人γ谷氨酰轉(zhuan)移酶(GGT)ELISA試劑盒(he)

人γ谷氨酰轉(zhuan)移酶(GGT)ELISA試劑盒(he)

ELISA法(fa)是(shi)免(mian)疫(yi)診斷(duan)中的壹(yi)項新技(ji)術(shu)，現已成功(gong)地應(ying)用(yong)於(yu)多(duo)種(zhong)病原微(wei)生(sheng)物(wu)所引(yin)起的傳(chuan)染(ran)病、寄生(sheng)蟲(chong)病及(ji)非(fei)傳(chuan)染(ran)病等方(fang)面的免(mian)疫(yi)診斷(duan)。也(ye)已應用(yong)於(yu)大分(fen)子(zi)抗原和小(xiao)分(fen)子(zi)抗原的定量(liang)測定(ding)，根據(ju)已經使用(yong)的結果，認(ren)為ELISA法具有靈(ling)敏、特異、簡單、快(kuai)速、穩(wen)定(ding)及(ji)易(yi)於(yu)自(zi)動(dong)化(hua)操作(zuo)等特點(dian)。不(bu)僅(jin)適用於(yu)臨(lin)床(chuang)標本的檢查(zha)，而(er)且(qie)由(you)於(yu)壹(yi)天之內(nei)可以(yi)檢查(zha)幾百(bai)甚(shen)至上(shang)千份(fen)標本,因此，也(ye)適(shi)合(he)於(yu)血清流(liu)行病學(xue)調查(zha)。本法不(bu)僅(jin)可以(yi)用來測定(ding)抗ti，而(er)且(qie)也(ye)可用(yong)於(yu)測定體(ti)液中的循(xun)環抗原，所以(yi)也(ye)是(shi)壹(yi)種(zhong)早(zao)期診斷(duan)的良(liang)好方(fang)法。因(yin)此ELISA法在(zai)生(sheng)物(wu)醫(yi)學(xue)各領域(yu)的應用範圍(wei)日益擴大。

免(mian)責(ze)聲(sheng)明

1. 試劑盒(he)僅(jin)供研究(jiu)使用(yong)，不得用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)實(shi)驗(yan)或(huo)人體(ti)實(shi)驗(yan)，否則所產生(sheng)的壹(yi)切(qie)後(hou)果，由(you)實(shi)驗(yan)者承(cheng)擔，本公司概不負責(ze)。

2. 嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)說明書(shu)操(cao)作(zuo)，實(shi)驗(yan)者違反說(shuo)明書(shu)操(cao)作(zuo)，後(hou)果由(you)實(shi)驗(yan)者承(cheng)擔。

3. 產(chan)品(pin)特點(dian)

壹(yi)、高(gao)效、靈(ling)敏、特異的抗ti；

二、穩(wen)定的重復性和(he)可靠(kao)性；

三(san)、吸(xi)附性能(neng)好，空白值低(di)，孔(kong)底透明度(du)高(gao)的固(gu)相載體(ti)；

四(si)、適用(yong)血清、血漿(jiang)、組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)液、細胞培養(yang)上(shang)清(qing)液、尿液等等多(duo)種(zhong)標本類型；

五、節(jie)省(sheng)實(shi)驗(yan)經費。

elisa試劑盒(he)回收(shou)率(lv)是(shi)反(fan)應待(dai)測(ce)物在(zai)樣品(pin)分(fen)析(xi)過程中的損失(shi)的程度，損失(shi)越(yue)少(shao)，回收(shou)率(lv)越(yue)高(gao)，如(ru)果作(zuo)標液1PPM，就(jiu)是(shi)1毫(hao)克(ke)/升，而(er)作(zuo)出(chu)標準(zhun)數(shu)據為0.99毫(hao)克(ke)/升，就(jiu)是(shi)說(shuo)妳的回收(shou)率(lv)是(shi)99%，這(zhe)個與(yu)真實(shi)成分(fen)有(you)密切(qie)的關系(xi)，說(shuo)明方(fang)法的準確度。比如水(shui)中總無機(ji)氯含(han)量(liang)測定(ding)，樣品(pin)水(shui)中含(han)有無機(ji)氯20mg/L，取100mL被測(ce)水(shui)樣(yang)品，加入0.1mL濃(nong)度(du)為10mg/mL的含(han)無機(ji)氯標準(zhun)樣(yang)品，測(ce)定時(shi)忽(hu)略(lve)體(ti)積(ji)變化(hua)，如果測(ce)定(ding)出(chu)樣(yang)品中無機(ji)氯為29.8mg/L，則認(ren)為回收(shou)率(lv)為99%。

人γ谷氨酰轉(zhuan)移酶(GGT)ELISA試劑盒(he)

實(shi)驗(yan)過程:

