用）現(xian)在(zai)允(yun)許(xu)在(zai)無(wu)血清培(pei)養(yang)基(ji)中某些細(xi)胞系的(de)培(pei)養(yang)。
培(pei)養(yang)物(wu)的(de)主要(yao)優(you)點(dian)是操(cao)縱(zong)物(wu)理(li)化(hua)學(xue)（即，溫(wen)度，pH，滲(shen)透(tou)壓，O2和CO2張力(li)）和生(sheng)理環(huan)境（即，激素(su)和營養(yang)物(wu)濃度），其中所述(shu)細胞(bao)繁(fan)殖的(de)能(neng)力。除(chu)溫(wen)度，將(jiang)培(pei)養(yang)環(huan)境是(shi)由(you)生(sheng)長培(pei)養(yang)基(ji)進(jin)行(xing)控(kong)制(zhi)。
對(dui)於培(pei)養(yang)，只要(yao)我們細心操(cao)作(zuo)，註(zhu)意(yi)細節(jie)，並不(bu)是(shi)大家(jia)說的(de)那(na)樣困難(nan)。對(dui)於有(you)經驗和有條(tiao)件的(de)客戶(hu)，建議由公司代(dai)為培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)及進(jin)行(xing)後續(xu)研(yan)究(jiu)。

細(xi)胞(bao)復蘇(su)技術(shu)：

1. 取出細胞，迅(xun)速放(fang)入(ru)37℃溫(wen)水中快(kuai)速解(jie)凍(dong)

2. 吸(xi)出細胞懸(xuan)液(ye),並(bing)加10倍以(yi)上(shang)培(pei)養(yang)液(ye)

3. 1000r/分鐘離心5分鐘，去(qu)除(chu)上清

4. 用(yong)培(pei)養(yang)液(ye)適(shi)當稀(xi)釋(shi)後(hou)接(jie)種(zhong)培(pei)養(yang)瓶(ping),放(fang)入(ru)37℃ CO2培(pei)養(yang)箱(xiang)靜置培(pei)養(yang)

5. 鏡(jing)檢(jian)細(xi)胞貼(tie)壁能(neng)力，次(ci)日更(geng)換壹(yi)次(ci)培(pei)養(yang)液(ye),繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)

培(pei)養(yang)方(fang)法(fa)：

收(shou)到細胞後，在(zai)倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察整個細胞(bao)生(sheng)長情(qing)況(kuang)：

如(ru)果細(xi)胞(bao)未(wei)長(chang)滿(man)，用(yong)75%酒(jiu)精(jing)噴(pen)灑整個瓶(ping)消(xiao)毒後放到超菌(jun)臺內，嚴格(ge)無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)，打開(kai)細胞(bao)培(pei)養(yang)瓶(ping)，留(liu)10ml培(pei)養(yang)液(ye)繼(ji)續(xu)培(pei)養(yang)。

如(ru)果細(xi)胞(bao)已長(chang)滿(man)（達(da)80-90%）。即可進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)，具體(ti)步驟(zhou)如下(xia)：

a，棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong)PBS洗(xi)1-2次(ci)。

b，向(xiang)瓶(ping)內加入(ru)1.0-2.0ml酶液(ye)，在(zai)倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分變(bian)圓(yuan)，迅(xun)速拿回操(cao)作(zuo)臺，吸(xi)取酶，加(jia)含有(you)6ml 含10%血清的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞。

c，加(jia)入(ru)等量的(de)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打混勻後吸(xi)出壹半，分到新的(de)培(pei)養(yang)

d，傳(chuan)代(dai)比(bi)例：1:2-1:3

保存和應用：

客(ke)戶(hu)可以(yi)根據(ju)自己(ji)的(de)需(xu)求(qiu)選擇(ze)新鮮或(huo)者(zhe)凍(dong)存的(de)原(yuan)代(dai)細胞(bao)，如(ru)是(shi)新鮮原(yuan)代(dai)細胞(bao)，客(ke)戶(hu)收到細胞後應立即將其放入(ru)CO2細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)箱(xiang)內靜置後(hou)2-3h，再(zai)進(jin)行(xing)後續(xu)的(de)實驗操(cao)作(zuo)。如是(shi)凍(dong)存細胞，客(ke)戶(hu)收到細胞後應立即將其放入(ru)液(ye)氮(dan)、-80℃冰箱或(huo)立即進(jin)行(xing)復蘇(su)。

細(xi)胞(bao)復蘇(su)的(de)原(yuan)則：

在(zai)實際操(cao)作(zuo)中，凍(dong)存細胞要(yao)進(jin)行(xing)復蘇(su)，再(zai)培(pei)養(yang)傳(chuan)代(dai)。復蘇(su)細(xi)胞(bao)壹般(ban)采用(yong)快(kuai)速融(rong)化(hua)法(fa)。以(yi)保證細胞外(wai)結(jie)晶快(kuai)速融(rong)化(hua)，以(yi)避免慢(man)速融(rong)化(hua)水分滲入(ru)細(xi)胞內，再(zai)次形(xing)成(cheng)胞內結晶(jing)損傷(shang)細胞(bao)。

