小(xiao)鼠(shu)肺大靜(jing)脈(mai)平滑(hua)肌細(xi)胞

小(xiao)鼠(shu)肺大靜(jing)脈(mai)平滑(hua)肌細(xi)胞需(xu)要(yao)準(zhun)備(bei)好(hao)細(xi)胞所要用(yong)到(dao)的培(pei)養(yang)基(ji)和(he)相關試(shi)劑(ji)，雖然所有的(de)貼(tie)壁(bi)，半(ban)貼(tie)壁(bi)或(huo)者(zhe)懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)處(chu)理方(fang)式差(cha)不多(duo)，但(dan)是(shi)不同的(de)實(shi)驗(yan)室(shi)培(pei)養(yang)條件(jian)和(he)處(chu)理力(li)度(du)還(hai)有(you)試(shi)劑(ji)的(de)批(pi)間(jian)差(cha)這(zhe)些(xie)問題存在(zai)，也(ye)會導(dao)致對細胞(bao)處(chu)理不當(dang)，  或(huo)者(zhe)環境(jing)的不適應(ying)而造(zao)成(cheng)細(xi)胞的(de)死(si)亡(wang)。
小(xiao)鼠(shu)肺大靜(jing)脈(mai)平滑(hua)肌細(xi)胞培(pei)養(yang)物的(de)生理環(huan)境(jing)不同時(shi)定(ding)義為(wei)其物理(li)化(hua)學(xue)環境(jing)中(zhong)，更好(hao)地(di)理解血清(qing)的組件(jian)，所必需(xu)的(de)增殖(zhi)的生長因子(zi)的鑒定，並更好(hao)地(di)理解細胞(bao)在(zai)培(pei)養(yang)的微環(huan)境(jing)（即，細(xi)胞(bao) - 細(xi)胞相互作(zuo)用(yong)，氣(qi)體(ti)的(de)擴散(san)，與(yu)基(ji)質(zhi)相互作(zuo)用(yong)）現在(zai)允(yun)許(xu)在(zai)無血清(qing)培養(yang)基(ji)中(zhong)某(mou)些(xie)細胞(bao)系(xi)的培(pei)養(yang)。
小(xiao)鼠(shu)肺大靜(jing)脈(mai)平滑(hua)肌細(xi)胞培(pei)養(yang)物的(de)主要優(you)點(dian)是(shi)操縱(zong)物理(li)化(hua)學(xue)（即，溫(wen)度(du)，pH，滲透壓，O2和(he)CO2張力(li)）和(he)生理環(huan)境(jing)（即，激(ji)素(su)和(he)營(ying)養(yang)物濃(nong)度(du)），其中(zhong)所(suo)述(shu)細胞(bao)繁(fan)殖(zhi)的能力。除(chu)溫度(du)，將(jiang)培(pei)養(yang)環境(jing)是(shi)由生長培養(yang)基(ji)進(jin)行控制(zhi)。
小(xiao)鼠(shu)肺大靜(jing)脈(mai)平滑(hua)肌細(xi)胞對於培(pei)養(yang)，只(zhi)要我(wo)們細(xi)心操作(zuo)，註(zhu)意細(xi)節，並不是(shi)大家說(shuo)的(de)那(na)樣困難。對於有(you)經(jing)驗(yan)和(he)有條件(jian)的客戶(hu)，建議由公(gong)司(si)代(dai)為(wei)培養(yang)細胞(bao)及(ji)進行(xing)後(hou)續(xu)研(yan)究(jiu)。

細(xi)胞概(gai)述(shu)

