大(da)鼠肺(fei)血(xue)管(guan)平滑肌細胞

大鼠肺(fei)血(xue)管(guan)平滑肌細胞需(xu)要(yao)準(zhun)備好細胞所(suo)要(yao)用(yong)到(dao)的培(pei)養基和相關試劑，雖然所有(you)的(de)貼(tie)壁(bi)，半貼壁(bi)或(huo)者懸(xuan)浮(fu)細胞處理方(fang)式差(cha)不(bu)多，但(dan)是(shi)不(bu)同(tong)的(de)實驗室培(pei)養條(tiao)件(jian)和處理力度(du)還有(you)試劑的(de)批間差(cha)這些(xie)問(wen)題存(cun)在(zai)，也(ye)會導(dao)致對(dui)細胞處理不當(dang)，  或(huo)者環(huan)境的不適(shi)應而(er)造(zao)成(cheng)細胞的(de)死亡。
大鼠肺(fei)血(xue)管(guan)平滑肌細胞培(pei)養物的(de)生(sheng)理環(huan)境不同時定義(yi)為其物理化(hua)學環(huan)境中，更(geng)好(hao)地(di)理解(jie)血(xue)清的(de)組(zu)件(jian)，所(suo)必(bi)需(xu)的(de)增(zeng)殖(zhi)的(de)生(sheng)長(chang)因子的鑒(jian)定，並(bing)更(geng)好(hao)地(di)理解(jie)細胞在(zai)培(pei)養的(de)微(wei)環(huan)境（即(ji)，細胞 - 細胞相互(hu)作用(yong)，氣(qi)體(ti)的擴(kuo)散(san)，與基質(zhi)相互(hu)作用(yong)）現在(zai)允(yun)許在(zai)無(wu)血(xue)清培(pei)養基中某(mou)些(xie)細胞系(xi)的培(pei)養。
培(pei)養物的(de)主(zhu)要(yao)優(you)點(dian)是操(cao)縱(zong)物理化(hua)學（即(ji)，溫(wen)度(du)，pH，滲(shen)透(tou)壓(ya)，O2和CO2張(zhang)力）和生(sheng)理環(huan)境（即(ji)，激(ji)素(su)和營(ying)養物濃(nong)度(du)），其(qi)中所(suo)述(shu)細胞繁(fan)殖(zhi)的(de)能力。除(chu)溫(wen)度(du)，將培(pei)養環(huan)境是由生(sheng)長(chang)培(pei)養基進(jin)行(xing)控制(zhi)。
對(dui)於培(pei)養，只(zhi)要(yao)我們細心(xin)操(cao)作(zuo)，註(zhu)意細節，並(bing)不(bu)是(shi)大(da)家(jia)說的(de)那(na)樣(yang)困難。對(dui)於有(you)經(jing)驗和有(you)條(tiao)件(jian)的(de)客戶，建(jian)議(yi)由公(gong)司(si)代(dai)為培(pei)養細胞及(ji)進(jin)行(xing)後(hou)續(xu)研究(jiu)。

細胞復蘇技術：

1. 取(qu)出(chu)細胞，迅速(su)放(fang)入37℃溫(wen)水(shui)中快(kuai)速(su)解(jie)凍

2. 吸出(chu)細胞懸(xuan)液(ye),並(bing)加(jia)10倍以(yi)上培(pei)養液(ye)

3. 1000r/分鐘離心(xin)5分鐘，去(qu)除(chu)上清(qing)

4. 用培(pei)養液(ye)適(shi)當(dang)稀釋(shi)後(hou)接(jie)種(zhong)培(pei)養瓶(ping),放(fang)入37℃ CO2培(pei)養箱靜(jing)置培(pei)養

5. 鏡檢細胞貼(tie)壁(bi)能力，次日(ri)更(geng)換(huan)壹(yi)次培(pei)養液(ye),繼續(xu)培(pei)養

培(pei)養方(fang)法：

收到細胞後(hou)，在(zai)倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察整(zheng)個(ge)細胞生(sheng)長(chang)情(qing)況(kuang)：

