大鼠(shu)Ⅱ型肺泡(pao)上皮(pi)細胞(bao)

大鼠(shu)Ⅱ型肺泡(pao)上皮(pi)細胞(bao)需(xu)要(yao)準備好細(xi)胞所(suo)要(yao)用到的培(pei)養(yang)基和(he)相關(guan)試(shi)劑(ji)，雖(sui)然所(suo)有(you)的(de)貼壁，半(ban)貼(tie)壁(bi)或(huo)者懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)處理(li)方(fang)式差(cha)不(bu)多，但是(shi)不(bu)同的(de)實(shi)驗室培(pei)養(yang)條件(jian)和處理(li)力(li)度(du)還有(you)試(shi)劑(ji)的(de)批(pi)間差(cha)這些(xie)問(wen)題存(cun)在，也(ye)會(hui)導致對細胞處理(li)不(bu)當，  或者(zhe)環(huan)境的(de)不(bu)適應而造(zao)成(cheng)細胞(bao)的(de)死(si)亡(wang)。
大鼠(shu)Ⅱ型肺泡(pao)上皮(pi)細胞(bao)培(pei)養(yang)物的(de)生(sheng)理(li)環(huan)境(jing)不(bu)同時(shi)定義(yi)為(wei)其物理(li)化(hua)學環(huan)境(jing)中(zhong)，更好(hao)地理(li)解(jie)血(xue)清的(de)組(zu)件(jian)，所(suo)必(bi)需的增(zeng)殖的生長因子的鑒(jian)定，並(bing)更好(hao)地理(li)解(jie)細(xi)胞(bao)在培養(yang)的微環(huan)境（即，細胞(bao) - 細(xi)胞相互作用，氣體(ti)的(de)擴散(san)，與基(ji)質(zhi)相互作用）現在允許在無血清培(pei)養(yang)基中(zhong)某(mou)些(xie)細胞(bao)系(xi)的培(pei)養(yang)。
培(pei)養(yang)物的(de)主(zhu)要(yao)優(you)點是(shi)操(cao)縱(zong)物(wu)理(li)化(hua)學（即，溫度(du)，pH，滲透壓(ya)，O2和(he)CO2張(zhang)力(li)）和生(sheng)理(li)環(huan)境(jing)（即，激(ji)素(su)和(he)營(ying)養(yang)物濃(nong)度(du)），其中(zhong)所(suo)述(shu)細胞繁(fan)殖的能力(li)。除溫(wen)度(du)，將培養(yang)環境(jing)是(shi)由(you)生(sheng)長(chang)培(pei)養(yang)基進行(xing)控(kong)制(zhi)。
對(dui)於培(pei)養(yang)，只要(yao)我們細(xi)心操作，註意細節(jie)，並(bing)不(bu)是(shi)大家(jia)說的(de)那(na)樣困(kun)難。對(dui)於(yu)有(you)經(jing)驗和有(you)條件(jian)的客戶，建(jian)議(yi)由公(gong)司代(dai)為(wei)培(pei)養(yang)細胞(bao)及進行(xing)後續(xu)研究(jiu)。

細(xi)胞復蘇技術(shu)：

1. 取(qu)出(chu)細(xi)胞，迅速放(fang)入37℃溫(wen)水(shui)中(zhong)快速解(jie)凍

2. 吸(xi)出(chu)細(xi)胞懸(xuan)液,並(bing)加(jia)10倍以(yi)上培養(yang)液

3. 1000r/分鐘離(li)心5分鐘，去(qu)除(chu)上清

4. 用培養(yang)液適當稀釋後(hou)接種(zhong)培(pei)養(yang)瓶,放(fang)入37℃ CO2培(pei)養(yang)箱(xiang)靜(jing)置培(pei)養(yang)

5. 鏡(jing)檢細胞(bao)貼(tie)壁能力(li)，次日(ri)更換(huan)壹(yi)次(ci)培(pei)養(yang)液,繼續(xu)培養(yang)

培(pei)養(yang)方法：

收到(dao)細胞後(hou)，在倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察整個細(xi)胞生(sheng)長(chang)情(qing)況：