細(xi)胞(英文(wen)名: cell) 並沒(mei)有(you)統壹的定義，比較(jiao)普(pu)遍(bian)的(de)提(ti)法(fa)是(shi):細胞(bao)是(shi)生物體(ti)基(ji)本(ben)的結(jie)構和(he)功能單位(wei)。已(yi)知(zhi)除(chu)病毒(du)之外的(de)所(suo)有生物均由細(xi)胞(bao)所組成(cheng)，但(dan)病毒(du)生命活動(dong)也(ye)必須(xu)在(zai)細(xi)胞中(zhong)才(cai)能體(ti)現。壹般(ban)來(lai)說(shuo)， 細(xi)菌等絕大部分(fen)微生物以(yi)及(ji)原(yuan)生動物由壹個細胞組成(cheng)，即(ji)單細(xi)胞生物，高(gao)等(deng)植(zhi)物與(yu)高(gao)等動物則是(shi)多細(xi)胞(bao)生物。細(xi)胞(bao)可(ke)分(fen)為(wei)原核細(xi)胞、真(zhen)核細(xi)胞兩(liang)類(lei)，但也(ye)有人提(ti)出(chu)應(ying)分為(wei)三(san)類(lei)，即把(ba)原屬於原核細(xi)胞的(de)古核細(xi)胞獨(du)立出(chu)來(lai)作(zuo)為(wei)與(yu)之(zhi)並列的壹 類(lei)。研(yan)究(jiu)細(xi)胞(bao)的(de)學(xue)科(ke)稱為(wei)細胞(bao)生物學(xue)。細胞(bao)體(ti)形(xing)極(ji)微，在(zai)顯微鏡(jing)下始能窺(kui)見，形狀(zhuang)多(duo)種多(duo)樣。主要由細(xi)胞(bao)核與(yu)細(xi)胞質構成(cheng)，表(biao)面(mian)有細(xi)胞(bao)膜。高(gao)等(deng)植(zhi)物細(xi)胞(bao)膜外有(you)細(xi)胞壁，細(xi)胞質中(zhong)常有質體(ti)，體(ti)內有

葉綠體(ti)和(he)液泡(pao)，還(hai)有(you)線(xian)粒體(ti)。動(dong)物細(xi)胞(bao)無細(xi)胞(bao)壁,細(xi)胞質(zhi)中(zhong)常有中(zhong)心(xin)體(ti)，而(er)高(gao)等(deng)植(zhi)物細(xi)胞(bao)中(zhong)則無。細(xi)胞(bao)有運動、營(ying)養(yang)和(he)繁殖(zhi)等機能。

細(xi)胞特性:

1)組織(zhi)來(lai)源(yuan)於(yu)實(shi)驗(yan)動(dong)物的(de)正(zheng)常胃(wei)組織(zhi)。

2)細(xi)胞鑒定：廣譜(pu)（PCK）或(huo)細(xi)胞-19（CK-19）免疫(yi)熒(ying)光染(ran)色為(wei)陽(yang)性。經(jing)鑒定細胞純度(du)高(gao)於(yu)90%。

3)不含(han)有(you) HIV-1、 HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌、酵(jiao)母和(he)真(zhen)菌。

4)細(xi)胞生長方(fang)式：鋪(pu)路石狀細胞(bao)，不規(gui)則細(xi)胞，貼(tie)壁(bi)培養(yang)。

產品(pin)規格(ge)：>5×105細(xi)胞(bao)數

包(bao)裝規格：1ml凍存(cun)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液或(huo)T-25培(pei)養(yang)瓶

操作(zuo)要(yao)點(dian)：

1）將(jiang)培養(yang)基(ji)在(zai)37℃水(shui)浴(yu)鍋預(yu)熱；準(zhun)備(bei)壹個15mL無菌的離心(xin)管，加入8mL預熱培養(yang)基(ji)。

2）將(jiang)凍存(cun)細胞從液氮(dan)罐中(zhong)取(qu)出，快速放(fang)入37℃水(shui)浴(yu)鍋中(zhong)復(fu)溫（可準(zhun)備(bei)壹潔凈的燒(shao)杯(bei)，裝滿37℃的水(shui)，細胞(bao)凍存(cun)管取(qu)出(chu)後(hou)迅(xun)速放(fang)入燒(shao)杯(bei)內，再逐步(bu)轉移到(dao)水(shui)浴(yu)鍋中(zhong)）。輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)凍(dong)存(cun)管，使(shi)細胞(bao)能在(zai)1~2min內解凍，使(shi)細胞(bao)能盡快通過(guo)易(yi)受(shou)損的(de)溫度(du)段(duan)（-5~0℃）。註意凍(dong)存(cun)管管口(kou)不能沒入水(shui)中(zhong)，避(bi)免引(yin)起(qi)汙染(ran)。