如果細胞未(wei)長(chang)滿(man)，用(yong)75%酒精噴(pen)灑(sa)整(zheng)個(ge)瓶消(xiao)毒(du)後(hou)放(fang)到超(chao)菌臺(tai)內，嚴(yan)格(ge)無(wu)菌操(cao)作(zuo)，打(da)開(kai)細胞培(pei)養瓶(ping)，留10ml培(pei)養液(ye)繼續(xu)培(pei)養。

如果細胞已(yi)長(chang)滿(man)（達80-90%）。即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳代(dai)，具(ju)體(ti)步(bu)驟如(ru)下(xia)：

a，棄(qi)去培(pei)養液(ye)，用(yong)PBS洗1-2次。

b，向瓶內加(jia)入1.0-2.0ml酶(mei)液，在(zai)倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細胞大(da)部(bu)分變圓，迅速(su)拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，吸取(qu)酶(mei)，加(jia)含有(you)6ml 含10%血(xue)清的(de)培(pei)養液(ye)，輕輕吹打細胞。

c，加(jia)入等(deng)量(liang)的(de)的(de)培(pei)養液(ye)，輕輕吹打混勻後(hou)吸出(chu)壹半，分到新(xin)的培(pei)養

d，傳代(dai)比例(li)：1:2-1:3

保存(cun)和應(ying)用：

客戶可(ke)以(yi)根(gen)據自己(ji)的(de)需(xu)求選(xuan)擇(ze)新鮮(xian)或(huo)者凍存(cun)的(de)原代(dai)細胞，如(ru)是(shi)新(xin)鮮(xian)原代(dai)細胞，客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後(hou)應(ying)立(li)即(ji)將其(qi)放(fang)入CO2細胞培(pei)養箱內靜(jing)置後(hou)2-3h，再(zai)進(jin)行(xing)後(hou)續(xu)的(de)實(shi)驗操(cao)作(zuo)。如(ru)是(shi)凍存(cun)細胞，客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後(hou)應(ying)立(li)即(ji)將其(qi)放(fang)入液(ye)氮(dan)、-80℃冰(bing)箱或(huo)立(li)即(ji)進(jin)行(xing)復蘇。

細胞復蘇的(de)原則(ze)：

在(zai)實(shi)際(ji)操(cao)作(zuo)中，凍存(cun)細胞要(yao)進(jin)行(xing)復蘇，再(zai)培(pei)養傳(chuan)代(dai)。復蘇細胞壹(yi)般(ban)采用快速(su)融化(hua)法。以(yi)保(bao)證(zheng)細胞外(wai)結(jie)晶快速(su)融化(hua)，以(yi)避(bi)免(mian)慢速(su)融化(hua)水分滲(shen)入(ru)細胞內，再(zai)次形(xing)成(cheng)胞(bao)內結(jie)晶損傷(shang)細胞。

1）該細胞只(zhi)能用(yong)於科研，不(bu)得(de)用於臨床(chuang)。

2）收到細胞後(hou)首(shou)先觀(guan)察細胞瓶(ping)是(shi)否完(wan)好(hao)，培(pei)養液(ye)是(shi)否有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現象，若(ruo)有(you)上述(shu)現象發(fa)生(sheng)請(qing)及時和我們聯系(xi)。

3）仔細閱讀(du)細胞說(shuo)明書(shu)，了(le)解(jie)細胞相關信(xin)息，如(ru)細胞形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養基、血(xue)清比(bi)例、所(suo)需(xu)細胞因(yin)子等(deng)。

4）用75%酒精擦(ca)拭(shi)細胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細胞狀(zhuang)態。因(yin)運輸問(wen)題貼(tie)壁(bi)細胞會(hui)有(you)少量(liang)從(cong)瓶(ping)壁(bi)脫(tuo)落，將細胞置於(yu)培(pei)養箱內靜(jing)置培(pei)養過夜(ye)，隔(ge)天(tian)再(zai)取(qu)出(chu)觀察。此時多數細胞均會(hui)貼(tie)壁(bi)，若(ruo)細胞仍(reng)不(bu)能貼(tie)壁(bi)請(qing)用臺盼藍染(ran)色測(ce)定(ding)細胞活(huo)力，如果證實(shi)細胞活(huo)力正常，請(qing)將細胞離心(xin)後(hou)用(yong)新鮮(xian)培(pei)養基再(zai)次貼(tie)壁(bi)培(pei)養；如(ru)果染(ran)色結(jie)果顯示(shi)細胞無(wu)活(huo)力，請拍(pai)下(xia)照片及(ji)時和我們聯系(xi)，信(xin)息確認(ren)後(hou)我們為您再(zai)免(mian)費寄送(song)壹次。