1.試劑準(zhun)備(bei):所有試劑都(dou)必須(xu)在使用(yong)前達到室溫(wen),使用(yong)後(hou)請(qing)立(li)即(ji)按(an)照(zhao)說明書(shu)要求(qiu)保存(cun)試劑。實(shi)驗(yan)操作(zuo)中請(qing) 使用(yong)壹(yi)次性的吸(xi)頭,避免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。

2.加(jia)樣(yang):加(jia)樣(yang)或(huo)加(jia)試劑時(shi)，請(qing)註(zhu)意(yi)在(zai)吸(xi)取標本/標準(zhun)品(pin)，酶結(jie)合(he)物(wu)或(huo)底(di)物時(shi)，第(di)yi個孔與最(zui)hou-壹(yi)個孔加(jia)樣(yang)之間(jian)的時(shi)間(jian)間(jian)隔(ge)如(ru)果太(tai)大(da)，將(jiang)會導致不同(tong)的“預孵(fu)育“時(shi)間(jian),從(cong)而(er)明顯(xian)地影(ying)響(xiang)到測量(liang)值的準確性及(ji)重復性。壹(yi)次加樣(yang)時(shi)間(jian)(包(bao)括(kuo)標準(zhun)品(pin)及(ji)所有樣品(pin)) 將(jiang)控制在10分(fen)鐘內(nei),如標本數(shu)量(liang)多(duo),推薦使用(yong)多(duo)道(dao)移液器(qi)加樣(yang)。

3.孵(fu)育:為防止樣(yang)品(pin)蒸(zheng)發,試驗(yan)時(shi)將(jiang)反應板放於(yu)鋪有(you)濕布(bu)的密閉盒內(nei)，酶標板(ban)加(jia)上(shang)蓋(gai)或(huo)覆(fu)膜(mo)，以(yi)避免(mian)液體(ti)蒸(zheng)發;洗板後(hou)應盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)下(xia)步(bu)操作(zuo),任(ren)何時(shi)侯(hou)都(dou)應避(bi)免(mian)酶(mei)標板(ban)處(chu)於(yu)幹(gan)燥(zao)狀態(tai):同(tong)時(shi)應(ying)嚴格(ge)遵(zun)守(shou)給定的孵(fu)育時(shi)間(jian)和(he)溫(wen)度。

4.洗滌:洗滌過程中反(fan)應(ying)孔中殘(can)留(liu)的洗滌液應在濾紙(zhi)上(shang)充(chong)分(fen)拍(pai)幹(gan)，勿(wu)將(jiang)濾紙(zhi)直接(jie)放入反(fan)應孔(kong)中吸(xi)水(shui)，同(tong)時(shi)要消除板(ban)底(di)殘留(liu)的液體(ti)和(he)手指印，避(bi)免(mian)影(ying)響(xiang)最(zui)hou的酶標儀(yi)讀數(shu)。

常見問(wen)題(ti)解(jie)析(xi)：

1、試劑的選(xuan)擇(ze)：選(xuan)擇(ze)優(you)良(liang)試劑大(da)家都(dou)是(shi)知(zhi)道(dao)的，但是(shi)在(zai)檢測(ce)之前還(hai)應該(gai)提前半個小(xiao)時(shi)將(jiang)試劑拿(na)到常溫(wen)下進(jin)行(xing)解(jie)凍。

2、加(jia)樣(yang)中可能(neng)遇(yu)到的問(wen)題(ti)。

3、洗板時(shi)容(rong)易(yi)造(zao)成(cheng)誤差。

4、顯(xian)色問(wen)題(ti)：使用(yong)了過期的顯(xian)色劑或(huo)者(zhe)是(shi)顯(xian)色劑用(yong)過後(hou)放置時(shi)間(jian)太(tai)長，都(dou)有可能(neng)造成(cheng)顯(xian)色劑不(bu)顯(xian)色。

5、終止反(fan)應(ying)：在加(jia)終止劑(ji)的時(shi)候(hou)由(you)於(yu)傾倒(dao)速度(du)快(kuai)，產生(sheng)氣(qi)泡，造成(cheng)假陽(yang)性結(jie)果，所以(yi)在倒(dao)終止劑(ji)的時(shi)候(hou)要緩慢倒(dao)。

