大鼠胰島細(xi)胞(bao)

大鼠胰島細(xi)胞(bao)需要準(zhun)備好細(xi)胞(bao)所(suo)要(yao)用到(dao)的(de)培養(yang)基和相關(guan)試(shi)劑，雖然所(suo)有(you)的(de)貼壁(bi)，半貼壁(bi)或(huo)者懸浮細胞處(chu)理(li)方(fang)式差(cha)不(bu)多(duo)，但是(shi)不(bu)同(tong)的(de)實(shi)驗(yan)室(shi)培養條(tiao)件和處(chu)理(li)力度(du)還有(you)試(shi)劑的(de)批間(jian)差(cha)這(zhe)些問題(ti)存(cun)在(zai)，也會導(dao)致(zhi)對細(xi)胞處(chu)理(li)不(bu)當，  或(huo)者環(huan)境(jing)的(de)不(bu)適(shi)應而(er)造成細胞的(de)死(si)亡(wang)。
大鼠胰島細(xi)胞(bao)培養物的生(sheng)理(li)環(huan)境(jing)不(bu)同(tong)時(shi)定義為其(qi)物理(li)化(hua)學(xue)環境(jing)中(zhong)，更(geng)好地(di)理(li)解血(xue)清(qing)的組件，所(suo)必需的增殖(zhi)的(de)生長因(yin)子的鑒(jian)定，並(bing)更(geng)好地(di)理(li)解細胞在(zai)培(pei)養(yang)的(de)微(wei)環境(jing)（即，細胞 - 細胞(bao)相互作用，氣(qi)體的擴散(san)，與基質相互作用）現在(zai)允(yun)許(xu)在(zai)無(wu)血(xue)清(qing)培養基中某些細胞系(xi)的培(pei)養。
培養物的主(zhu)要(yao)優(you)點是(shi)操(cao)縱物理(li)化(hua)學(xue)（即，溫度(du)，pH，滲(shen)透(tou)壓(ya)，O2和CO2張力）和生理(li)環(huan)境(jing)（即，激素和營養(yang)物濃(nong)度(du)），其(qi)中所(suo)述(shu)細(xi)胞繁(fan)殖(zhi)的(de)能(neng)力。除(chu)溫度(du)，將培(pei)養環境(jing)是(shi)由生長培養(yang)基進行控制(zhi)。
對於培養，只(zhi)要(yao)我們(men)細(xi)心操(cao)作，註(zhu)意(yi)細(xi)節，並(bing)不(bu)是(shi)大家(jia)說(shuo)的那(na)樣(yang)困難。對於有(you)經驗(yan)和有(you)條(tiao)件的(de)客(ke)戶，建議由公司代為(wei)培(pei)養(yang)細胞(bao)及進(jin)行後(hou)續研(yan)究。

細(xi)胞(bao)復(fu)蘇技術：

1. 取(qu)出細(xi)胞(bao)，迅速(su)放(fang)入37℃溫水中(zhong)快速解凍

2. 吸(xi)出細(xi)胞(bao)懸液,並(bing)加10倍(bei)以(yi)上培養液(ye)

3. 1000r/分(fen)鐘離心5分(fen)鐘，去除(chu)上(shang)清(qing)

4. 用培(pei)養(yang)液適(shi)當稀(xi)釋(shi)後(hou)接種(zhong)培養瓶(ping),放(fang)入37℃ CO2培(pei)養(yang)箱靜(jing)置培(pei)養(yang)

5. 鏡檢(jian)細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力，次(ci)日更(geng)換壹(yi)次(ci)培養液,繼(ji)續(xu)培養(yang)

培(pei)養(yang)方法(fa)：

收(shou)到(dao)細胞後(hou)，在(zai)倒置顯(xian)微(wei)鏡下觀察整個(ge)細胞生(sheng)長(chang)情況：

如(ru)果(guo)細胞未(wei)長滿(man)，用75%酒(jiu)精(jing)噴(pen)灑(sa)整(zheng)個(ge)瓶(ping)消(xiao)毒後(hou)放(fang)到超(chao)菌(jun)臺(tai)內，嚴格(ge)無(wu)菌操(cao)作，打(da)開細胞(bao)培養(yang)瓶(ping)，留(liu)10ml培(pei)養(yang)液繼續培養(yang)。

