小鼠(shu)肺(fei)微血(xue)管內(nei)皮細(xi)胞

小鼠(shu)肺(fei)微血(xue)管內(nei)皮細(xi)胞需(xu)要準(zhun)備好細(xi)胞(bao)所(suo)要用(yong)到(dao)的(de)培(pei)養基和(he)相關試劑(ji)，雖(sui)然(ran)所(suo)有(you)的(de)貼壁，半貼壁或(huo)者(zhe)懸(xuan)浮細胞處理方式(shi)差(cha)不(bu)多(duo)，但是(shi)不同(tong)的(de)實(shi)驗室培(pei)養條件(jian)和(he)處(chu)理力度(du)還(hai)有(you)試劑(ji)的(de)批間(jian)差(cha)這(zhe)些問(wen)題(ti)存在，也會(hui)導致對(dui)細(xi)胞處理不當(dang)，  或(huo)者(zhe)環境的(de)不(bu)適應而造成(cheng)細胞(bao)的(de)死亡。
小鼠(shu)肺(fei)微血(xue)管內(nei)皮細(xi)胞培(pei)養物(wu)的(de)生(sheng)理環境不同(tong)時定(ding)義為其物(wu)理化學環境中，更(geng)好地(di)理解血(xue)清(qing)的(de)組件(jian)，所(suo)必(bi)需的(de)增(zeng)殖(zhi)的(de)生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)的(de)鑒(jian)定(ding)，並更(geng)好地(di)理解細(xi)胞(bao)在培(pei)養的(de)微(wei)環境（即(ji)，細(xi)胞(bao) - 細胞(bao)相互(hu)作(zuo)用(yong)，氣體的(de)擴散，與基質(zhi)相互作(zuo)用(yong)）現(xian)在允(yun)許(xu)在無血(xue)清(qing)培(pei)養基中(zhong)某(mou)些細胞系(xi)的(de)培(pei)養。
小鼠(shu)肺(fei)微血(xue)管內(nei)皮細(xi)胞培(pei)養物(wu)的(de)主要(yao)優(you)點(dian)是操縱物(wu)理化學（即(ji)，溫度，pH，滲(shen)透壓，O2和CO2張力）和(he)生(sheng)理環境（即(ji)，激(ji)素(su)和營養物(wu)濃(nong)度(du)），其中所(suo)述細胞繁殖的(de)能力。除(chu)溫度，將(jiang)培(pei)養環境是由(you)生(sheng)長(chang)培(pei)養基進行控制(zhi)。
小鼠(shu)肺(fei)微血(xue)管內(nei)皮細(xi)胞對(dui)於(yu)培(pei)養，只要(yao)我們(men)細心(xin)操作(zuo)，註意細節，並不是大家說(shuo)的(de)那樣(yang)困(kun)難(nan)。對(dui)於(yu)有(you)經驗和有(you)條件(jian)的(de)客(ke)戶(hu)，建議(yi)由(you)公(gong)司代為培(pei)養細胞(bao)及進行後續(xu)研(yan)究(jiu)。

細(xi)胞復蘇技(ji)術：

1. 取(qu)出細胞，迅速(su)放(fang)入37℃溫水(shui)中(zhong)快速(su)解(jie)凍

2. 吸(xi)出細(xi)胞懸液,並加(jia)10倍以(yi)上培(pei)養液

3. 1000r/分(fen)鐘(zhong)離(li)心5分(fen)鐘(zhong)，去(qu)除(chu)上清(qing)

4. 用(yong)培(pei)養液適當稀(xi)釋後接種培(pei)養瓶,放(fang)入37℃ CO2培(pei)養箱靜(jing)置(zhi)培(pei)養

5. 鏡(jing)檢細胞貼壁能力，次日(ri)更(geng)換(huan)壹(yi)次培(pei)養液,繼(ji)續(xu)培(pei)養

培(pei)養方法：

收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)，在倒置(zhi)顯微鏡下觀察(cha)整個(ge)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)情(qing)況：

如果(guo)細(xi)胞未長(chang)滿(man)，用(yong)75%酒(jiu)精噴灑整個(ge)瓶(ping)消(xiao)毒後放到(dao)超(chao)菌(jun)臺內(nei)，嚴格無菌(jun)操作(zuo)，打開(kai)細(xi)胞培(pei)養瓶，留(liu)10ml培(pei)養液繼(ji)續(xu)培(pei)養。

