小(xiao)鼠氣管平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞

小(xiao)鼠(shu)氣(qi)管平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞需要(yao)準(zhun)備好細(xi)胞所要(yao)用(yong)到(dao)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)和相(xiang)關(guan)試(shi)劑，雖(sui)然所有的(de)貼壁，半(ban)貼壁或(huo)者(zhe)懸浮細(xi)胞處(chu)理(li)方(fang)式差(cha)不多(duo)，但是不同的(de)實驗(yan)室(shi)培(pei)養(yang)條件(jian)和(he)處(chu)理(li)力度(du)還有試(shi)劑的(de)批間(jian)差(cha)這(zhe)些(xie)問題存在(zai)，也(ye)會(hui)導(dao)致(zhi)對(dui)細(xi)胞處(chu)理(li)不當(dang)，  或(huo)者(zhe)環(huan)境(jing)的(de)不適(shi)應而(er)造成細(xi)胞的(de)死(si)亡(wang)。
小(xiao)鼠(shu)氣(qi)管平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞培(pei)養(yang)物(wu)的(de)生(sheng)理(li)環(huan)境(jing)不同時定(ding)義為(wei)其(qi)物(wu)理(li)化(hua)學(xue)環(huan)境(jing)中，更好地理(li)解(jie)血(xue)清(qing)的(de)組(zu)件，所必(bi)需的(de)增(zeng)殖的(de)生(sheng)長因子的(de)鑒(jian)定，並(bing)更好地理(li)解(jie)細(xi)胞在(zai)培(pei)養(yang)的(de)微(wei)環(huan)境(jing)（即(ji)，細(xi)胞 - 細(xi)胞相(xiang)互(hu)作(zuo)用，氣(qi)體的(de)擴(kuo)散(san)，與(yu)基(ji)質相(xiang)互(hu)作(zuo)用）現(xian)在(zai)允許在(zai)無血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)基(ji)中某(mou)些(xie)細(xi)胞系(xi)的(de)培(pei)養(yang)。
小(xiao)鼠(shu)氣(qi)管平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞培(pei)養(yang)物(wu)的(de)主(zhu)要(yao)優(you)點(dian)是操縱物(wu)理(li)化(hua)學(xue)（即(ji)，溫度(du)，pH，滲(shen)透壓，O2和(he)CO2張(zhang)力）和(he)生(sheng)理(li)環(huan)境(jing)（即(ji)，激素(su)和營(ying)養(yang)物(wu)濃(nong)度），其(qi)中所述(shu)細(xi)胞繁(fan)殖的(de)能(neng)力。除(chu)溫度(du)，將(jiang)培(pei)養(yang)環(huan)境(jing)是由(you)生(sheng)長培(pei)養(yang)基(ji)進(jin)行控制。
小(xiao)鼠(shu)氣(qi)管平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞對(dui)於(yu)培(pei)養(yang)，只要(yao)我們細(xi)心操作(zuo)，註(zhu)意(yi)細(xi)節(jie)，並不是大(da)家說的(de)那樣困(kun)難。對(dui)於(yu)有經驗(yan)和(he)有條件(jian)的(de)客(ke)戶(hu)，建(jian)議(yi)由(you)公司(si)代(dai)為培(pei)養(yang)細(xi)胞及(ji)進(jin)行後(hou)續研究(jiu)。

細(xi)胞復(fu)蘇技術：

1. 取(qu)出(chu)細(xi)胞，迅速放入37℃溫水中(zhong)快(kuai)速解(jie)凍(dong)

2. 吸出(chu)細(xi)胞懸(xuan)液,並加10倍以(yi)上培(pei)養(yang)液

3. 1000r/分(fen)鐘離(li)心5分鐘，去(qu)除(chu)上清(qing)

4. 用(yong)培(pei)養(yang)液適(shi)當稀釋後(hou)接(jie)種培(pei)養(yang)瓶(ping),放入37℃ CO2培(pei)養(yang)箱靜置培(pei)養(yang)

5. 鏡(jing)檢(jian)細(xi)胞貼壁能力，次日(ri)更(geng)換壹次培(pei)養(yang)液,繼(ji)續培(pei)養(yang)

培(pei)養(yang)方(fang)法：

收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)，在(zai)倒置顯微(wei)鏡(jing)下觀察整個(ge)細(xi)胞生(sheng)長情(qing)況：