如(ru)果(guo)細胞已(yi)長滿(man)（達(da)80-90%）。即可進行傳(chuan)代，具(ju)體步驟如(ru)下：

a，棄(qi)去培(pei)養(yang)液，用PBS洗1-2次(ci)。

b，向(xiang)瓶(ping)內加入(ru)1.0-2.0ml酶(mei)液，在(zai)倒置顯(xian)微(wei)鏡下觀察細胞消(xiao)化(hua)情況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分(fen)變(bian)圓(yuan)，迅速拿回(hui)操(cao)作臺(tai)，吸(xi)取酶(mei)，加含(han)有(you)6ml 含(han)10%血(xue)清(qing)的培養液，輕輕吹打(da)細(xi)胞。

c，加入(ru)等(deng)量的的培(pei)養液，輕輕吹打(da)混(hun)勻(yun)後(hou)吸(xi)出壹(yi)半(ban)，分(fen)到新的(de)培(pei)養

d，傳(chuan)代比(bi)例(li)：1:2-1:3

保(bao)存(cun)和應用：

客(ke)戶可以(yi)根據(ju)自(zi)己的需(xu)求(qiu)選擇新(xin)鮮(xian)或(huo)者凍(dong)存(cun)的(de)原(yuan)代(dai)細胞，如是(shi)新鮮(xian)原代(dai)細胞(bao)，客(ke)戶收到細胞(bao)後(hou)應立即將其(qi)放(fang)入CO2細(xi)胞(bao)培養箱(xiang)內靜(jing)置後(hou)2-3h，再進(jin)行後(hou)續的(de)實驗(yan)操(cao)作。如(ru)是(shi)凍存(cun)細(xi)胞(bao)，客(ke)戶收到細胞(bao)後(hou)應立即將其(qi)放(fang)入液(ye)氮(dan)、-80℃冰箱或(huo)立即進行復(fu)蘇。

細(xi)胞(bao)復(fu)蘇的(de)原則：

在(zai)實(shi)際(ji)操(cao)作中(zhong)，凍存(cun)細(xi)胞(bao)要(yao)進行復(fu)蘇，再(zai)培養(yang)傳(chuan)代。復(fu)蘇細(xi)胞壹(yi)般采用快速融(rong)化(hua)法(fa)。以(yi)保(bao)證細(xi)胞外結晶(jing)快速融(rong)化(hua)，以(yi)避免慢速(su)融(rong)化(hua)水分(fen)滲入細(xi)胞(bao)內，再次(ci)形(xing)成胞內結晶(jing)損(sun)傷(shang)細(xi)胞(bao)。

1）該(gai)細胞(bao)只(zhi)能(neng)用於科研(yan)，不(bu)得用於臨床。

2）收(shou)到(dao)細胞後(hou)首(shou)先(xian)觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好(hao)，培(pei)養液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang)發(fa)生(sheng)請(qing)及時(shi)和我們(men)聯系(xi)。

3）仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說明(ming)書(shu)，了(le)解細胞相關(guan)信(xin)息，如細(xi)胞(bao)形(xing)態、所(suo)用培(pei)養(yang)基、血(xue)清(qing)比例(li)、所(suo)需(xu)細胞(bao)因(yin)子等。

4）用75%酒(jiu)精(jing)擦拭細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡下觀察細胞狀態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)貼壁(bi)細胞(bao)會有(you)少(shao)量從瓶(ping)壁(bi)脫落，將細(xi)胞置於培養箱(xiang)內靜(jing)置培(pei)養(yang)過夜，隔(ge)天(tian)再取(qu)出觀(guan)察(cha)。此(ci)時(shi)多(duo)數細胞均(jun)會貼(tie)壁(bi)，若細(xi)胞仍(reng)不(bu)能(neng)貼(tie)壁請(qing)用臺(tai)盼藍(lan)染色測(ce)定細(xi)胞(bao)活力，如(ru)果證實(shi)細胞(bao)活力正(zheng)常，請(qing)將細(xi)胞離心後(hou)用新(xin)鮮(xian)培養(yang)基再次(ci)貼壁培養(yang)；如(ru)果染色結果(guo)顯(xian)示(shi)細胞無(wu)活力，請(qing)拍(pai)下照(zhao)片及(ji)時和我們(men)聯系(xi)，信息確認(ren)後(hou)我們(men)為(wei)您再(zai)免費(fei)寄送(song)壹(yi)次(ci)。