如果(guo)細(xi)胞已(yi)長(chang)滿(man)（達80-90%）。即(ji)可(ke)進行傳代，具體步(bu)驟如下：

a，棄去(qu)培(pei)養液，用(yong)PBS洗(xi)1-2次。

b，向瓶(ping)內(nei)加(jia)入1.0-2.0ml酶液，在倒置(zhi)顯微鏡下觀察(cha)細胞(bao)消化情(qing)況，若細(xi)胞大部分變圓(yuan)，迅速拿(na)回操作(zuo)臺，吸(xi)取酶，加(jia)含(han)有(you)6ml 含(han)10%血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養液，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞。

c，加(jia)入等(deng)量的(de)的(de)培(pei)養液，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打混(hun)勻後(hou)吸(xi)出壹(yi)半，分到(dao)新的(de)培(pei)養

d，傳(chuan)代比例(li)：1:2-1:3

小鼠(shu)肺(fei)微血(xue)管內(nei)皮細(xi)胞

保(bao)存和應用(yong)：

客(ke)戶(hu)可以(yi)根據(ju)自(zi)己(ji)的(de)需(xu)求(qiu)選擇新鮮或(huo)者(zhe)凍存的(de)原(yuan)代細胞(bao)，如是(shi)新鮮原代細胞(bao)，客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)應立(li)即(ji)將(jiang)其放入(ru)CO2細(xi)胞培(pei)養箱內(nei)靜置(zhi)後2-3h，再進行後續(xu)的(de)實(shi)驗操作(zuo)。如是(shi)凍存細(xi)胞，客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)應立(li)即(ji)將(jiang)其放入(ru)液氮(dan)、-80℃冰(bing)箱或(huo)立(li)即(ji)進行復蘇。

細(xi)胞復蘇的(de)原(yuan)則(ze)：

在實(shi)際(ji)操作(zuo)中，凍存細(xi)胞要進行復蘇，再(zai)培(pei)養傳代。復蘇細(xi)胞壹(yi)般(ban)采(cai)用(yong)快速(su)融(rong)化法。以(yi)保證細胞(bao)外結晶(jing)快速(su)融(rong)化，以(yi)避免慢(man)速融(rong)化水(shui)分(fen)滲(shen)入(ru)細(xi)胞內(nei)，再次形成胞內(nei)結晶(jing)損傷細(xi)胞。

1）該細(xi)胞只(zhi)能用(yong)於(yu)科研(yan)，不得用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)。

2）收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首先觀察(cha)細胞(bao)瓶是否(fou)完好，培(pei)養液是(shi)否(fou)有漏(lou)液、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若有(you)上述現(xian)象(xiang)發生(sheng)請及時和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)。

3）仔(zai)細閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了解細(xi)胞(bao)相關(guan)信(xin)息(xi)，如細(xi)胞(bao)形態、所用(yong)培(pei)養基、血(xue)清(qing)比例(li)、所(suo)需細胞因(yin)子(zi)等(deng)。

4）用(yong)75%酒(jiu)精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面，顯微(wei)鏡下觀察(cha)細胞(bao)狀態。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)貼壁細(xi)胞會(hui)有少(shao)量從(cong)瓶壁脫(tuo)落，將(jiang)細胞置(zhi)於(yu)培(pei)養箱內(nei)靜置(zhi)培(pei)養過夜(ye)，隔天再(zai)取出(chu)觀察(cha)。此時多(duo)數(shu)細胞均(jun)會(hui)貼壁，若(ruo)細胞(bao)仍不能貼壁請用(yong)臺盼藍染色測(ce)定(ding)細(xi)胞(bao)活(huo)力，如果(guo)證實(shi)細胞(bao)活(huo)力正(zheng)常(chang)，請將(jiang)細胞離(li)心後(hou)用(yong)新鮮培(pei)養基再(zai)次貼壁培(pei)養；如果(guo)染色結果(guo)顯(xian)示細(xi)胞(bao)無(wu)活(huo)力，請拍下照(zhao)片(pian)及時和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)，信(xin)息(xi)確(que)認後(hou)我們(men)為您(nin)再(zai)免費(fei)寄(ji)送(song)壹(yi)次。

