人胱(guang)天(tian)蛋(dan)白(bai)酶12(Casp-12)ELISA試劑(ji)盒(he)

檢測(ce)原(yuan)理(li)

試劑(ji)盒(he)采用雙(shuang)抗(kang)原(yuan)壹-步(bu)夾心法(fa)酶聯(lian)免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)試(shi)驗(yan)(ELISA) 。往(wang)預先包被病毒(du)性(xing)腹瀉病(bing)毒(du)抗(kang)ti的(de)包被微(wei)孔(kong)中(zhong)，依次加(jia)入(ru)標(biao)本、HRP標(biao)記的(de)檢測(ce)抗(kang)原(yuan)，經(jing)過溫(wen)育並徹(che)di洗滌。用底物(wu)TMB顯(xian)色(se)，TMB在(zai)過(guo)氧(yang)化物(wu)酶的催化下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)藍(lan)色(se)，並在suan的(de)作(zuo)用下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)最(zui)終(zhong)的(de)黃色(se)。用酶標(biao)儀在(zai)450NM波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)定吸(xi)光度(OD值(zhi)) ，與CUTOFF值(zhi)相比(bi)較(jiao)，從(cong)而(er)判定(ding)標(biao)本中(zhong)豬(zhu)病(bing)毒(du)性(xing)腹瀉病(bing)毒(du)(BVDV) 的(de)存(cun)在與否(fou)。

樣品(pin)收集(ji)、處理(li)及保存(cun)方(fang)法

1.血清:使(shi)用不(bu)含熱原(yuan)和內毒(du)素(su)的(de)試(shi)管，操(cao)作(zuo)過(guo)程中(zhong)避免(mian)任(ren)何(he)細胞刺(ci)激，收(shou)集(ji)血液後，3000轉(zhuan)離(li)心10分(fen)鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清(qing)和紅細胞迅(xun)速小心地(di)分(fen)離(li)。

2.血漿(jiang): EDTA、檸(ning)檬suan鹽(yan)或(huo)肝(gan)素(su)抗(kang)凝。3000轉(zhuan)離(li)心30分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清。

3.細胞上(shang)清液: 3000轉(zhuan)離(li)心10分(fen)鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒(li)和聚(ju)合物(wu)。

4.組織勻(yun)漿(jiang):將(jiang)組織加(jia)入(ru)適量生理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。3000轉(zhuan) 離(li)心10分(fen)鐘(zhong)取上(shang)清。

5.保存(cun):如(ru)果(guo)樣本收(shou)集(ji)後不及時檢測(ce)，請按壹次用量分(fen)裝(zhuang)，凍存(cun)於-20°C， 避(bi)免(mian)反(fan)

復凍融(rong)，在(zai)室(shi)溫下(xia)解(jie)凍並確(que)保(bao)樣品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍。

自(zi)備(bei)物(wu)品(pin)

1.酶標(biao)儀(450NM)

2.高(gao)精度加(jia)樣器(qi)及槍頭(tou): 0.5-10UL、 2-20UL、 20-200UL、 200-1000UL

3.37℃恒(heng)溫(wen)箱(xiang)

操(cao)作(zuo)註意(yi)事(shi)項(xiang)

1.試劑(ji)盒(he)保存(cun)在2-8°C，使用前室(shi)溫平衡20分(fen)鐘(zhong)。從(cong)冰(bing)箱(xiang)取出的濃縮(suo)洗滌液(ye)會有結(jie)晶(jing)，這(zhe)屬(shu)於正(zheng)常現象，水(shui)浴加(jia)熱(re)使結(jie)晶(jing)完(wan)quan溶(rong)解(jie)後再(zai)使用。

2.實(shi)驗(yan)中(zhong)不用的(de)板條應(ying)立(li)即(ji)放(fang)回自(zi)封(feng)袋(dai)中(zhong)，密封(feng)(低(di)溫幹燥)保(bao)存(cun)。

3.預(yu)處理(li)後(hou)的樣本請(qing)按照(zhao)操(cao)作(zuo)步(bu)驟用樣ben稀(xi)釋(shi)ye適當(dang)稀(xi)釋(shi)以達(da)到(dao)試(shi)劑(ji)盒(he)的的最jia檢測(ce)效果(guo)。.