5）請(qing)客(ke)戶用相同(tong)條(tiao)件的(de)培(pei)養(yang)基用於細胞培(pei)養(yang)。培養(yang)瓶(ping)內多余的培(pei)養(yang)基可收集(ji)備用，細(xi)胞(bao)傳(chuan)代時(shi)可以(yi)壹定比(bi)例(li)和客(ke)戶自(zi)備的培(pei)養(yang)基混合，使細(xi)胞逐(zhu)漸(jian)適(shi)應培養(yang)條(tiao)件;建(jian)議(yi)直(zhi)接(jie)購(gou)買我(wo)司(si)提(ti)供(gong)的(de)培(pei)養(yang)基。

6）建(jian)議(yi)客(ke)戶收到細胞(bao)後(hou)qian3天(tian)各拍(pai)幾張細胞照(zhao)片，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀態，便(bian)於和我司(si)技術部溝(gou)通交流。

細(xi)胞(bao)培養操(cao)作

1）復(fu)蘇細(xi)胞：將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸液的凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍，加4 mL培(pei)養(yang)基混合均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離心3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹勻(yun)。然後(hou)將所(suo)有(you)細(xi)胞懸液加入(ru)含(han)適(shi)量培養基的培養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過夜（或(huo)將細(xi)胞懸液加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培養基，培養過夜(ye)）。第二(er)天(tian)換液(ye)並(bing)檢(jian)查細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2）細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達(da)80%-90%，即可進行傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上清(qing)，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子的PBS潤洗細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞，將培(pei)養瓶(ping)置於37℃培養箱(xiang)中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況而(er)定），然後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下觀察細胞消(xiao)化(hua)情況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分(fen)變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落，迅(xun)速(su)拿回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕敲幾下培養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基終止消化(hua)。輕輕打勻(yun)後(hou)裝入(ru)無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸液按1:2比(bi)例(li)分(fen)到新的(de)含(han)8 mL培養基的新皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置於培養箱(xiang)中(zhong)培養(yang)。

3）細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀態良好(hao)時，可進行細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；

a、收(shou)集(ji)細(xi)胞，裝入無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離心4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞計(ji)數。

b、根據(ju)細胞數量加入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細胞凍存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支凍存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做好(hao)標識(shi)。

c、將凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置以(yi)便下次(ci)拿取(qu)。

深(shen)圳(zhen)瑞清(qing)生物信息科技有(you)限公司經過(guo)數年的努(nu)力發(fa)展(zhan)已(yi)迅(xun)速(su)成為集(ji)產品(pin)研(yan)發(fa)、經營為(wei)壹(yi)體的專(zhuan)業化(hua)生物工程(cheng)公(gong)司。公司(si)具(ju)有(you)完(wan)善的(de)實驗(yan)技術開發(fa)平(ping)臺(tai)，成熟(shu)的(de)抗(kang)原(yuan)、抗(kang)體研(yan)發(fa)系(xi)統，熟(shu)練掌握各種(zhong)酶聯技術，結合(he)公(gong)司(si)的研(yan)發(fa)團(tuan)隊(dui)，可以(yi)有(you)效(xiao)的保(bao)證公(gong)司產品(pin)強(qiang)的穩(wen)定性和高的(de)準(zhun)確性，同時(shi)又具(ju)有(you)競(jing)爭(zheng)力的(de)價(jia)格。 公司主(zhu)營ELISA試(shi)劑盒，目(mu)前(qian)可以(yi)提(ti)供(gong)生(sheng)化(hua)試(shi)劑、分(fen)子生物學(xue)試(shi)劑及(ji)試(shi)劑盒，各種(zhong)抗體及免疫(yi)學(xue)試(shi)劑盒、實(shi)驗(yan)耗(hao)材等多門(men)類(lei)上萬種(zhong)產品(pin)，產品(pin)涉及分(fen)子生物學(xue)、細胞(bao)生物學(xue)、免疫(yi)學(xue)等生(sheng)命科(ke)學(xue)的各個(ge)領域(yu)。