6、讀板：讀板的時(shi)候(hou)首先(xian)應該(gai)保證(zheng)板(ban)的清潔幹(gan)凈(jing)。

常用(yong)方(fang)法及(ji)原理如下：

1. 夾心(xin)法：

夾心(xin)法常用(yong)於(yu)檢測大(da)分(fen)子(zi)抗原，壹(yi)般的操作(zuo)步(bu)驟為:

a. 將(jiang)具有專(zhuan)壹(yi)性的抗ti固(gu)著(zhu)（coating）於(yu)塑(su)膠(jiao)孔盤上(shang)，完(wan)成(cheng)後(hou)洗去(qu)多(duo)余抗ti

b. 加入待測(ce)檢(jian)體(ti)，檢(jian)體(ti)中若含(han)有待(dai)測的抗原，則其(qi)會與(yu)塑(su)膠(jiao)孔盤上(shang)的抗ti進(jin)行(xing)專(zhuan)壹(yi)性鍵(jian)結(jie)

c. 洗去(qu)多(duo)余待測檢(jian)體(ti)，加(jia)入另壹(yi)種(zhong)對抗原專(zhuan)壹(yi)的壹(yi)次抗ti，與待測抗原進(jin)行(xing)鍵(jian)結(jie)

d. 洗去(qu)多(duo)余未(wei)鍵(jian)結(jie)壹(yi)次抗ti，加入帶有(you)酶(mei)的二次抗ti，與壹(yi)次抗ti鍵(jian)結(jie)

e. 洗去(qu)多(duo)余未(wei)鍵(jian)結(jie)二次抗ti，加入酶底(di)物(wu)使酵(jiao)素呈色，以(yi)肉(rou)眼或(huo)儀(yi)器(qi)讀取呈色結果

原理：針(zhen)對抗原分(fen)子(zi)上(shang)2個(ge)不(bu)同(tong)抗原決(jue)定(ding)簇的單克(ke)隆(long)抗ti分(fen)別作(zuo)為固(gu)相抗ti和酶標抗ti，將(jiang)大分(fen)子(zi)抗原分(fen)別制備固(gu)相抗原和酶標抗原結合(he)物(wu)。

2. 間(jian)接(jie)法

間(jian)接(jie)法常用(yong)於(yu)檢測抗ti，壹(yi)般的操作(zuo)步(bu)驟為：

a. 將(jiang)已知的抗原固(gu)著(zhu)於(yu)塑(su)膠(jiao)孔盤上(shang)，完(wan)成(cheng)後(hou)洗去(qu)多(duo)余的抗原。

b. 加入待測檢(jian)體(ti)，檢(jian)體(ti)中若含(han)有待(dai)測的壹(yi)次抗ti，則其(qi)會與(yu)塑(su)膠(jiao)孔盤上(shang)的抗原進(jin)行(xing)專(zhuan)壹(yi)性鍵(jian)結(jie)。

c. 洗去(qu)多(duo)余待測檢(jian)體(ti)，加(jia)入帶(dai)有酶的二次抗ti，與待測的壹(yi)次抗ti鍵(jian)結(jie)。

d. 洗去(qu)多(duo)余未(wei)鍵(jian)結(jie)二次抗ti，加入酶底(di)物(wu)使酶(mei)呈色，藉儀(yi)器(qi)（ELISA reader）測定(ding)塑(su)膠(jiao)盤中的吸(xi)光值（OD值(zhi)），以(yi)評估(gu)有色終產物的含(han)量(liang)即可測(ce)量(liang)待測(ce)抗ti的含(han)量(liang)。

原理：利用酶(mei)標記的抗抗ti以(yi)檢測(ce)已與固(gu)相結合(he)的受檢抗ti。

3. 競爭(zheng)法(fa)

競爭(zheng)法(fa)是(shi)壹(yi)種(zhong)較(jiao)少(shao)用(yong)到的ELISA檢測機(ji)制，壹(yi)般用於(yu)檢測小(xiao)分(fen)子(zi)抗原，其(qi)操作(zuo)步(bu)驟為：

a. 將(jiang)具有專(zhuan)壹(yi)性的抗ti固(gu)著(zhu)於(yu)塑(su)膠(jiao)孔盤上(shang)，完(wan)成(cheng)後(hou)洗去(qu)多(duo)余抗ti

b. 加入待測(ce)檢(jian)體(ti)，使檢(jian)體(ti)中的待測抗原與塑(su)膠(jiao)孔盤上(shang)的抗ti進(jin)行(xing)專(zhuan)壹(yi)性鍵(jian)結(jie)

c. 加入(ru)帶(dai)有酶的抗原，此抗原也(ye)可與(yu)塑(su)膠(jiao)孔盤上(shang)的抗ti進(jin)行(xing)專(zhuan)壹(yi)性鍵(jian)結(jie)，由(you)於(yu)塑(su)膠(jiao)孔盤上(shang)固(gu)著(zhu)的抗ti數(shu)量(liang)有限，因此當檢(jian)體(ti)中抗原的量(liang)越(yue)多(duo)，則帶有(you)酶的抗原可鍵(jian)結(jie)的固(gu)著(zhu)抗ti就(jiu)越(yue)少(shao)，亦(yi)即，兩(liang)種(zhong)抗原皆競相(xiang)與(yu)塑(su)膠(jiao)孔盤上(shang)抗ti鍵(jian)結(jie)，即所謂(wei)競爭(zheng)法(fa)之由(you)來。