3）用(yong)75%酒(jiu)精擦(ca)拭凍存(cun)管後(hou)再置於超凈(jing)臺(tai)內，將管內細胞轉移至準(zhun)備(bei)好(hao)的(de)離心管內，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)液體(ti)，使(shi)細胞(bao)均勻(yun)分散，吹(chui)打(da)時避(bi)免產生氣(qi)泡(pao)。用(yong)新鮮(xian)培養(yang)基(ji)洗管壁(bi)2次，均轉移至離心(xin)管內。

4）800rpm離(li)心5min，棄上清(qing)，加入新鮮(xian)的培(pei)養(yang)基(ji)，吹(chui)打(da)制成(cheng)細(xi)胞懸(xuan)液。

5）將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液轉移至T25細胞(bao)瓶內，補加適量的(de)培養(yang)基(ji)，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)細(xi)胞(bao)瓶使(shi)細胞(bao)分(fen)布均勻(yun)，放(fang)入溫箱(xiang)內培養(yang)。

6）第(di)二天(tian)觀(guan)察(cha)細胞貼(tie)壁(bi)生長情況(kuang)，換(huan)新鮮(xian)培養(yang)基(ji)以(yi)去除(chu)死(si)細胞(bao)。繼續(xu)培養(yang)，待細(xi)胞(bao)長至80~90%匯(hui)合(he)時(shi)正(zheng)常傳代(dai)。壹般(ban)剛復蘇(su)的(de)細胞需(xu)經(jing)過(guo)2~3次傳代(dai)，細(xi)胞(bao)活(huo)力恢(hui)復(fu)後(hou)才(cai)能進行後(hou)續(xu)的實驗(yan)。

細(xi)胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1）復(fu)蘇細(xi)胞：將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍存管在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離心(xin)3 min，棄去上清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液加入含(han)適量培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞懸(xuan)液加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第(di)二天(tian)換(huan)液並檢(jian)查(zha)細胞(bao)密度(du)。

2）細(xi)胞傳代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密度(du)達(da)80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去培養(yang)上清(qing)，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的PBS潤洗細胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化液於培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消化液浸潤所有(you)細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化1-2 min（視細胞(bao)情況(kuang)而(er)定(ding)），然後(hou)在(zai)顯微鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細胞消化情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部分(fen)變(bian)圓並脫(tuo)落(luo)，迅速拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾(ji)下培養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後(hou)裝入無菌離心管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄去上清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。

3）細(xi)胞凍(dong)存：待細胞生長狀態良好(hao)時(shi)，可進行細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；

a、收(shou)集細胞(bao)，裝入無菌離心管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下離心(xin)4 min，棄去上清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄盡PBS，進行細(xi)胞(bao)計數。

b、根據(ju)細(xi)胞數(shu)量(liang)加入無血清(qing)細胞(bao)凍存(cun)液，使(shi)細胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支凍存管凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。

c、將(jiang)凍存(cun)管放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存管位(wei)置以(yi)便(bian)下次拿(na)取。

 產品(pin)的運(yun)輸(shu)和(he)保存(cun)：

視(shi)天(tian)氣(qi)狀況(kuang)和(he)運輸(shu)距(ju)離(li)遠(yuan)近，公司(si)與(yu)客戶(hu)協商(shang)後(hou)選(xuan)擇(ze)下述(shu)方(fang)式中(zhong)的(de)壹種進(jin)行(xing)。

1)1mL凍(dong)存細(xi)胞懸(xuan)液裝於1.8ml的凍存(cun)管中(zhong)，置(zhi)於裝滿幹冰(bing)的(de)泡(pao)沫(mo)保溫(wen)盒(he)中(zhong)進(jin)行運輸；收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)請(qing)盡(jin)快(kuai)解凍復蘇細(xi)胞(bao)進行培養(yang)，如(ru)無法(fa)立刻(ke)進(jin)行復蘇操作(zuo)，凍(dong)存細(xi)胞可在(zai)-80℃的(de)條件(jian)下保存(cun)1個(ge)月。

