大鼠氣管(guan)上(shang)皮(pi)細胞(bao)

大鼠氣管(guan)上(shang)皮(pi)細胞(bao)需要(yao)準備(bei)好細(xi)胞所要用(yong)到(dao)的培(pei)養基(ji)和相關(guan)試(shi)劑(ji)，雖(sui)然(ran)所有的貼(tie)壁(bi)，半貼(tie)壁(bi)或者(zhe)懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)處理方(fang)式(shi)差(cha)不(bu)多(duo)，但是(shi)不(bu)同的實驗室(shi)培(pei)養條(tiao)件(jian)和處理力(li)度還(hai)有試(shi)劑(ji)的批(pi)間(jian)差這些(xie)問題(ti)存在(zai)，也會(hui)導(dao)致對(dui)細(xi)胞(bao)處理不(bu)當(dang)，  或者(zhe)環(huan)境的不適應而(er)造(zao)成細(xi)胞的死(si)亡(wang)。
大鼠氣管(guan)上(shang)皮(pi)細胞(bao)培(pei)養物(wu)的生理環(huan)境不(bu)同時定(ding)義(yi)為其(qi)物(wu)理化(hua)學環(huan)境中，更(geng)好(hao)地(di)理解(jie)血(xue)清(qing)的組(zu)件(jian)，所必(bi)需的增(zeng)殖的生長因(yin)子的鑒定，並(bing)更(geng)好(hao)地(di)理解(jie)細(xi)胞在(zai)培(pei)養的微環(huan)境（即，細(xi)胞 - 細(xi)胞(bao)相互作用(yong)，氣體(ti)的擴(kuo)散，與(yu)基質(zhi)相(xiang)互(hu)作用(yong)）現在(zai)允許在(zai)無血(xue)清(qing)培(pei)養基(ji)中某些(xie)細胞(bao)系(xi)的培(pei)養。
培(pei)養物(wu)的主(zhu)要優點(dian)是(shi)操(cao)縱(zong)物(wu)理化(hua)學（即，溫(wen)度，pH，滲透(tou)壓，O2和CO2張力(li)）和生理環(huan)境（即，激(ji)素(su)和營養物(wu)濃度），其中所述細(xi)胞(bao)繁殖的能(neng)力(li)。除(chu)溫(wen)度，將培(pei)養環(huan)境是(shi)由(you)生(sheng)長培(pei)養基(ji)進行控制。
對(dui)於(yu)培(pei)養，只(zhi)要我們(men)細心操(cao)作，註(zhu)意細(xi)節(jie)，並(bing)不(bu)是(shi)大(da)家說(shuo)的那樣困難(nan)。對(dui)於(yu)有經驗(yan)和有條(tiao)件(jian)的客(ke)戶，建(jian)議由(you)公(gong)司代為培(pei)養細(xi)胞及進行後(hou)續(xu)研(yan)究。

細(xi)胞復蘇(su)技(ji)術：

1. 取(qu)出細胞(bao)，迅速放入37℃溫水中快速解凍

2. 吸(xi)出細胞(bao)懸(xuan)液(ye),並(bing)加(jia)10倍以(yi)上(shang)培(pei)養液(ye)

3. 1000r/分鐘離(li)心5分鐘，去除(chu)上(shang)清(qing)

4. 用(yong)培(pei)養液(ye)適當稀(xi)釋後(hou)接(jie)種培(pei)養瓶(ping),放入37℃ CO2培(pei)養箱靜置培(pei)養

5. 鏡(jing)檢細胞(bao)貼(tie)壁(bi)能(neng)力(li)，次日(ri)更(geng)換(huan)壹(yi)次(ci)培(pei)養液(ye),繼續(xu)培(pei)養

培(pei)養方(fang)法：

收(shou)到(dao)細胞後(hou)，在(zai)倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀察整(zheng)個細胞生長情況：

如(ru)果(guo)細胞未(wei)長滿(man)，用75%酒(jiu)精噴灑(sa)整(zheng)個瓶消毒後放(fang)到(dao)超菌臺(tai)內(nei)，嚴格(ge)無菌操(cao)作，打(da)開細(xi)胞培(pei)養瓶(ping)，留10ml培(pei)養液(ye)繼續(xu)培(pei)養。

