小(xiao)鼠氣(qi)管(guan)上(shang)皮細(xi)胞

小鼠氣(qi)管(guan)上(shang)皮細(xi)胞需要準備好(hao)細(xi)胞所(suo)要(yao)用到的(de)培養基和(he)相(xiang)關(guan)試劑(ji)，雖然所(suo)有(you)的(de)貼壁(bi)，半貼壁(bi)或(huo)者(zhe)懸浮(fu)細(xi)胞處理(li)方式(shi)差(cha)不多，但(dan)是不同的(de)實驗(yan)室(shi)培養條(tiao)件(jian)和處理(li)力度(du)還有(you)試(shi)劑的批(pi)間(jian)差(cha)這(zhe)些(xie)問題(ti)存(cun)在，也(ye)會(hui)導(dao)致(zhi)對(dui)細(xi)胞處理(li)不當(dang)，  或(huo)者(zhe)環境(jing)的(de)不適應(ying)而造成(cheng)細(xi)胞的(de)死(si)亡。
小鼠氣(qi)管(guan)上(shang)皮細(xi)胞培養物(wu)的(de)生(sheng)理(li)環(huan)境不同時定義為其物(wu)理(li)化學(xue)環(huan)境中(zhong)，更好(hao)地(di)理(li)解(jie)血(xue)清的組(zu)件(jian)，所必需的增(zeng)殖的(de)生(sheng)長(chang)因子(zi)的(de)鑒(jian)定，並(bing)更好(hao)地(di)理(li)解(jie)細(xi)胞在(zai)培養的(de)微環境（即，細(xi)胞 - 細(xi)胞相(xiang)互(hu)作(zuo)用，氣(qi)體(ti)的擴(kuo)散(san)，與基質(zhi)相(xiang)互(hu)作(zuo)用）現(xian)在(zai)允(yun)許(xu)在無(wu)血清培養基中(zhong)某(mou)些(xie)細(xi)胞系(xi)的(de)培養。
小鼠氣(qi)管(guan)上(shang)皮細(xi)胞培養物(wu)的(de)主要(yao)優點(dian)是操(cao)縱(zong)物(wu)理(li)化學(xue)（即(ji)，溫度(du)，pH，滲(shen)透(tou)壓，O2和CO2張(zhang)力）和(he)生理環(huan)境(jing)（即(ji)，激素(su)和(he)營養物(wu)濃(nong)度(du)），其中(zhong)所述(shu)細(xi)胞繁(fan)殖(zhi)的(de)能力(li)。除(chu)溫度(du)，將培養環(huan)境是由(you)生長(chang)培養基進行控(kong)制(zhi)。
小鼠氣(qi)管(guan)上(shang)皮細(xi)胞對於(yu)培養，只要我(wo)們(men)細(xi)心(xin)操(cao)作(zuo)，註意細(xi)節(jie)，並(bing)不是大家(jia)說的(de)那(na)樣困(kun)難(nan)。對於(yu)有(you)經(jing)驗(yan)和(he)有(you)條(tiao)件(jian)的客(ke)戶(hu)，建議由(you)公(gong)司代(dai)為培養細(xi)胞及(ji)進行後續研究(jiu)。

細(xi)胞復蘇技(ji)術：

1. 取出(chu)細(xi)胞，迅(xun)速(su)放(fang)入37℃溫(wen)水(shui)中(zhong)快(kuai)速(su)解(jie)凍(dong)

2. 吸出細(xi)胞懸(xuan)液(ye),並(bing)加10倍以上(shang)培養液(ye)

3. 1000r/分(fen)鐘(zhong)離心(xin)5分(fen)鐘(zhong)，去除上(shang)清

4. 用培養液(ye)適(shi)當(dang)稀(xi)釋(shi)後接種(zhong)培養瓶,放(fang)入37℃ CO2培養箱(xiang)靜(jing)置(zhi)培養

5. 鏡檢(jian)細(xi)胞貼壁(bi)能(neng)力，次(ci)日更換壹(yi)次(ci)培養液(ye),繼(ji)續(xu)培養

培養方(fang)法：

收(shou)到細(xi)胞後，在倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察整(zheng)個(ge)細(xi)胞生(sheng)長(chang)情況：