d. 洗去(qu)檢(jian)體(ti)與(yu)帶有(you)酶的抗原，加入酶底物(wu)使酶(mei)呈色，當檢(jian)體(ti)中抗原量(liang)越(yue)多(duo)，代表塑(su)膠(jiao)孔盤內(nei)留(liu)下之帶有酶(mei)的抗原越(yue)少(shao)，顯(xian)色也(ye)就(jiu)越(yue)淺。

e. 當需(xu)要偵測(ce)無法(fa)獲得兩(liang)種(zhong)以(yi)上(shang)單(dan)壹(yi)性抗ti的抗原，或(huo)是(shi)不(bu)易(yi)得(de)到足夠(gou)的純化(hua)抗ti以(yi)固(gu)著(zhu)於(yu)孔盤上(shang)時(shi)，壹(yi)般會考(kao)慮(lv)使用(yong)競爭(zheng)法(fa)ELISA。

試劑和(he)樣(yang)本的控制方(fang)法:

壹(yi)、試劑

1.試劑的選(xuan)擇(ze):國(guo)家明確(que)要求(qiu)要采用(yong)批(pi)批(pi)檢定(ding)的形(xing)式對ELISA試劑嚴(yan)格(ge)把(ba)關(guan),我司嚴格(ge)按(an)照(zhao)國家標準(zhun)進(jin)行(xing)生(sheng)產(chan),已獲得(de)國家承(cheng)認(ren)的“三(san)證(zheng)",每(mei)壹(yi)個產品(pin)都(dou)有對應(ying)的生(sheng)產(chan)批(pi)號,只要客戶提前下單,我們就(jiu)能為您提(ti)供新批(pi)次的產品,不必(bi)擔心(xin)會有過期的試劑。我司的試劑,值(zhi)得(de)您(nin)選(xuan)擇(ze)。

2.試劑的準備:先(xian)將(jiang)試劑盒(he)先(xian)從冰(bing)箱中拿(na)出(chu)來,在室(shi)溫(wen)下放置20-30 min後(hou),再進(jin)行(xing)測(ce)定(ding),使試劑盒(he)在(zai)使用(yong)前與室溫(wen)平(ping)衡,這樣做的目的能使反(fan)應微(wei)孔內(nei)的溫(wen)度較(jiao)快(kuai)地達(da)到所需(xu)的溫(wen)度,以(yi)滿足(zu)後(hou)面的測定需(xu)求(qiu)。

二、樣(yang)本

1.內(nei)源性幹(gan)擾(rao)因(yin)素:包(bao)括(kuo)類因子、補體(ti)、高(gao)濃(nong)度(du)的非特異免(mian)疫(yi)球(qiu)蛋白、異嗜性抗體(ti)、某(mou)些(xie)自(zi)身(shen)抗體(ti)等;

類因子的控制方(fang)法:

①用(yong)F(ab)2替(ti)代(dai)完整(zheng)的IgG;

②標本用聯(lian)有熱(re)變(bian)性IgG的固(gu)相吸(xi)附劑處(chu)理(li);

③檢測抗原時(shi),可用(yong)2-巰(qiu)ji乙醇(chun)加入到標本稀釋(shi)液中使RF降(jiang)解(jie);

補體(ti)的控制方(fang)法:

①用(yong)EDTA稀(xi)釋(shi)標本;

②56℃ 30 min加熱(re)血(xue)清(qing)使C1q滅(mie)活(huo);

2.外(wai)源性幹(gan)擾(rao)因(yin)素:包(bao)括(kuo)標本溶(rong)血、細(xi)菌汙(wu)染、保(bao)存(cun)時(shi)間(jian)過長或(huo)凝(ning)固(gu)不全等;

控(kong)制方(fang)法:采(cai)血(xue)時(shi)規範操(cao)作(zuo),采(cai)集的血液勿(wu)用(yong)力(li)震蕩(dang),以(yi)防溶(rong)血;收(shou)集標本時(shi)采(cai)用無菌(jun)試管,經檢測(ce)後(hou)再低(di)溫(wen)凍存(cun);保(bao)存(cun)時(shi)間(jian)不(bu)宜過久(jiu),檢(jian)測時(shi)盡(jin)量(liang)采用(yong)新鮮(xian)標本;對於(yu)凝固(gu)不全的血標本可適(shi)當加(jia)入抗凝劑,並(bing)放入37℃水(shui)中1 h,待(dai)充(chong)分(fen)凝(ning)固(gu)後(hou)再離心(xin)分(fen)離血(xue)清(qing)。

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