如(ru)果(guo)細胞(bao)未(wei)長(chang)滿，用75%酒精(jing)噴灑整個瓶(ping)消毒(du)後(hou)放(fang)到(dao)超菌臺內，嚴(yan)格(ge)無菌操作，打(da)開(kai)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)瓶，留10ml培(pei)養(yang)液繼續(xu)培養(yang)。

如(ru)果(guo)細胞(bao)已(yi)長(chang)滿（達(da)80-90%）。即可進行(xing)傳代(dai)，具體(ti)步(bu)驟如(ru)下：

a，棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)液，用PBS洗1-2次。

b，向(xiang)瓶內加(jia)入1.0-2.0ml酶(mei)液，在倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況，若細胞(bao)大部(bu)分變圓，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作臺，吸取(qu)酶(mei)，加(jia)含有(you)6ml 含10%血清的(de)培養(yang)液，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)。

c，加(jia)入等(deng)量(liang)的(de)的(de)培養(yang)液，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)混(hun)勻(yun)後(hou)吸(xi)出(chu)壹(yi)半(ban)，分到新(xin)的培(pei)養(yang)

d，傳代(dai)比(bi)例(li)：1:2-1:3

保(bao)存(cun)和(he)應用：

客戶可(ke)以(yi)根(gen)據(ju)自己(ji)的需求選擇新(xin)鮮(xian)或者(zhe)凍存(cun)的(de)原(yuan)代細(xi)胞，如(ru)是(shi)新(xin)鮮(xian)原(yuan)代細(xi)胞，客戶收到(dao)細胞後(hou)應(ying)立(li)即將其放入CO2細(xi)胞培養(yang)箱(xiang)內靜(jing)置後(hou)2-3h，再進行(xing)後續(xu)的實(shi)驗操(cao)作。如(ru)是(shi)凍存(cun)細(xi)胞，客戶收到(dao)細胞後(hou)應(ying)立(li)即將其放入液氮(dan)、-80℃冰箱(xiang)或(huo)立即進行(xing)復蘇(su)。

細(xi)胞復蘇的原(yuan)則：

在實(shi)際操(cao)作中(zhong)，凍存(cun)細(xi)胞要(yao)進行(xing)復蘇(su)，再培(pei)養(yang)傳代(dai)。復蘇(su)細胞(bao)壹(yi)般(ban)采(cai)用快速融(rong)化(hua)法。以(yi)保(bao)證細(xi)胞(bao)外結晶快速融(rong)化(hua)，以(yi)避(bi)免慢速融(rong)化(hua)水(shui)分滲入細(xi)胞(bao)內，再次(ci)形(xing)成胞(bao)內結(jie)晶損傷細(xi)胞(bao)。

1）該細(xi)胞(bao)只能用於科研，不(bu)得(de)用於臨床(chuang)。

2）收到(dao)細胞後(hou)首(shou)先觀察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好，培(pei)養(yang)液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象，若有(you)上述現象發生(sheng)請(qing)及時(shi)和我們聯(lian)系(xi)。

3）仔(zai)細閱讀細胞(bao)說(shuo)明書，了解細(xi)胞(bao)相關(guan)信息(xi)，如(ru)細胞(bao)形(xing)態、所(suo)用培養(yang)基、血(xue)清比(bi)例(li)、所(suo)需(xu)細胞因子等(deng)。

4）用75%酒精(jing)擦拭(shi)細胞(bao)瓶表(biao)面，顯微鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞狀(zhuang)態。因運輸問題(ti)貼(tie)壁細胞(bao)會有(you)少量(liang)從瓶壁(bi)脫(tuo)落(luo)，將細(xi)胞置於培養(yang)箱(xiang)內靜(jing)置培(pei)養(yang)過夜(ye)，隔(ge)天再取(qu)出(chu)觀察。此(ci)時(shi)多數(shu)細(xi)胞均會(hui)貼壁，若細胞(bao)仍(reng)不(bu)能貼(tie)壁(bi)請用臺盼藍(lan)染色測(ce)定細(xi)胞活(huo)力(li)，如(ru)果(guo)證實(shi)細胞(bao)活力(li)正(zheng)常，請將細胞離(li)心後用新鮮(xian)培養(yang)基再次(ci)貼(tie)壁(bi)培養(yang)；如(ru)果(guo)染色結(jie)果(guo)顯示(shi)細胞無活力(li)，請拍下照(zhao)片及時(shi)和我們聯(lian)系(xi)，信息確認(ren)後(hou)我們為(wei)您(nin)再免(mian)費(fei)寄送壹(yi)次(ci)。