如(ru)果細(xi)胞未長(chang)滿，用75%酒精(jing)噴(pen)灑(sa)整(zheng)個(ge)瓶消毒(du)後放(fang)到超(chao)菌臺(tai)內(nei)，嚴格無(wu)菌操(cao)作(zuo)，打開細(xi)胞培養瓶，留(liu)10ml培養液(ye)繼(ji)續(xu)培養。

如(ru)果細(xi)胞已(yi)長(chang)滿（達(da)80-90%）。即可進行傳(chuan)代(dai)，具體(ti)步(bu)驟(zhou)如(ru)下(xia)：

a，棄去培養液(ye)，用PBS洗1-2次(ci)。

b，向(xiang)瓶內(nei)加入1.0-2.0ml酶(mei)液(ye)，在(zai)倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞消化情(qing)況，若細(xi)胞大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，吸取酶(mei)，加含有(you)6ml 含(han)10%血清的培養液(ye)，輕輕吹打細(xi)胞。

c，加入等(deng)量的的培養液(ye)，輕輕吹打混(hun)勻後吸出壹(yi)半，分(fen)到新的(de)培養

d，傳代(dai)比例：1:2-1:3

保存(cun)和應用：

客(ke)戶(hu)可以根(gen)據(ju)自(zi)己的(de)需求選擇新鮮(xian)或(huo)者(zhe)凍存(cun)的(de)原(yuan)代(dai)細(xi)胞，如(ru)是新鮮(xian)原(yuan)代(dai)細(xi)胞，客(ke)戶(hu)收到細(xi)胞後應立即將(jiang)其放(fang)入CO2細(xi)胞培養箱(xiang)內(nei)靜置(zhi)後2-3h，再進行後續的實驗(yan)操(cao)作(zuo)。如(ru)是凍存(cun)細(xi)胞，客(ke)戶(hu)收到細(xi)胞後應立即將(jiang)其放(fang)入液(ye)氮(dan)、-80℃冰(bing)箱(xiang)或(huo)立即進行復蘇。

細(xi)胞復蘇的(de)原(yuan)則：

在(zai)實際操(cao)作(zuo)中，凍存細(xi)胞要(yao)進行復蘇，再培養傳(chuan)代(dai)。復蘇細(xi)胞壹(yi)般采用快(kuai)速(su)融化法(fa)。以保(bao)證(zheng)細(xi)胞外(wai)結晶(jing)快(kuai)速(su)融化，以避免慢速(su)融化水(shui)分(fen)滲(shen)入細(xi)胞內(nei)，再次(ci)形成(cheng)胞內(nei)結晶(jing)損傷細(xi)胞。

1）該細(xi)胞只能用於(yu)科(ke)研，不得(de)用於(yu)臨床(chuang)。

2）收(shou)到細(xi)胞後首(shou)先觀(guan)察細(xi)胞瓶是否(fou)完(wan)好(hao)，培養液(ye)是否(fou)有(you)漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang)發生(sheng)請(qing)及(ji)時和(he)我(wo)們(men)聯系。

3）仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞說明書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信息(xi)，如(ru)細(xi)胞形(xing)態(tai)、所(suo)用培養基、血(xue)清比例、所需細(xi)胞因(yin)子(zi)等(deng)。

4）用75%酒精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞狀態。因運(yun)輸(shu)問題(ti)貼壁(bi)細(xi)胞會(hui)有(you)少(shao)量從瓶壁(bi)脫落，將(jiang)細(xi)胞置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)內(nei)靜置(zhi)培養過夜(ye)，隔(ge)天(tian)再取出(chu)觀(guan)察。此(ci)時多(duo)數(shu)細(xi)胞均(jun)會(hui)貼壁(bi)，若(ruo)細(xi)胞仍不能貼壁(bi)請(qing)用臺(tai)盼藍染(ran)色(se)測(ce)定細(xi)胞活力(li)，如(ru)果證(zheng)實細(xi)胞活力(li)正常(chang)，請(qing)將(jiang)細(xi)胞離心(xin)後用新鮮(xian)培養基再次(ci)貼壁(bi)培養；如(ru)果染(ran)色(se)結(jie)果顯(xian)示細(xi)胞無(wu)活力(li)，請(qing)拍下(xia)照(zhao)片及時和(he)我(wo)們(men)聯系，信息(xi)確(que)認後我(wo)們(men)為您再免(mian)費寄(ji)送壹(yi)次(ci)。