5）請客戶(hu)用(yong)相同條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養基用(yong)於(yu)細胞培(pei)養。培(pei)養瓶(ping)內多余(yu)的培(pei)養基可(ke)收(shou)集備用，細胞傳(chuan)代(dai)時可以(yi)壹(yi)定(ding)比例和客(ke)戶自備的培(pei)養基混(hun)合(he)，使(shi)細胞逐(zhu)漸適(shi)應培(pei)養條(tiao)件(jian);建(jian)議(yi)直接(jie)購(gou)買(mai)我司提(ti)供的(de)培(pei)養基。

6）建(jian)議(yi)客戶收(shou)到(dao)細胞後(hou)qian3天(tian)各拍(pai)幾(ji)張細胞照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細胞狀(zhuang)態，便(bian)於和我司技術部(bu)溝(gou)通交(jiao)流(liu)。

細胞培(pei)養操(cao)作(zuo)

1）復蘇細胞：將含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中迅速(su)搖(yao)晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養基混(hun)合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入含適(shi)量(liang)培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過夜(ye)（或(huo)將細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過夜(ye)）。第二天(tian)換(huan)液並(bing)檢(jian)查(zha)細胞密度(du)。

2）細胞傳(chuan)代(dai)：如果細胞密度(du)達80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去培(pei)養上清(qing)，用不含鈣(gai)、鎂離子的PBS潤(run)洗細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液培(pei)養瓶(ping)中，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸潤所有(you)細胞，將培(pei)養瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細胞大(da)部(bu)分變圓並(bing)脫(tuo)落，迅速(su)拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕輕打勻後(hou)裝(zhuang)入無(wu)菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將細胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的含8 mL培(pei)養基的(de)新(xin)皿(min)中或(huo)者瓶(ping)中，置於(yu)培(pei)養箱中培(pei)養。

3）細胞凍存(cun)：待(dai)細胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良好時，可進行(xing)細胞凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例；

a、收集細胞，裝(zhuang)入無(wu)菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去上清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計(ji)數。

b、根(gen)據細胞數量(liang)加(jia)入無(wu)血(xue)清細胞凍存(cun)液(ye)，使(shi)細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意凍存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。

c、將凍存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管(guan)位(wei)置以(yi)便(bian)下(xia)次拿取(qu)。

深圳瑞清(qing)生(sheng)物信(xin)息科技有(you)限(xian)公(gong)司(si)經過數年的努力發展已迅速(su)成為集產品(pin)研發(fa)、經(jing)營為壹體(ti)的專(zhuan)業(ye)化(hua)生(sheng)物工(gong)程公(gong)司(si)。公(gong)司(si)具(ju)有(you)完(wan)善(shan)的(de)實驗技術開(kai)發(fa)平臺，成熟(shu)的抗(kang)原、抗(kang)體(ti)研發(fa)系(xi)統(tong)，熟(shu)練(lian)掌握各種酶聯(lian)技術，結合公(gong)司(si)的研發(fa)團(tuan)隊，可(ke)以(yi)有(you)效(xiao)的(de)保證公(gong)司(si)產品(pin)強的穩定(ding)性和高(gao)的準(zhun)確性，同時又(you)具(ju)有(you)競(jing)爭力的價(jia)格。 公(gong)司(si)主(zhu)營(ying)ELISA試劑盒，目(mu)前可(ke)以(yi)提(ti)供生(sheng)化(hua)試劑、分子生(sheng)物學試劑及(ji)試劑盒，各種抗(kang)體(ti)及免(mian)疫(yi)學試劑盒、實驗耗(hao)材(cai)等(deng)多門(men)類(lei)上萬(wan)種產品(pin)，產品(pin)涉(she)及(ji)分子生(sheng)物學、細胞生(sheng)物學、免疫(yi)學等(deng)生(sheng)命科學的各個(ge)領域。