小(xiao)鼠肺大(da)靜(jing)脈內皮細胞

小鼠(shu)肺大(da)靜(jing)脈內皮細胞需要(yao)準(zhun)備(bei)好(hao)細胞所(suo)要用(yong)到(dao)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)和(he)相(xiang)關試(shi)劑(ji)，雖然所有的(de)貼壁(bi)，半(ban)貼壁(bi)或(huo)者懸浮細胞處理方(fang)式差不(bu)多，但(dan)是(shi)不(bu)同(tong)的(de)實驗室(shi)培養(yang)條(tiao)件和(he)處理力度(du)還有試(shi)劑(ji)的(de)批間差這(zhe)些(xie)問題存(cun)在，也會導(dao)致對(dui)細胞處理不(bu)當(dang)，  或者環境(jing)的(de)不(bu)適(shi)應(ying)而造成細胞的(de)死(si)亡。
小鼠(shu)肺大(da)靜(jing)脈內皮細胞培養(yang)物(wu)的(de)生(sheng)理環境(jing)不(bu)同(tong)時(shi)定義為其物(wu)理化(hua)學環境(jing)中，更(geng)好(hao)地(di)理解(jie)血(xue)清(qing)的(de)組(zu)件，所(suo)必需的(de)增(zeng)殖(zhi)的(de)生(sheng)長(chang)因子(zi)的(de)鑒(jian)定，並(bing)更(geng)好(hao)地(di)理解(jie)細胞在培(pei)養(yang)的(de)微(wei)環境(jing)（即，細胞 - 細胞相(xiang)互作用(yong)，氣(qi)體的(de)擴(kuo)散(san)，與基(ji)質(zhi)相(xiang)互作用(yong)）現(xian)在允許(xu)在無(wu)血清(qing)培養(yang)基(ji)中某(mou)些(xie)細胞系(xi)的(de)培(pei)養(yang)。
小鼠(shu)肺大(da)靜(jing)脈內皮細胞培養(yang)物(wu)的(de)主(zhu)要(yao)優(you)點(dian)是(shi)操縱物(wu)理化(hua)學（即，溫(wen)度(du)，pH，滲(shen)透(tou)壓(ya)，O2和(he)CO2張(zhang)力）和(he)生(sheng)理環境(jing)（即，激(ji)素和(he)營(ying)養(yang)物(wu)濃(nong)度(du)），其中所述細胞繁(fan)殖的(de)能(neng)力。除溫度(du)，將(jiang)培養(yang)環境(jing)是(shi)由生長培養(yang)基(ji)進行(xing)控制。
小鼠(shu)肺大(da)靜(jing)脈內皮細胞對(dui)於培養(yang)，只要(yao)我(wo)們(men)細心操(cao)作(zuo)，註意細節，並(bing)不(bu)是(shi)大家(jia)說的(de)那(na)樣(yang)困(kun)難。對(dui)於有經(jing)驗(yan)和(he)有條(tiao)件的(de)客(ke)戶，建議(yi)由公(gong)司代為培養(yang)細胞及(ji)進行(xing)後續(xu)研究。

細胞復蘇(su)技術：

1. 取(qu)出(chu)細胞，迅速(su)放(fang)入(ru)37℃溫水(shui)中快速解(jie)凍(dong)

2. 吸(xi)出(chu)細胞懸液(ye),並(bing)加(jia)10倍以上培養(yang)液(ye)

3. 1000r/分(fen)鐘離心(xin)5分(fen)鐘，去除上清(qing)

4. 用(yong)培(pei)養(yang)液(ye)適(shi)當(dang)稀(xi)釋(shi)後接(jie)種培養(yang)瓶,放(fang)入(ru)37℃ CO2培養(yang)箱靜(jing)置(zhi)培(pei)養(yang)

5. 鏡檢細胞貼壁(bi)能(neng)力，次日更(geng)換壹次培養(yang)液(ye),繼續(xu)培(pei)養(yang)

培(pei)養(yang)方(fang)法：

收(shou)到細胞後，在倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察整個(ge)細胞生(sheng)長情(qing)況(kuang)：