5）請(qing)客戶用相同(tong)條件(jian)的培(pei)養(yang)基用於細胞(bao)培養(yang)。培養(yang)瓶內多余(yu)的(de)培養(yang)基可(ke)收集(ji)備用，細胞傳代(dai)時(shi)可以(yi)壹(yi)定比(bi)例(li)和(he)客戶自(zi)備的培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)，使(shi)細(xi)胞(bao)逐(zhu)漸適應培(pei)養(yang)條件(jian);建議(yi)直(zhi)接購買(mai)我司提供(gong)的培(pei)養(yang)基。

6）建(jian)議客戶收到(dao)細胞後(hou)qian3天各(ge)拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片，記錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於和(he)我司技術(shu)部(bu)溝(gou)通交流(liu)。

細(xi)胞培養(yang)操作

1）復(fu)蘇細胞：將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的(de)凍存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速搖(yao)晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培養(yang)基混(hun)合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上清液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基後(hou)吹(chui)勻。然後將所(suo)有(you)細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入含適量培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過夜(ye)（或(huo)將細胞懸(xuan)液加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入約(yue)8 mL培養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第(di)二天換(huan)液並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密度(du)。

2）細(xi)胞傳代(dai)：如(ru)果(guo)細胞(bao)密(mi)度(du)達80%-90%，即可進行(xing)傳代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上清，用不(bu)含鈣(gai)、鎂離(li)子的PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化液培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞，將培養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化1-2 min（視細胞情(qing)況而定），然後在顯微鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況，若細胞(bao)大部(bu)分變圓並脫(tuo)落(luo)，迅速拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基終止(zhi)消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝入無(wu)菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的含8 mL培養(yang)基的(de)新(xin)皿中(zhong)或者瓶中(zhong)，置於培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)。

3）細(xi)胞凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態良(liang)好時(shi)，可進行(xing)細胞(bao)凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為(wei)例(li)；

a、收集(ji)細胞，裝入無(wu)菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上清液，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行(xing)細胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數量(liang)加(jia)入無(wu)血(xue)清細(xi)胞凍存(cun)液，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註意凍存(cun)管(guan)做(zuo)好標(biao)識。

c、將(jiang)凍存(cun)管(guan)放入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄凍存(cun)管(guan)位置以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取(qu)。

深(shen)圳瑞清生(sheng)物信(xin)息科技有(you)限(xian)公司(si)經(jing)過數年(nian)的努(nu)力(li)發展(zhan)已(yi)迅(xun)速成(cheng)為(wei)集(ji)產(chan)品(pin)研(yan)發、經營(ying)為(wei)壹(yi)體(ti)的(de)專業(ye)化生(sheng)物(wu)工(gong)程公司(si)。公(gong)司具有(you)完(wan)善的實(shi)驗技術(shu)開(kai)發(fa)平(ping)臺，成熟的抗(kang)原(yuan)、抗(kang)體(ti)研(yan)發系(xi)統(tong)，熟(shu)練掌握(wo)各(ge)種酶(mei)聯(lian)技術(shu)，結(jie)合(he)公(gong)司的(de)研(yan)發(fa)團隊(dui)，可以(yi)有(you)效(xiao)的保證公司(si)產(chan)品(pin)強的穩定性(xing)和高(gao)的準確性(xing)，同(tong)時(shi)又(you)具(ju)有(you)競(jing)爭力(li)的價(jia)格(ge)。 公司(si)主(zhu)營(ying)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)，目前可(ke)以(yi)提供(gong)生化(hua)試(shi)劑(ji)、分子生物(wu)學試(shi)劑(ji)及試(shi)劑(ji)盒(he)，各(ge)種抗(kang)體(ti)及免疫(yi)學試(shi)劑(ji)盒(he)、實(shi)驗耗(hao)材(cai)等(deng)多門類(lei)上萬種產(chan)品(pin)，產(chan)品(pin)涉(she)及分子生物(wu)學、細(xi)胞(bao)生物(wu)學、免(mian)疫(yi)學等(deng)生(sheng)命(ming)科學的(de)各(ge)個領(ling)域(yu)。