4.嚴格按照(zhao)說(shuo)明(ming)書中(zhong)標(biao)明(ming)的(de)時間、加(jia)液(ye)量及順(shun)序進行(xing)溫育操(cao)作(zuo)。

5.所有液(ye)體(ti)組分(fen)使(shi)用前充(chong)分(fen)搖(yao)勻(yun)。

人胱(guang)天(tian)蛋(dan)白(bai)酶12(Casp-12)ELISA試劑(ji)盒(he)

常用方(fang)法：

1. 夾(jia)心法(fa)：

夾(jia)心法(fa)常用於檢測(ce)大分(fen)子抗(kang)原(yuan)，壹(yi)般的(de)操(cao)作(zuo)步(bu)驟為:

a. 將具(ju)有專壹(yi)性(xing)的(de)抗(kang)ti固(gu)著(zhu)（coating）於塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)，完成(cheng)後(hou)洗去多(duo)余抗(kang)ti

b. 加(jia)入(ru)待測(ce)檢體(ti)，檢體(ti)中(zhong)若含有待(dai)測(ce)的抗(kang)原(yuan)，則其(qi)會與塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)的抗(kang)ti進行(xing)專壹(yi)性(xing)鍵(jian)結(jie)

c. 洗去多(duo)余待(dai)測(ce)檢體(ti)，加(jia)入(ru)另壹種對(dui)抗(kang)原(yuan)專壹(yi)的(de)壹(yi)次(ci)抗(kang)ti，與待測(ce)抗(kang)原(yuan)進行(xing)鍵(jian)結(jie)

d. 洗去多(duo)余未鍵(jian)結(jie)壹次(ci)抗(kang)ti，加(jia)入(ru)帶(dai)有酶的二次抗(kang)ti，與壹次(ci)抗(kang)ti鍵(jian)結(jie)

e. 洗去多(duo)余未鍵(jian)結(jie)二次抗(kang)ti，加(jia)入(ru)酶底物(wu)使酵素(su)呈色(se)，以肉眼(yan)或儀(yi)器讀(du)取呈色(se)結(jie)果(guo)

原(yuan)理(li)：針(zhen)對(dui)抗(kang)原(yuan)分(fen)子上(shang)2個(ge)不(bu)同(tong)抗(kang)原(yuan)決定簇的單克隆(long)抗(kang)ti分(fen)別作(zuo)為固(gu)相抗(kang)ti和酶標(biao)抗(kang)ti，將大分(fen)子抗(kang)原(yuan)分(fen)別制備(bei)固(gu)相抗(kang)原(yuan)和酶標(biao)抗(kang)原(yuan)結(jie)合物(wu)。

2. 間接(jie)法

間接(jie)法常用於檢測(ce)抗(kang)ti，壹般的(de)操(cao)作(zuo)步(bu)驟為：

a. 將已(yi)知的抗(kang)原(yuan)固(gu)著(zhu)於塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)，完成(cheng)後(hou)洗去多(duo)余的(de)抗(kang)原(yuan)。

b. 加(jia)入(ru)待測(ce)檢體(ti)，檢體(ti)中(zhong)若含有待(dai)測(ce)的壹(yi)次抗(kang)ti，則其會與塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)的抗(kang)原(yuan)進行(xing)專壹(yi)性(xing)鍵(jian)結(jie)。

c. 洗去多(duo)余待(dai)測(ce)檢體(ti)，加(jia)入(ru)帶(dai)有酶的二次抗(kang)ti，與待測(ce)的壹(yi)次抗(kang)ti鍵(jian)結(jie)。

d. 洗去多(duo)余未鍵(jian)結(jie)二次抗(kang)ti，加(jia)入(ru)酶底物(wu)使酶呈色(se)，藉(ji)儀(yi)器（ELISA reader）測(ce)定塑(su)膠(jiao)盤中(zhong)的吸(xi)光(guang)值(zhi)（OD值(zhi)），以評(ping)估(gu)有色(se)終(zhong)產(chan)物(wu)的含(han)量即(ji)可(ke)測(ce)量待(dai)測(ce)抗(kang)ti的含量。

原(yuan)理(li)：利用酶標(biao)記的(de)抗(kang)抗(kang)ti以檢測(ce)已與(yu)固(gu)相結(jie)合的受(shou)檢抗(kang)ti。

3. 競爭(zheng)法

競(jing)爭(zheng)法是壹(yi)種(zhong)較(jiao)少用到(dao)的(de)ELISA檢測(ce)機制(zhi)，壹般用於檢測(ce)小分(fen)子抗(kang)原(yuan)，其操(cao)作(zuo)步(bu)驟為：

a. 將具(ju)有專壹(yi)性(xing)的(de)抗(kang)ti固(gu)著(zhu)於塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)，完成(cheng)後(hou)洗去多(duo)余抗(kang)ti

b. 加(jia)入(ru)待測(ce)檢體(ti)，使檢體(ti)中(zhong)的待(dai)測(ce)抗(kang)原(yuan)與塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)的抗(kang)ti進行(xing)專壹(yi)性(xing)鍵(jian)結(jie)