2)T-25培(pei)養(yang)瓶充(chong)滿培養(yang)基(ji)後(hou)進(jin)行(xing)常溫運輸(shu)；收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)請(qing)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細胞生長狀態，如(ru)鋪(pu)瓶率(lv)超(chao)過(guo)85%請(qing)立即(ji)進(jin)行傳代(dai)操作(zuo)，如(ru)懸(xuan)浮的(de)細(xi)胞較(jiao)多(duo)，請將培養(yang)瓶至(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中(zhong)靜(jing)置過夜以(yi)幫(bang)助(zhu)未死(si)亡(wang)的懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)能夠再次貼(tie)壁(bi)。

友(you)情提(ti)示(shi)註意以(yi)下幾(ji)點(dian)：

1、收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)請(qing)盡(jin)快(kuai)更換(huan)為(wei)含(han)15%血清(qing)的新鮮(xian)培養(yang)基(ji)，如(ru)因(yin)特殊(shu)情況(kuang)需(xu)要(yao)繼續(xu)使(shi)用(yong)原(yuan)瓶，請(qing)在(zai)原(yuan)瓶培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)額(e)外添(tian)加10%的(de)血清(qing)

2、貼(tie)壁(bi)細胞收(shou)到(dao)當天(tian)切(qie)忌(ji)立刻(ke)消化，請將細(xi)胞(bao)換(huan)液後(hou)放(fang)置培(pei)養(yang)箱(xiang)孵(fu)育到(dao)第(di)二天(tian)再做(zuo)消化傳代(dai)，請(qing)優(you)先(xian)選擇(ze)直(zhi)徑(jing)6cm的培(pei)養(yang)皿(min)進(jin)行傳代(dai)培(pei)養(yang)

3、如(ru)簽(qian)收(shou)時出(chu)現培養(yang)瓶壁(bi)破裂(lie)，漏(lou)液等(deng)情況(kuang)請(qing)及(ji)時做(zuo)好(hao)照片記錄(lu)並聯(lian)系實(shi)驗(yan)室(shi)

 深(shen)圳瑞(rui)清(qing)生物信息科(ke)技有(you)限公(gong)司經(jing)過(guo)數(shu)年的努力(li)發展已(yi)迅(xun)速成(cheng)為(wei)集產品(pin)研(yan)發(fa)、經(jing)營(ying)為(wei)壹體(ti)的(de)專(zhuan)業(ye)化(hua)生物工程(cheng)公司(si)。公(gong)司(si)具有完(wan)善(shan)的(de)實(shi)驗(yan)技(ji)術(shu)開發平臺，成(cheng)熟的抗(kang)原(yuan)、抗(kang)體(ti)研(yan)發(fa)系統，熟練(lian)掌(zhang)握各(ge)種酶(mei)聯(lian)技術(shu)，結(jie)合(he)公(gong)司(si)的(de)研(yan)發(fa)團(tuan)隊(dui)，可(ke)以(yi)有效的(de)保證(zheng)公司(si)產品(pin)強的(de)穩定性和(he)高的(de)準(zhun)確(que)性，同時(shi)又(you)具有(you)競爭力的價(jia)格(ge)。 公(gong)司主營(ying)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)，目(mu)前(qian)可以提(ti)供生化試(shi)劑(ji)、分(fen)子(zi)生物學(xue)試(shi)劑(ji)及(ji)試(shi)劑(ji)盒(he)，各(ge)種抗(kang)體(ti)及(ji)免疫(yi)學(xue)試(shi)劑(ji)盒(he)、實(shi)驗(yan)耗(hao)材等(deng)多門(men)類(lei)上萬(wan)種產品(pin)，產品(pin)涉(she)及分(fen)子(zi)生物學(xue)、細胞(bao)生物學(xue)、免疫(yi)學(xue)等生命科(ke)學(xue)的各(ge)個(ge)領域。