1）該(gai)細(xi)胞只能(neng)用於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床(chuang)。

2）收(shou)到細胞後首先(xian)觀察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有上(shang)述現(xian)象(xiang)發(fa)生(sheng)請(qing)及時和我們聯系。

3）仔(zai)細(xi)閱讀(du)細胞說(shuo)明(ming)書，了解(jie)細(xi)胞相(xiang)關信息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形態、所用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血清比(bi)例、所需(xu)細(xi)胞(bao)因(yin)子等。

4）用(yong)75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯微鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞狀態。因運輸問(wen)題(ti)貼(tie)壁細(xi)胞(bao)會(hui)有少(shao)量從瓶(ping)壁(bi)脫落，將細(xi)胞(bao)置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)內靜置培(pei)養(yang)過夜(ye)，隔天再(zai)取出觀察。此(ci)時多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)均會(hui)貼(tie)壁，若(ruo)細(xi)胞仍(reng)不(bu)能(neng)貼(tie)壁請(qing)用臺盼(pan)藍染色測定細胞(bao)活力(li)，如(ru)果證實細胞活力(li)正常，請(qing)將細(xi)胞(bao)離心後用新鮮培(pei)養(yang)基(ji)再(zai)次貼(tie)壁培(pei)養(yang)；如(ru)果染色結果顯(xian)示細胞(bao)無(wu)活力，請(qing)拍(pai)下(xia)照片(pian)及時和我們聯系，信息(xi)確(que)認(ren)後(hou)我們為您再(zai)免費(fei)寄(ji)送壹(yi)次(ci)。

5）請(qing)客戶(hu)用相(xiang)同條(tiao)件的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)。培(pei)養(yang)瓶(ping)內多(duo)余的(de)培(pei)養(yang)基(ji)可收集(ji)備(bei)用，細(xi)胞傳(chuan)代(dai)時可以(yi)壹(yi)定比(bi)例和客戶(hu)自備(bei)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)混合，使細胞(bao)逐漸(jian)適(shi)應培(pei)養(yang)條(tiao)件;建議直(zhi)接(jie)購(gou)買(mai)我司提供(gong)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)。

6）建(jian)議客戶(hu)收到細胞後qian3天各(ge)拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞照片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀態，便(bian)於和我司技術(shu)部(bu)溝(gou)通交流。

細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1）復(fu)蘇(su)細胞(bao)：將(jiang)含(han)有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存管在(zai) 37℃水(shui)浴中迅(xun)速搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心3 min，棄去(qu)上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然後將(jiang)所有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第二(er)天換液並(bing)檢(jian)查細胞密(mi)度(du)。

2）細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如果細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所有(you)細胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而定），然後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速拿回操(cao)作(zuo)臺，輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消化(hua)。輕輕(qing)打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去(qu)上(shang)清液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例分到新的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。

3）細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待細胞(bao)生(sheng)長狀態良(liang)好時(shi)，可進(jin)行(xing)細胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例；

a、收(shou)集(ji)細胞(bao)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離心管中，1000 rpm條件下(xia)離心4 min，棄去(qu)上(shang)清液，用(yong)PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細胞(bao)計(ji)數。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量加入(ru)無(wu)血清細胞凍(dong)存液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍(dong)存管凍(dong)存1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管做好(hao)標(biao)識(shi)。

c、將(jiang)凍(dong)存管放入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲存。記錄(lu)凍(dong)存管位(wei)置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿取。

深(shen)圳瑞(rui)清生(sheng)物(wu)信息(xi)科(ke)技(ji)有(you)限公司經過數年(nian)的(de)努(nu)力發(fa)展(zhan)已(yi)迅(xun)速成(cheng)為集(ji)產(chan)品研(yan)發(fa)、經(jing)營為壹體(ti)的(de)專(zhuan)業(ye)化(hua)生(sheng)物(wu)工(gong)程公司。公司具有完(wan)善(shan)的(de)實驗技術(shu)開(kai)發(fa)平(ping)臺，成(cheng)熟的(de)抗原(yuan)、抗體(ti)研(yan)發(fa)系(xi)統(tong)，熟(shu)練掌握(wo)各(ge)種(zhong)酶聯(lian)技術(shu)，結合(he)公司的(de)研發(fa)團(tuan)隊(dui)，可以(yi)有(you)效(xiao)的(de)保證公司產(chan)品強的(de)穩(wen)定性和高的(de)準確(que)性，同(tong)時(shi)又(you)具有競(jing)爭(zheng)力的(de)價格(ge)。 公司主營ELISA試(shi)劑盒，目(mu)前可以(yi)提供(gong)生(sheng)化(hua)試(shi)劑、分子生(sheng)物(wu)學(xue)試(shi)劑及試(shi)劑盒，各(ge)種(zhong)抗(kang)體(ti)及免疫(yi)學(xue)試(shi)劑盒、實驗耗材(cai)等多(duo)門(men)類(lei)上(shang)萬種產(chan)品，產(chan)品涉(she)及分子生(sheng)物(wu)學(xue)、細胞生(sheng)物(wu)學(xue)、免疫(yi)學(xue)等生(sheng)命科(ke)學(xue)的(de)各(ge)個領(ling)域。