小鼠(shu)肺(fei)成纖(xian)維(wei)細胞(bao)

小鼠(shu)肺(fei)成纖(xian)維(wei)細胞(bao)需要準(zhun)備好(hao)細胞(bao)所(suo)要(yao)用(yong)到的(de)培(pei)養(yang)基和(he)相關試劑(ji)，雖然所(suo)有(you)的(de)貼(tie)壁，半(ban)貼(tie)壁或(huo)者懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)處(chu)理方(fang)式(shi)差(cha)不(bu)多，但是不(bu)同的實驗室培(pei)養(yang)條件和(he)處理力度還(hai)有試劑(ji)的(de)批間(jian)差(cha)這些(xie)問題存在(zai)，也(ye)會(hui)導(dao)致(zhi)對細胞(bao)處(chu)理不(bu)當，  或者環(huan)境(jing)的(de)不(bu)適(shi)應而(er)造(zao)成細胞(bao)的(de)死(si)亡(wang)。
小鼠(shu)肺(fei)成纖(xian)維(wei)細胞(bao)培養(yang)物(wu)的生理環(huan)境(jing)不(bu)同時定義為(wei)其(qi)物(wu)理化學環(huan)境(jing)中(zhong)，更(geng)好(hao)地(di)理解血清(qing)的組件，所(suo)必需(xu)的(de)增殖的生長因(yin)子的鑒定，並更(geng)好(hao)地(di)理解細胞(bao)在(zai)培(pei)養(yang)的微(wei)環(huan)境(jing)（即(ji)，細胞(bao) - 細胞(bao)相互(hu)作用(yong)，氣體的(de)擴(kuo)散，與(yu)基(ji)質(zhi)相互(hu)作用(yong)）現在(zai)允(yun)許(xu)在(zai)無血清(qing)培養(yang)基中(zhong)某些(xie)細胞(bao)系(xi)的培(pei)養(yang)。
小鼠(shu)肺(fei)成纖(xian)維(wei)細胞(bao)培養(yang)物(wu)的主(zhu)要(yao)優(you)點是操(cao)縱物(wu)理化學（即(ji)，溫度，pH，滲透壓，O2和(he)CO2張力）和(he)生理環(huan)境(jing)（即(ji)，激素(su)和(he)營養(yang)物(wu)濃度），其中(zhong)所(suo)述細胞(bao)繁(fan)殖的能力。除(chu)溫度，將培養(yang)環(huan)境(jing)是(shi)由生長培養(yang)基進(jin)行(xing)控(kong)制。
小鼠(shu)肺(fei)成纖(xian)維(wei)細胞(bao)對於(yu)培養(yang)，只要(yao)我(wo)們細心(xin)操作，註(zhu)意(yi)細節，並不(bu)是大家(jia)說(shuo)的那樣(yang)困難(nan)。對於(yu)有經(jing)驗和(he)有條(tiao)件的客(ke)戶，建(jian)議由公司(si)代(dai)為(wei)培(pei)養(yang)細胞(bao)及(ji)進(jin)行(xing)後續研(yan)究(jiu)

細胞(bao)復(fu)蘇(su)技術：

1. 取出(chu)細胞(bao)，迅速放(fang)入(ru)37℃溫(wen)水中(zhong)快(kuai)速解凍(dong)

2. 吸(xi)出(chu)細胞(bao)懸(xuan)液(ye),並加10倍以(yi)上(shang)培養(yang)液(ye)

3. 1000r/分鐘(zhong)離(li)心(xin)5分鐘(zhong)，去(qu)除上(shang)清(qing)

4. 用培(pei)養(yang)液(ye)適(shi)當稀釋後接(jie)種培養(yang)瓶,放(fang)入(ru)37℃ CO2培(pei)養(yang)箱靜(jing)置(zhi)培(pei)養(yang)

5. 鏡檢(jian)細胞(bao)貼(tie)壁能力，次日(ri)更(geng)換壹次培(pei)養(yang)液(ye),繼(ji)續培(pei)養(yang)