如(ru)果(guo)細胞已長滿(man)（達(da)80-90%）。即可(ke)進行傳(chuan)代，具(ju)體(ti)步驟(zhou)如下：

a，棄(qi)去培(pei)養液(ye)，用PBS洗1-2次。

b，向(xiang)瓶內(nei)加(jia)入1.0-2.0ml酶液，在(zai)倒置(zhi)顯微鏡下(xia)觀察細胞消(xiao)化情況，若(ruo)細胞(bao)大部分變圓，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作臺(tai)，吸(xi)取(qu)酶，加(jia)含有6ml 含10%血(xue)清(qing)的培(pei)養液(ye)，輕輕吹打細(xi)胞。

c，加(jia)入等(deng)量(liang)的的培(pei)養液(ye)，輕輕吹打混(hun)勻後(hou)吸(xi)出壹(yi)半(ban)，分到(dao)新的培(pei)養

d，傳(chuan)代比(bi)例：1:2-1:3

保存和應用(yong)：

客(ke)戶可(ke)以(yi)根(gen)據自(zi)己(ji)的需求選(xuan)擇新鮮或者(zhe)凍(dong)存的原代細胞，如(ru)是(shi)新(xin)鮮原代細胞，客(ke)戶收(shou)到(dao)細胞後(hou)應立(li)即將(jiang)其放(fang)入CO2細(xi)胞培(pei)養箱內(nei)靜置後(hou)2-3h，再進行後(hou)續(xu)的實驗操(cao)作。如(ru)是(shi)凍(dong)存細(xi)胞(bao)，客(ke)戶收(shou)到(dao)細胞後(hou)應立(li)即將(jiang)其放(fang)入液氮(dan)、-80℃冰(bing)箱或立(li)即進(jin)行復(fu)蘇(su)。

細(xi)胞復蘇(su)的原則：

在(zai)實際(ji)操(cao)作中，凍存細(xi)胞(bao)要進(jin)行復(fu)蘇(su)，再培(pei)養傳(chuan)代。復蘇細(xi)胞壹(yi)般(ban)采用(yong)快(kuai)速融化法。以(yi)保證細(xi)胞(bao)外結(jie)晶(jing)快(kuai)速融化，以(yi)避(bi)免慢速融化水分滲入細胞內(nei)，再次形成胞(bao)內(nei)結(jie)晶(jing)損(sun)傷(shang)細胞。

1）該(gai)細胞只能(neng)用(yong)於(yu)科(ke)研(yan)，不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)。

2）收(shou)到(dao)細胞後(hou)首(shou)先(xian)觀察細胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完好，培(pei)養液(ye)是(shi)否(fou)有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象，若(ruo)有上(shang)述(shu)現(xian)象發生(sheng)請及(ji)時和我們(men)聯(lian)系(xi)。

3）仔細閱讀細胞(bao)說(shuo)明書，了解細(xi)胞相(xiang)關(guan)信息(xi)，如細胞(bao)形(xing)態(tai)、所用培(pei)養基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例、所需細(xi)胞(bao)因(yin)子等(deng)。

4）用(yong)75%酒(jiu)精擦拭細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡下(xia)觀察細胞狀(zhuang)態。因(yin)運輸問題貼(tie)壁(bi)細胞會(hui)有少(shao)量(liang)從(cong)瓶壁(bi)脫落，將細胞置(zhi)於(yu)培(pei)養箱內(nei)靜置培(pei)養過(guo)夜(ye)，隔天(tian)再取出觀察。此時多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)均會(hui)貼(tie)壁(bi)，若(ruo)細胞(bao)仍不(bu)能(neng)貼(tie)壁(bi)請用臺(tai)盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)測定(ding)細胞活力(li)，如果(guo)證實細胞活力(li)正常(chang)，請(qing)將(jiang)細胞離(li)心後用(yong)新(xin)鮮培(pei)養基(ji)再次貼(tie)壁(bi)培(pei)養；如(ru)果(guo)染色(se)結(jie)果(guo)顯示細(xi)胞(bao)無活(huo)力(li)，請拍(pai)下(xia)照(zhao)片(pian)及時和我們(men)聯(lian)系(xi)，信(xin)息(xi)確認(ren)後(hou)我們(men)為您(nin)再免費(fei)寄送壹(yi)次(ci)。