如(ru)果(guo)細(xi)胞未(wei)長滿，用(yong)75%酒(jiu)精噴(pen)灑整個(ge)瓶(ping)消毒後(hou)放到(dao)超菌臺(tai)內，嚴(yan)格(ge)無菌操作(zuo)，打開(kai)細(xi)胞培(pei)養(yang)瓶(ping)，留10ml培(pei)養(yang)液繼(ji)續培(pei)養(yang)。

如(ru)果(guo)細(xi)胞已(yi)長滿（達80-90%）。即(ji)可(ke)進(jin)行傳代(dai)，具(ju)體步(bu)驟如(ru)下(xia)：

a，棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)液，用(yong)PBS洗(xi)1-2次。

b，向(xiang)瓶(ping)內加入1.0-2.0ml酶(mei)液(ye)，在(zai)倒置顯微(wei)鏡(jing)下觀察細(xi)胞消化(hua)情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞大(da)部分變圓(yuan)，迅速拿回操作(zuo)臺，吸取酶(mei)，加含(han)有6ml 含10%血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養(yang)液，輕(qing)輕吹打(da)細(xi)胞。

c，加(jia)入(ru)等(deng)量(liang)的(de)的(de)培(pei)養(yang)液，輕(qing)輕吹打(da)混勻(yun)後(hou)吸出(chu)壹半(ban)，分到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養(yang)

d，傳(chuan)代(dai)比(bi)例(li)：1:2-1:3

保(bao)存和應用(yong)：

客(ke)戶(hu)可(ke)以(yi)根據(ju)自(zi)己的(de)需求(qiu)選(xuan)擇(ze)新(xin)鮮(xian)或(huo)者(zhe)凍存的(de)原(yuan)代(dai)細(xi)胞，如(ru)是新(xin)鮮(xian)原(yuan)代(dai)細(xi)胞，客(ke)戶收到(dao)細(xi)胞後(hou)應立(li)即(ji)將(jiang)其(qi)放入CO2細(xi)胞培(pei)養(yang)箱內靜置後(hou)2-3h，再(zai)進(jin)行後(hou)續的(de)實驗(yan)操作(zuo)。如(ru)是凍(dong)存細(xi)胞，客(ke)戶收到(dao)細(xi)胞後(hou)應立(li)即(ji)將(jiang)其(qi)放入液(ye)氮、-80℃冰(bing)箱(xiang)或(huo)立(li)即(ji)進(jin)行復蘇。

細(xi)胞復(fu)蘇的(de)原(yuan)則(ze)：

在(zai)實際(ji)操作(zuo)中，凍(dong)存細(xi)胞要(yao)進(jin)行復蘇，再(zai)培(pei)養(yang)傳代(dai)。復蘇(su)細(xi)胞壹般采(cai)用快(kuai)速融化(hua)法。以(yi)保(bao)證(zheng)細(xi)胞外結(jie)晶快速融化(hua)，以(yi)避(bi)免慢(man)速融化(hua)水分(fen)滲(shen)入細(xi)胞內，再(zai)次形成胞(bao)內結(jie)晶損(sun)傷(shang)細(xi)胞。

1）該(gai)細(xi)胞只能用於(yu)科(ke)研，不得(de)用(yong)於(yu)臨床。

2）收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)首先觀察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是否完好，培(pei)養(yang)液是否有漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象，若(ruo)有上述(shu)現象發生(sheng)請(qing)及時(shi)和我們聯系。

3）仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說(shuo)明書，了(le)解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信息，如(ru)細(xi)胞形態(tai)、所用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所需細(xi)胞因子等(deng)。

4）用(yong)75%酒(jiu)精擦(ca)拭細(xi)胞瓶(ping)表面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下觀察細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因運輸問(wen)題貼壁細(xi)胞會(hui)有少(shao)量(liang)從(cong)瓶(ping)壁脫(tuo)落，將(jiang)細(xi)胞置於(yu)培(pei)養(yang)箱內靜置培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)，隔(ge)天再(zai)取(qu)出(chu)觀(guan)察(cha)。此(ci)時多數(shu)細(xi)胞均會(hui)貼壁，若(ruo)細(xi)胞仍(reng)不能(neng)貼壁請(qing)用臺(tai)盼藍(lan)染色(se)測(ce)定細(xi)胞活力，如(ru)果(guo)證(zheng)實細(xi)胞活力正常，請(qing)將(jiang)細(xi)胞離(li)心後(hou)用新(xin)鮮(xian)培(pei)養(yang)基(ji)再(zai)次貼壁培(pei)養(yang)；如(ru)果(guo)染(ran)色(se)結(jie)果顯示(shi)細(xi)胞無活力，請(qing)拍下照(zhao)片及時(shi)和我們聯系，信息確(que)認(ren)後(hou)我們為(wei)您(nin)再(zai)免費寄(ji)送(song)壹次。