5）請(qing)客戶(hu)用相(xiang)同(tong)條件(jian)的培養基用於(yu)細(xi)胞培養。培養瓶內(nei)多余的培養基可收(shou)集(ji)備用，細(xi)胞傳(chuan)代(dai)時可以壹(yi)定比例和客戶(hu)自(zi)備的培養基混(hun)合，使(shi)細(xi)胞逐(zhu)漸適應(ying)培養條(tiao)件(jian);建議直接購(gou)買(mai)我(wo)司(si)提(ti)供的(de)培養基。

6）建(jian)議客戶(hu)收到細(xi)胞後qian3天各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞狀態，便於(yu)和我(wo)司(si)技(ji)術部(bu)溝通(tong)交流。

細(xi)胞培養操(cao)作(zuo)

1）復蘇細(xi)胞：將含有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速(su)搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培養基混(hun)合均(jun)勻。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄去上清液(ye)，加1-2 mL培養基後吹勻。然後將所有(you)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入含(han)適量培養基的(de)培養瓶中培養過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿(min)中，加入約(yue)8 mL培養基，培養過夜(ye)）。第(di)二(er)天換液(ye)並(bing)檢查細(xi)胞密(mi)度(du)。

2）細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細(xi)胞密(mi)度(du)達(da)80%-90%，即可進行傳(chuan)代(dai)培養。

a、棄去培養上(shang)清，用不含鈣、鎂離子(zi)的(de)PBS潤洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消化液(ye)培養瓶中，使(shi)消化液(ye)浸潤所有(you)細(xi)胞，將(jiang)培養瓶置(zhi)於(yu)37℃培養箱(xiang)中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情(qing)況而定），然後在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞消化情(qing)況，若細(xi)胞大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫落，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養瓶後加2-3ml培養基終(zhong)止(zhi)消化。輕輕打勻後裝入無(wu)菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養液(ye)後吹勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例分(fen)到新的(de)含(han)8 mL培養基的(de)新皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培養。

3）細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀態良(liang)好(hao)時，可進行細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為例；

a、收集(ji)細(xi)胞，裝(zhuang)入無(wu)菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄去上清液(ye)，用PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進行細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞數(shu)量加入無(wu)血清細(xi)胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每(mei)支凍(dong)存(cun)管凍(dong)存1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍存(cun)管做好(hao)標(biao)識。

c、將凍(dong)存管放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記錄凍存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取。

深(shen)圳瑞清生物(wu)信息(xi)科(ke)技(ji)有(you)限(xian)公(gong)司經(jing)過數(shu)年的(de)努(nu)力(li)發展(zhan)已(yi)迅(xun)速(su)成為集(ji)產品研發、經(jing)營(ying)為壹體(ti)的專(zhuan)業化生(sheng)物(wu)工(gong)程公(gong)司。公(gong)司具(ju)有(you)完(wan)善的實驗(yan)技(ji)術開發平(ping)臺(tai)，成熟(shu)的(de)抗原(yuan)、抗體(ti)研發系(xi)統(tong)，熟(shu)練(lian)掌握各(ge)種(zhong)酶(mei)聯技(ji)術，結合公(gong)司的(de)研發團(tuan)隊(dui)，可以有(you)效(xiao)的保證(zheng)公(gong)司產品強(qiang)的穩定性和(he)高的準確(que)性，同(tong)時又(you)具有(you)競(jing)爭力(li)的價格(ge)。 公(gong)司主營(ying)ELISA試劑(ji)盒(he)，目(mu)前可以提(ti)供生(sheng)化試(shi)劑(ji)、分(fen)子(zi)生(sheng)物(wu)學(xue)試(shi)劑(ji)及(ji)試劑盒(he)，各(ge)種(zhong)抗體(ti)及免(mian)疫(yi)學試(shi)劑(ji)盒(he)、實驗(yan)耗(hao)材等多(duo)門類上萬(wan)種(zhong)產品，產品涉及(ji)分(fen)子(zi)生(sheng)物(wu)學(xue)、細(xi)胞生(sheng)物(wu)學(xue)、免(mian)疫(yi)學(xue)等生命(ming)科(ke)學(xue)的各(ge)個(ge)領域(yu)。