5）請(qing)客(ke)戶用(yong)相同條(tiao)件(jian)的培(pei)養基(ji)用於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。培(pei)養瓶(ping)內(nei)多余的培(pei)養基(ji)可收集備(bei)用，細(xi)胞傳(chuan)代時可(ke)以(yi)壹(yi)定(ding)比(bi)例和客(ke)戶自(zi)備(bei)的培(pei)養基(ji)混(hun)合，使(shi)細胞(bao)逐漸適(shi)應培(pei)養條(tiao)件(jian);建(jian)議直(zhi)接(jie)購(gou)買我司提供(gong)的培(pei)養基(ji)。

6）建(jian)議客(ke)戶收(shou)到(dao)細胞後(hou)qian3天(tian)各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和我司技(ji)術部溝(gou)通(tong)交流。

細(xi)胞培(pei)養操(cao)作

1）復(fu)蘇細胞(bao)：將(jiang)含有1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍存管(guan)在(zai) 37℃水浴(yu)中迅速搖(yao)晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基(ji)後吹勻。然(ran)後將所有細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入含適量(liang)培(pei)養基(ji)的培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過(guo)夜(ye)（或將細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿中，加(jia)入約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第二天(tian)換(huan)液並(bing)檢(jian)查細胞密度。

2）細(xi)胞傳(chuan)代：如果(guo)細胞密度達(da)80%-90%，即可(ke)進行傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄(qi)去培(pei)養上(shang)清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液(ye)培(pei)養瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液浸潤所有細胞(bao)，將培(pei)養瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養箱中消化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況而(er)定(ding)），然(ran)後在(zai)顯微鏡下(xia)觀察細胞消(xiao)化情況，若(ruo)細胞(bao)大部分變圓並(bing)脫落，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養基(ji)終止消化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入無菌離(li)心管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹勻。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例分到(dao)新的含8 mL培(pei)養基(ji)的新皿中或者(zhe)瓶(ping)中，置於(yu)培(pei)養箱中培(pei)養。

3）細(xi)胞凍存：待(dai)細胞(bao)生長狀(zhuang)態良(liang)好時，可(ke)進(jin)行細(xi)胞(bao)凍存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例；

a、收(shou)集細胞(bao)，裝(zhuang)入無菌離(li)心管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入無血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍存液(ye)，使(shi)細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存管(guan)做(zuo)好標(biao)識(shi)。

c、將(jiang)凍存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮(dan)灌儲(chu)存。記錄(lu)凍(dong)存管(guan)位(wei)置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

深(shen)圳瑞清(qing)生物(wu)信息(xi)科(ke)技(ji)有限公(gong)司經(jing)過(guo)數(shu)年的努力(li)發展(zhan)已迅速成為集產品研(yan)發(fa)、經(jing)營(ying)為(wei)壹(yi)體(ti)的專業(ye)化(hua)生(sheng)物(wu)工程(cheng)公司(si)。公司具(ju)有完善的實驗技(ji)術開(kai)發平(ping)臺(tai)，成(cheng)熟(shu)的抗原、抗體(ti)研(yan)發(fa)系(xi)統(tong)，熟(shu)練(lian)掌(zhang)握(wo)各(ge)種酶聯(lian)技(ji)術，結(jie)合(he)公(gong)司(si)的研(yan)發(fa)團隊，可(ke)以(yi)有效的保證公(gong)司(si)產品強(qiang)的穩定性和高的準確性，同時又(you)具(ju)有競(jing)爭(zheng)力(li)的價(jia)格(ge)。 公司主(zhu)營ELISA試(shi)劑(ji)盒，目前(qian)可(ke)以(yi)提供(gong)生化(hua)試(shi)劑(ji)、分子生(sheng)物(wu)學試(shi)劑(ji)及(ji)試(shi)劑(ji)盒，各(ge)種抗體(ti)及免疫(yi)學試(shi)劑(ji)盒、實驗耗材(cai)等(deng)多門(men)類(lei)上(shang)萬(wan)種產品，產(chan)品涉(she)及(ji)分子生(sheng)物(wu)學、細胞生物(wu)學、免疫(yi)學等(deng)生命(ming)科(ke)學的各(ge)個領域。