5）請(qing)客戶(hu)用相(xiang)同條件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)。培(pei)養(yang)瓶(ping)內多余的(de)培(pei)養(yang)基(ji)可(ke)收集(ji)備用(yong)，細(xi)胞傳(chuan)代(dai)時可(ke)以(yi)壹定比(bi)例(li)和(he)客(ke)戶自(zi)備的(de)培(pei)養(yang)基(ji)混合，使細(xi)胞逐(zhu)漸(jian)適(shi)應培(pei)養(yang)條件(jian);建(jian)議(yi)直(zhi)接(jie)購買我司(si)提供(gong)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)。

6）建(jian)議(yi)客(ke)戶收到(dao)細(xi)胞後(hou)qian3天各拍幾張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片，記錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和(he)我司(si)技術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong)交(jiao)流。

細(xi)胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1）復(fu)蘇(su)細(xi)胞：將(jiang)含(han)有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存管在(zai) 37℃水浴(yu)中迅速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄去(qu)上清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所有細(xi)胞懸(xuan)液加入含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液加入10 cm皿中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第二天換液(ye)並(bing)檢查細(xi)胞密(mi)度(du)。

2）細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞密(mi)度(du)達80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上清(qing)，用不含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液(ye)培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使消化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所有細(xi)胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況而(er)定(ding)），然後(hou)在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下觀察細(xi)胞消化(hua)情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞大(da)部分變圓(yuan)並脫(tuo)落，迅速拿回操作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝入(ru)無菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄去(qu)上清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)。

3）細(xi)胞凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞生(sheng)長狀態(tai)良(liang)好時，可(ke)進(jin)行細(xi)胞凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；

a、收(shou)集(ji)細(xi)胞，裝(zhuang)入無菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄去(qu)上清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無血(xue)清(qing)細(xi)胞凍(dong)存液，使細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支凍存管凍(dong)存1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管做好標(biao)識。

c、將(jiang)凍(dong)存管放入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮(dan)灌(guan)儲存。記錄凍(dong)存管位(wei)置以(yi)便(bian)下(xia)次拿取(qu)。

深(shen)圳瑞(rui)清(qing)生(sheng)物(wu)信息科(ke)技有限公司(si)經過(guo)數(shu)年的(de)努(nu)力發展(zhan)已(yi)迅速成為(wei)集(ji)產品(pin)研發、經(jing)營(ying)為壹體的(de)專(zhuan)業(ye)化(hua)生(sheng)物(wu)工(gong)程公司(si)。公司(si)具(ju)有完善的(de)實驗(yan)技(ji)術(shu)開(kai)發平(ping)臺(tai)，成熟的(de)抗(kang)原(yuan)、抗(kang)體(ti)研發系(xi)統，熟練(lian)掌(zhang)握(wo)各種酶(mei)聯技術(shu)，結(jie)合公司(si)的(de)研發團隊(dui)，可(ke)以(yi)有效的(de)保(bao)證(zheng)公司(si)產品(pin)強的(de)穩(wen)定性(xing)和(he)高的(de)準(zhun)確(que)性(xing)，同時又具(ju)有競(jing)爭(zheng)力的(de)價(jia)格(ge)。 公司(si)主(zhu)營(ying)ELISA試(shi)劑盒，目前(qian)可(ke)以(yi)提(ti)供(gong)生(sheng)化(hua)試(shi)劑、分(fen)子生(sheng)物(wu)學試(shi)劑及(ji)試(shi)劑盒，各種抗(kang)體(ti)及免疫(yi)學(xue)試(shi)劑盒、實驗(yan)耗(hao)材(cai)等(deng)多(duo)門(men)類上萬種產品(pin)，產品(pin)涉(she)及(ji)分(fen)子生(sheng)物(wu)學、細(xi)胞生(sheng)物(wu)學、免疫(yi)學(xue)等(deng)生(sheng)命(ming)科(ke)學的(de)各個領(ling)域。