培養(yang)方法：

收到細胞(bao)後，在(zai)倒置顯(xian)微(wei)鏡下觀察整(zheng)個細胞(bao)生長情況(kuang)：

如(ru)果(guo)細胞(bao)未(wei)長滿，用(yong)75%酒精(jing)噴(pen)灑(sa)整(zheng)個(ge)瓶(ping)消毒(du)後放到(dao)超菌臺(tai)內(nei)，嚴(yan)格無菌操(cao)作，打(da)開(kai)細胞(bao)培(pei)養(yang)瓶，留(liu)10ml培(pei)養(yang)液(ye)繼(ji)續培(pei)養(yang)。

如(ru)果(guo)細胞(bao)已(yi)長滿（達(da)80-90%）。即可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代，具體步(bu)驟(zhou)如(ru)下：

a，棄(qi)去培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong)PBS洗1-2次。

b，向瓶(ping)內(nei)加入(ru)1.0-2.0ml酶液(ye)，在(zai)倒置顯(xian)微(wei)鏡下觀察細胞(bao)消化情況，若細胞(bao)大(da)部(bu)分變圓(yuan)，迅速拿(na)回操作臺(tai)，吸(xi)取酶，加含有(you)6ml 含10%血清(qing)的培養(yang)液(ye)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞(bao)。

c，加入(ru)等量(liang)的的(de)培養(yang)液(ye)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打混勻後吸(xi)出(chu)壹(yi)半(ban)，分到(dao)新(xin)的培(pei)養(yang)

d，傳代(dai)比(bi)例(li)：1:2-1:3

保(bao)存和(he)應用(yong)：

客(ke)戶可(ke)以(yi)根(gen)據(ju)自(zi)己的需求選(xuan)擇(ze)新(xin)鮮或者凍(dong)存的(de)原(yuan)代細胞(bao)，如(ru)是(shi)新(xin)鮮原(yuan)代細胞(bao)，客(ke)戶收到細胞(bao)後應立(li)即(ji)將其放入(ru)CO2細胞(bao)培(pei)養(yang)箱內(nei)靜置(zhi)後2-3h，再進(jin)行(xing)後續的(de)實驗操作。如(ru)是(shi)凍(dong)存細胞(bao)，客(ke)戶收到細胞(bao)後應立(li)即(ji)將其放入(ru)液(ye)氮、-80℃冰(bing)箱(xiang)或(huo)立(li)即(ji)進(jin)行(xing)復(fu)蘇。

細胞(bao)復(fu)蘇(su)的原(yuan)則(ze)：

在(zai)實(shi)際(ji)操(cao)作中(zhong)，凍(dong)存細胞(bao)要(yao)進(jin)行(xing)復(fu)蘇，再培養(yang)傳代(dai)。復(fu)蘇(su)細胞(bao)壹(yi)般(ban)采(cai)用快(kuai)速融化法。以(yi)保(bao)證(zheng)細胞(bao)外(wai)結(jie)晶(jing)快(kuai)速融化，以避免(mian)慢速融化水分滲入細胞(bao)內(nei)，再次形(xing)成胞(bao)內(nei)結(jie)晶(jing)損傷細胞(bao)。

1）該細胞(bao)只(zhi)能用於科研(yan)，不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)。

2）收到細胞(bao)後首先(xian)觀察細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好(hao)，培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現象，若有上(shang)述現象發生請(qing)及(ji)時和(he)我們聯系(xi)。

3）仔(zai)細閱讀細胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了解細胞(bao)相關信息(xi)，如(ru)細胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu)細胞(bao)因(yin)子等。

4）用75%酒精(jing)擦(ca)拭細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下觀察細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸(shu)問題貼(tie)壁細胞(bao)會(hui)有(you)少(shao)量(liang)從瓶(ping)壁脫落，將細胞(bao)置(zhi)於(yu)培養(yang)箱內(nei)靜置(zhi)培(pei)養(yang)過(guo)夜，隔(ge)天(tian)再取(qu)出(chu)觀察。此(ci)時多數(shu)細胞(bao)均會貼(tie)壁，若(ruo)細胞(bao)仍不(bu)能貼(tie)壁請(qing)用臺(tai)盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)測定細胞(bao)活(huo)力，如(ru)果(guo)證(zheng)實(shi)細胞(bao)活(huo)力正(zheng)常(chang)，請(qing)將細胞(bao)離(li)心(xin)後用新(xin)鮮培養(yang)基再(zai)次貼(tie)壁培(pei)養(yang)；如(ru)果(guo)染(ran)色(se)結(jie)果顯(xian)示細胞(bao)無活(huo)力，請(qing)拍下照(zhao)片及(ji)時和(he)我們聯系(xi)，信息(xi)確認(ren)後我們為(wei)您(nin)再免(mian)費寄送(song)壹(yi)次。

