人(ren)乳頭(tou)狀(zhuang)瘤(liu)病(bing)毒抗體IgM HPV-IgM 試(shi)劑盒說明(ming)書

檢測原(yuan)理

試劑盒采用雙抗壹(yi)步(bu)夾心(xin)法(fa)酶聯(lian)免疫吸(xi)附(fu)試驗（ELISA）。往(wang)預先包(bao)被(bei)抗乳(ru)頭瘤(liu)病毒抗原(yuan)的包被(bei)微孔中，依(yi)次加(jia)入標(biao)本、HRP標(biao)記(ji)的檢測抗(kang)體，經(jing)過溫(wen)育(yu)並徹(che)di洗(xi)滌。用底物TMB顯色(se)，TMB在(zai)過(guo)氧化物(wu)酶的催化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍色，並(bing)在(zai)酸(suan)的作用下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)最(zui)終的黃色(se)。用酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm波(bo)長(chang)下(xia)測定(ding)吸光(guang)度（OD 值(zhi)），與(yu)CUTOFF值(zhi)相(xiang)比較，從(cong)而(er)判(pan)定(ding)標(biao)本中乳(ru)頭(tou)瘤病(bing)毒抗體IgM（HPV-IgM）的存(cun)在(zai)與(yu)否(fou)。

樣品收集(ji)、處(chu)理及(ji)保存(cun)方法(fa)

1.  血(xue)清：使用不含熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒素的試管(guan)，操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中避(bi)免任何(he)細(xi)胞刺(ci)激，收集(ji)血(xue)液後(hou)，3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血清和(he)紅(hong)細(xi)胞迅(xun)速(su)小(xiao)心(xin)地(di)分(fen)離(li)。

2.  血漿：EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽(yan)或(huo)肝素抗凝。3000轉(zhuan)離(li)心(xin)30分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清。

3.  細(xi)胞上(shang)清液：3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒和(he)聚(ju)合(he)物(wu)。

4.  組織勻漿：將組(zu)織加(jia)入適量(liang)生(sheng)理鹽(yan)水(shui)搗碎(sui)。3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)取(qu)上清。

5.  保存(cun)：如果(guo)樣(yang)本(ben)收集(ji)後(hou)不及(ji)時檢測，請按壹(yi)次用量(liang)分(fen)裝，凍(dong)存(cun)於-20℃，避(bi)免反(fan)復凍(dong)融，在(zai)室(shi)溫下解(jie)凍(dong)並確(que)保樣(yang)品均勻(yun)地(di)充分解凍(dong)。

自備物(wu)品(pin)

1. 酶標(biao)儀(yi)（450nm）

2. 高(gao)精(jing)度加(jia)樣器(qi)及(ji)槍(qiang)頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操(cao)作(zuo)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)

1. 試(shi)劑盒保存(cun)在(zai)2-8℃，使用前(qian)室(shi)溫平衡(heng)20分鐘(zhong)。從(cong)冰(bing)箱取(qu)出的濃縮(suo)洗(xi)滌液會有結(jie)晶(jing)，這屬於(yu)正(zheng)常現(xian)象(xiang)，水浴(yu)加(jia)熱(re)使結晶(jing)wan全(quan)溶(rong)解後(hou)再(zai)使用。

2. 實驗中不(bu)用的板條應(ying)立(li)即(ji)放(fang)回自封(feng)袋(dai)中，密(mi)封(feng)（低溫(wen)幹燥）保存(cun)。

3. 預處(chu)理後(hou)的樣本(ben)請按照操(cao)作(zuo)步(bu)驟用樣本稀(xi)釋液適當(dang)稀(xi)釋以(yi)達到試(shi)劑盒的的最(zui)佳檢測效(xiao)果(guo)。

4. 嚴(yan)格(ge)按照說(shuo)明(ming)書中標(biao)明(ming)的時間(jian)、加(jia)液量(liang)及(ji)順序(xu)進行溫(wen)育操(cao)作(zuo)。

所(suo)有(you)液(ye)體組(zu)分(fen)使用前(qian)充分搖勻。

試(shi)劑盒組成(cheng)

試(shi)劑的準備(bei)

20×洗(xi)滌緩沖(chong)液(ye)的稀釋：蒸(zheng)餾(liu)水(shui)按1：20稀釋，即(ji)1份(fen)的20×洗滌緩沖(chong)液(ye)加(jia)19份的蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

洗(xi)板(ban)方法(fa)