5）請客戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養基用(yong)於(yu)細(xi)胞培(pei)養。培(pei)養瓶內(nei)多余(yu)的(de)培(pei)養基可(ke)收集備用(yong)，細(xi)胞傳代時可(ke)以(yi)壹(yi)定(ding)比(bi)例(li)和(he)客戶(hu)自(zi)備的(de)培(pei)養基混(hun)合，使(shi)細(xi)胞逐(zhu)漸(jian)適應培(pei)養條件(jian);建(jian)議(yi)直接購(gou)買(mai)我司提供(gong)的(de)培(pei)養基。

6）建(jian)議(yi)客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)qian3天各(ge)拍幾張細胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態，便於(yu)和(he)我司技術部溝通交流(liu)。

細(xi)胞培(pei)養操作(zuo)

1）復蘇細(xi)胞：將(jiang)含(han)有(you)1 mL細胞懸(xuan)液的(de)凍存管在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養基混(hun)合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下離(li)心3 min，棄去(qu)上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後將(jiang)所有細胞懸液加(jia)入含(han)適量培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞懸液加(jia)入10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過夜(ye)）。第(di)二(er)天換(huan)液並檢查細胞(bao)密(mi)度(du)。

2）細(xi)胞傳代：如果(guo)細(xi)胞密(mi)度(du)達80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳代培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上清(qing)，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液培(pei)養瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液浸(jin)潤(run)所有(you)細胞，將(jiang)培(pei)養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消化1-2 min（視細胞情(qing)況而定），然(ran)後在顯微(wei)鏡下觀察(cha)細胞(bao)消化情(qing)況，若細(xi)胞大部分變圓(yuan)並脫落，迅速拿(na)回操作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾下培(pei)養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。輕輕打勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄去(qu)上清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞懸液按(an)1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含(han)8 mL培(pei)養基的(de)新皿中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養。

3）細(xi)胞凍存：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良好時，可(ke)進行細胞(bao)凍存。下面 T25 瓶為例(li)；

a、收集細胞，裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心管中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心4 min，棄去(qu)上清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進行細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細胞數(shu)量加(jia)入無(wu)血(xue)清(qing)細胞凍存液，使(shi)細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存管凍存1mL細(xi)胞懸液，註意凍存管做好標(biao)識(shi)。

c、將(jiang)凍存管放入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入液氮(dan)灌(guan)儲存。記錄(lu)凍存管位(wei)置(zhi)以(yi)便下次拿(na)取。

深(shen)圳瑞清(qing)生(sheng)物(wu)信(xin)息(xi)科技有(you)限公(gong)司經過數(shu)年的(de)努(nu)力發(fa)展(zhan)已(yi)迅(xun)速(su)成(cheng)為集產品(pin)研(yan)發、經營為壹(yi)體(ti)的(de)專業化生(sheng)物(wu)工(gong)程公(gong)司。公(gong)司具有完善(shan)的(de)實(shi)驗技術(shu)開(kai)發(fa)平(ping)臺，成熟的(de)抗(kang)原(yuan)、抗(kang)體(ti)研(yan)發系(xi)統，熟練掌握(wo)各(ge)種酶聯(lian)技術(shu)，結合公(gong)司的(de)研(yan)發團(tuan)隊，可以(yi)有效的(de)保(bao)證公(gong)司產品(pin)強的(de)穩定性(xing)和高(gao)的(de)準(zhun)確(que)性(xing)，同(tong)時又(you)具有競(jing)爭力的(de)價(jia)格。 公(gong)司主營ELISA試劑(ji)盒(he)，目(mu)前(qian)可以(yi)提供(gong)生(sheng)化試劑(ji)、分(fen)子(zi)生(sheng)物(wu)學試劑(ji)及試劑(ji)盒(he)，各(ge)種抗(kang)體(ti)及免疫(yi)學試劑(ji)盒(he)、實(shi)驗耗(hao)材(cai)等(deng)多門類(lei)上萬種產(chan)品(pin)，產(chan)品(pin)涉(she)及分子(zi)生(sheng)物(wu)學、細(xi)胞生(sheng)物(wu)學、免疫(yi)學等(deng)生(sheng)命科學的(de)各(ge)個(ge)領(ling)域(yu)。