如(ru)果細胞未(wei)長滿(man)，用(yong)75%酒精(jing)噴灑(sa)整(zheng)個瓶消毒後放(fang)到(dao)超(chao)菌(jun)臺(tai)內，嚴格無(wu)菌(jun)操作(zuo)，打(da)開(kai)細胞培(pei)養(yang)瓶，留10ml培(pei)養(yang)液(ye)繼續(xu)培(pei)養(yang)。

如(ru)果細胞已(yi)長滿(man)（達(da)80-90%）。即可(ke)進行(xing)傳(chuan)代，具體步驟如(ru)下(xia)：

a，棄(qi)去培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong)PBS洗(xi)1-2次。

b，向瓶內加(jia)入(ru)1.0-2.0ml酶(mei)液(ye)，在倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細胞消化情(qing)況(kuang)，若細胞大(da)部(bu)分變圓(yuan)，迅速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，吸(xi)取(qu)酶(mei)，加(jia)含有6ml 含10%血清(qing)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，輕輕吹(chui)打細胞。

c，加(jia)入(ru)等(deng)量的(de)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，輕輕吹(chui)打混(hun)勻後吸(xi)出(chu)壹半(ban)，分(fen)到新的(de)培(pei)養(yang)

d，傳(chuan)代比(bi)例(li)：1:2-1:3

保(bao)存和(he)應(ying)用(yong)：

客(ke)戶可以根據自(zi)己的(de)需(xu)求選(xuan)擇新鮮或者凍存(cun)的(de)原(yuan)代細胞，如(ru)是(shi)新鮮原(yuan)代細胞，客(ke)戶收到(dao)細胞後應(ying)立(li)即將(jiang)其放(fang)入(ru)CO2細胞培(pei)養(yang)箱內靜置後2-3h，再(zai)進行(xing)後續(xu)的(de)實驗操作。如(ru)是(shi)凍存細胞，客(ke)戶收到(dao)細胞後應(ying)立(li)即將(jiang)其放(fang)入(ru)液(ye)氮、-80℃冰箱(xiang)或立(li)即進行(xing)復蘇(su)。

細胞復蘇(su)的(de)原(yuan)則(ze)：

在實際操作中，凍存(cun)細胞要(yao)進行(xing)復蘇(su)，再(zai)培養(yang)傳(chuan)代。復蘇(su)細胞壹(yi)般采用(yong)快速融(rong)化法。以保證細胞外(wai)結(jie)晶快速融(rong)化，以避免慢速融(rong)化水分(fen)滲(shen)入(ru)細胞內，再(zai)次形成胞內結晶損(sun)傷(shang)細胞。

1）該(gai)細胞只(zhi)能用(yong)於科研，不(bu)得用(yong)於臨床(chuang)。

2）收(shou)到細胞後首(shou)先觀(guan)察細胞瓶是(shi)否完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是(shi)否有漏液(ye)、渾(hun)濁等(deng)現象，若有上述現(xian)象發生請(qing)及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

3）仔(zai)細閱讀(du)細胞說明(ming)書，了(le)解(jie)細胞相(xiang)關信息(xi)，如(ru)細胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血清比(bi)例(li)、所需細胞因(yin)子等(deng)。

4）用(yong)75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細胞狀態(tai)。因(yin)運輸(shu)問題貼壁(bi)細胞會(hui)有少量從(cong)瓶壁(bi)脫(tuo)落，將(jiang)細胞置(zhi)於培養(yang)箱內靜置培(pei)養(yang)過夜，隔(ge)天(tian)再(zai)取(qu)出(chu)觀(guan)察。此(ci)時(shi)多數(shu)細胞均(jun)會貼壁(bi)，若細胞仍(reng)不(bu)能(neng)貼壁(bi)請(qing)用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染(ran)色(se)測(ce)定細胞活(huo)力，如(ru)果證實細胞活(huo)力正常(chang)，請將(jiang)細胞離心(xin)後用(yong)新鮮培養(yang)基(ji)再(zai)次貼壁(bi)培(pei)養(yang)；如(ru)果染(ran)色(se)結(jie)果(guo)顯示(shi)細胞無(wu)活力，請拍下(xia)照片(pian)及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，信息(xi)確(que)認(ren)後我(wo)們(men)為您(nin)再(zai)免費寄送壹(yi)次。