1. 手(shou)工(gong)洗板(ban)：甩(shuai)盡孔內(nei)液(ye)體，每(mei)孔加(jia)滿洗(xi)滌液，靜(jing)置(zhi)1min後(hou)甩盡孔內(nei)液(ye)體，在(zai)吸(xi)水紙上(shang)拍(pai)幹(gan)，如(ru)此洗(xi)板5次。

2. 自動(dong)洗(xi)板機(ji)：每孔註(zhu)入洗液350μL，浸泡(pao)1min，洗(xi)板5次。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟

1. 從(cong)室(shi)溫平衡(heng)20min後(hou)的鋁箔(bo)袋(dai)中取(qu)出所(suo)需板條，剩(sheng)余(yu)板條用自封袋(dai)密封(feng)放(fang)回4℃。

2. 設置(zhi)陰(yin)、陽(yang)性對照孔和(he)樣(yang)本(ben)孔，陰(yin)、陽(yang)性對照孔中加(jia)入陰(yin)性對照、陽(yang)性對照各50μL；

3. 待(dai)測樣(yang)本(ben)孔先(xian)加(jia)待(dai)測樣(yang)本(ben)10μL，再(zai)加(jia)樣本(ben)稀(xi)釋液40μL；

1. 隨後(hou)陰(yin)、陽(yang)性對照孔和(he)樣(yang)本(ben)孔中每(mei)孔加(jia)入辣(la)根(gen)過氧化物(wu)酶（HRP）標(biao)記(ji)的檢測抗(kang)體100μL，用封板膜(mo)封住(zhu)反(fan)應(ying)孔，37℃水(shui)浴(yu)鍋或恒(heng)溫箱溫(wen)育60min。

2. 棄(qi)去(qu)液體，吸(xi)水(shui)紙上(shang)拍幹，每孔加(jia)滿洗(xi)滌液，靜(jing)置(zhi)1min，甩(shuai)去(qu)洗滌液，吸(xi)水(shui)紙上拍(pai)幹，如(ru)此(ci)重(zhong)復洗(xi)板(ban)5次（也可(ke)用洗板機(ji)洗板(ban)）。

3. 每(mei)孔加(jia)入底物A、B各50μL，37℃避(bi)光孵育15min。

4. 每(mei)孔加(jia)入終止液50μL，15min內，在(zai)450nm波(bo)長(chang)處(chu)測定(ding)各孔的OD值。

結(jie)果(guo)判(pan)斷(duan)

1.  試(shi)驗(yan)有效(xiao)性：陽(yang)性對照孔OD值(zhi)平均值(zhi)≥1.00；

陰(yin)性對照孔OD值(zhi)平均值(zhi)≤0.15。

2.  臨(lin)界值（Cut off）計算：臨(lin)界值=陰(yin)性對照孔平均值(zhi)+0.15

3.  陰(yin)性判(pan)斷(duan)：樣(yang)品(pin)OD值＜臨(lin)界值（Cut off），樣(yang)品為(wei)陰(yin)性

4.  陽(yang)性判(pan)斷(duan)：樣(yang)品(pin)OD值＞臨(lin)界值（Cut off），樣(yang)品為(wei)陽(yang)性

試(shi)劑盒性能(neng)

1. 準確(que)性：陽(yang)性對照孔OD值(zhi)平均值(zhi)≥1.00；陰(yin)性對照孔OD值(zhi)平均值(zhi)≤0.15，說(shuo)明(ming)試驗(yan)結果(guo)有(you)效(xiao)。

2. 特(te)異性：不(bu)與其(qi)它可(ke)溶性結(jie)構類(lei)似物交叉反(fan)應(ying)。

3. 重(zhong)復性：板(ban)內、板(ban)間(jian)變(bian)異系(xi)數均小(xiao)於15%。

4. 貯(zhu)藏(zang)：2-8℃，避(bi)光防潮(chao)保存(cun)。

5.  有效(xiao)期：6個(ge)月(yue)

免責聲(sheng)明(ming)

1. 試劑盒僅(jin)供(gong)研(yan)究(jiu)使用，不得用於臨(lin)床實驗或(huo)人(ren)體實驗，否(fou)則(ze)所(suo)產生的壹(yi)切(qie)後(hou)果(guo)，由(you)實驗者承(cheng)擔，本(ben)公(gong)司(si)概(gai)不(bu)負責。

2. 嚴(yan)格(ge)按照說(shuo)明(ming)書操(cao)作(zuo)，實驗者違(wei)反(fan)說(shuo)明(ming)書操(cao)作(zuo)，後(hou)果(guo)由(you)實驗者承(cheng)擔。

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