5）請(qing)客(ke)戶用相同條件的培養(yang)基用(yong)於(yu)細胞(bao)培(pei)養(yang)。培養(yang)瓶內(nei)多余(yu)的培(pei)養(yang)基可(ke)收集備用，細胞(bao)傳(chuan)代(dai)時可(ke)以(yi)壹(yi)定(ding)比(bi)例(li)和(he)客(ke)戶自(zi)備的培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)，使細胞(bao)逐(zhu)漸(jian)適(shi)應培(pei)養(yang)條件;建(jian)議直接(jie)購(gou)買(mai)我(wo)司(si)提供的培(pei)養(yang)基。

6）建(jian)議客(ke)戶收到細胞(bao)後qian3天(tian)各拍幾張細胞(bao)照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和(he)我司(si)技(ji)術部(bu)溝(gou)通(tong)交流。

細胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1）復蘇(su)細胞(bao)：將含有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培養(yang)基混(hun)合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹勻。然後將所(suo)有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含適(shi)量(liang)培養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過(guo)夜（或(huo)將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換液(ye)並檢(jian)查細胞(bao)密(mi)度。

2）細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細胞(bao)密(mi)度達(da)80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的PBS潤(run)洗細胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化液(ye)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使消化液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細胞(bao)，將培養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然後在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下觀察細胞(bao)消化情況，若細胞(bao)大(da)部(bu)分變圓(yuan)並脫落，迅速拿(na)回操作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培養(yang)瓶後加2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化。輕輕打勻後裝入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹勻。

c、將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例(li)分到(dao)新(xin)的含8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新(xin)皿中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。

3）細胞(bao)凍(dong)存：待(dai)細胞(bao)生長狀態(tai)良(liang)好(hao)時，可(ke)進(jin)行(xing)細胞(bao)凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；

a、收集細胞(bao)，裝(zhuang)入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細胞(bao)數(shu)量(liang)加入(ru)無血清(qing)細胞(bao)凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻，每(mei)支凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標識(shi)。

c、將凍(dong)存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液(ye)氮灌(guan)儲存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管(guan)位置(zhi)以(yi)便(bian)下次拿(na)取(qu)。

深圳(zhen)瑞清(qing)生物(wu)信息(xi)科技(ji)有(you)限公司(si)經(jing)過(guo)數年(nian)的努力發(fa)展(zhan)已(yi)迅速成為(wei)集產品(pin)研(yan)發、經(jing)營為(wei)壹(yi)體的(de)專(zhuan)業(ye)化生物(wu)工(gong)程(cheng)公司(si)。公司(si)具(ju)有(you)完善的(de)實(shi)驗技術開(kai)發(fa)平臺(tai)，成熟(shu)的(de)抗(kang)原(yuan)、抗(kang)體研(yan)發系(xi)統，熟練(lian)掌握(wo)各種酶聯技(ji)術，結(jie)合(he)公司(si)的(de)研(yan)發團隊，可(ke)以(yi)有(you)效(xiao)的(de)保(bao)證(zheng)公司(si)產品(pin)強的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)和(he)高的(de)準(zhun)確(que)性，同時又(you)具有(you)競(jing)爭力的(de)價(jia)格(ge)。 公司(si)主(zhu)營ELISA試劑(ji)盒(he)，目前(qian)可(ke)以(yi)提供生化試劑(ji)、分子(zi)生物(wu)學試劑(ji)及(ji)試劑(ji)盒(he)，各種抗(kang)體及(ji)免(mian)疫學試劑(ji)盒(he)、實驗耗材等多(duo)門類上(shang)萬(wan)種產品(pin)，產品(pin)涉(she)及(ji)分子(zi)生物(wu)學、細胞(bao)生物(wu)學、免(mian)疫學等(deng)生命科學的(de)各個(ge)領(ling)域。