c. 加(jia)入(ru)帶(dai)有酶的抗(kang)原(yuan)，此(ci)抗(kang)原(yuan)也(ye)可(ke)與(yu)塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)的抗(kang)ti進行(xing)專壹(yi)性(xing)鍵(jian)結(jie)，由於塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)固(gu)著(zhu)的(de)抗(kang)ti數量有限(xian)，因(yin)此(ci)當檢體(ti)中(zhong)抗(kang)原(yuan)的量越(yue)多(duo)，則帶(dai)有酶的抗(kang)原(yuan)可(ke)鍵(jian)結(jie)的固(gu)著(zhu)抗(kang)ti就越(yue)少(shao)，亦即(ji)，兩種抗(kang)原(yuan)皆(jie)競相與(yu)塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)抗(kang)ti鍵(jian)結(jie)，即所(suo)謂競(jing)爭(zheng)法之由來(lai)。

d. 洗去檢體(ti)與帶(dai)有酶的抗(kang)原(yuan)，加(jia)入(ru)酶底物(wu)使酶呈色(se)，當檢體(ti)中(zhong)抗(kang)原(yuan)量越(yue)多(duo)，代(dai)表塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤內(nei)留下(xia)之帶(dai)有酶的抗(kang)原(yuan)越(yue)少(shao)，顯色(se)也(ye)就越(yue)淺(qian)。

e. 當需(xu)要偵測(ce)無法(fa)獲得兩種(zhong)以上(shang)單壹性(xing)抗(kang)ti的抗(kang)原(yuan)，或是(shi)不(bu)易得到(dao)足(zu)夠(gou)的(de)純化抗(kang)ti以固(gu)著(zhu)於孔(kong)盤上(shang)時，壹(yi)般會考(kao)慮使用競(jing)爭(zheng)法ELISA。

標(biao)本要(yao)求 :

1．不(bu)能檢測(ce)含NaN3的(de)樣品(pin)，因(yin)NaN3辣(la)根過氧(yang)化物(wu)酶的（HRP）活(huo)性(xing)。

2．標(biao)本采(cai)集(ji)後盡(jin)早進行(xing)提取，提取按相關文獻進行(xing)，提取後應(ying)盡(jin)快進行(xing)實驗(yan)。若不能馬上(shang)進行(xing)試驗(yan)，可(ke)將(jiang)標(biao)本放(fang)於-20℃保(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍融(rong)。

3.各步(bu)加(jia)樣均(jun)應(ying)使(shi)用加(jia)樣器(qi)，並(bing)經(jing)常校對(dui)其準確(que)性(xing)，以(yi)避(bi)免(mian)試(shi)驗(yan)誤(wu)差。壹次加(jia)樣時間控

制在5分(fen)鐘(zhong)內(nei)，如(ru)標(biao)本數(shu)量多(duo)，推薦使用排(pai)槍加(jia)樣。

4.請每次(ci)測(ce)定的(de)同(tong)時做標(biao)準曲線，做復孔。如(ru)標(biao)本中(zhong)待測(ce)物(wu)質(zhi)含(han)量過(guo)高(gao)(樣本OD值(zhi)大於

標(biao)準品(pin)孔孔(kong)的(de)OD值(zhi))，請先用樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液稀(xi)釋(shi)壹定(ding)倍數(n倍) 後再測(ce)定，計(ji)算時請(qing)

後乘(cheng)以總稀(xi)釋(shi)倍數(xnx5)

5.封(feng)板膜只限壹次(ci)性(xing)使(shi)用，以(yi)避免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。

6.底物(wu)請避(bi)光(guang)保存(cun)。

7.嚴格按照(zhao)說(shuo)明(ming)書的操(cao)作(zuo)進行(xing)，試驗(yan)結(jie)果(guo)判(pan)定必須以(yi)酶標(biao)儀讀(du)數為準.

8.所有樣品(pin)，洗滌液(ye)和各種(zhong)廢(fei)棄(qi)物(wu)都(dou)應(ying)按傳染(ran)物(wu)處理(li)。

9.本試(shi)劑(ji)不(bu)同(tong)批號組分(fen)不(bu)得混(hun)用。

訂(ding)購說(shuo)明(ming):

※關於產(chan)品(pin)售價,由於市(shi)場(chang)的(de)不(bu)穩(wen)定(ding)性(xing),價格變(bian)動是必然的,但(dan)是(shi)我們可(ke)以(yi)提供當下(xia)公(gong)允(yun)的市(shi)場(chang)價格,批量訂(ding)購還可(ke)享受相應(ying)的(de)優(you)惠活(huo)動;

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