5）請(qing)客戶用(yong)相(xiang)同條(tiao)件的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於細胞培(pei)養(yang)。培養(yang)瓶內多余(yu)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)可收集備(bei)用(yong)，細胞傳(chuan)代時(shi)可以壹定比(bi)例(li)和(he)客(ke)戶自(zi)備(bei)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)，使(shi)細胞逐漸適(shi)應(ying)培(pei)養(yang)條(tiao)件;建議(yi)直(zhi)接購買我(wo)司提(ti)供(gong)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)。

6）建議(yi)客戶收到(dao)細胞後qian3天(tian)各拍幾(ji)張細胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細胞狀態(tai)，便於和(he)我(wo)司技術部(bu)溝(gou)通交(jiao)流。

細胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1）復蘇(su)細胞：將(jiang)含有1 mL細胞懸液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水(shui)浴中迅速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻。然後將(jiang)所有細胞懸液(ye)加(jia)入(ru)含適(shi)量培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶中培養(yang)過夜（或(huo)將(jiang)細胞懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養(yang)過夜）。第(di)二天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢查(zha)細胞密(mi)度(du)。

2）細胞傳(chuan)代：如(ru)果細胞密(mi)度(du)達(da)80%-90%，即可(ke)進行(xing)傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣、鎂(mei)離子(zi)的(de)PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消化液(ye)浸潤(run)所(suo)有細胞，將(jiang)培養(yang)瓶置(zhi)於37℃培養(yang)箱中消化1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況(kuang)而定），然後在顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細胞消化情(qing)況(kuang)，若細胞大(da)部(bu)分變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲幾(ji)下(xia)培養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消化。輕輕打(da)勻後裝入(ru)無菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分到新的(de)含8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新皿中或者瓶中，置於培養(yang)箱中培養(yang)。

3）細胞凍(dong)存：待(dai)細胞生(sheng)長狀態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可進行(xing)細胞凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶為例；

a、收(shou)集細胞，裝入(ru)無菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計數(shu)。

b、根據細胞數(shu)量加(jia)入(ru)無血(xue)清(qing)細胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每(mei)支凍(dong)存管凍存(cun)1mL細胞懸液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管做(zuo)好(hao)標(biao)識。

c、將(jiang)凍存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管(guan)位置以便下(xia)次拿取(qu)。

深(shen)圳瑞(rui)清生物(wu)信(xin)息(xi)科技(ji)有限公(gong)司經(jing)過(guo)數年的(de)努力發展(zhan)已(yi)迅速(su)成為集產(chan)品(pin)研發、經(jing)營(ying)為壹體的(de)專業化(hua)生(sheng)物(wu)工程(cheng)公(gong)司。公司具有完(wan)善的(de)實驗技術開(kai)發(fa)平(ping)臺(tai)，成熟(shu)的(de)抗原(yuan)、抗體研發系(xi)統，熟(shu)練掌(zhang)握(wo)各種(zhong)酶(mei)聯(lian)技(ji)術(shu)，結合(he)公司的(de)研發團(tuan)隊(dui)，可(ke)以有效的(de)保(bao)證公(gong)司產品強的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)和(he)高(gao)的(de)準(zhun)確性(xing)，同時(shi)又具有競爭力的(de)價(jia)格(ge)。 公司主(zhu)營(ying)ELISA試(shi)劑(ji)盒，目前(qian)可(ke)以提(ti)供(gong)生(sheng)化試(shi)劑(ji)、分(fen)子(zi)生(sheng)物(wu)學(xue)試(shi)劑(ji)及(ji)試(shi)劑(ji)盒，各種(zhong)抗體及免疫學(xue)試(shi)劑(ji)盒、實驗耗(hao)材等(deng)多門(men)類(lei)上萬(wan)種產品，產品涉及(ji)分子生(sheng)物(wu)學(xue)、細胞生(sheng)物(wu)學(xue)、免疫學(xue)等(deng)生命(ming)科學(xue)的(de)各個(ge)領(ling)域(yu)。