人角化(hua)細胞(bao)內(nei)分(fen)泌因子(zi)(KAF)雙(shuang)調蛋(dan)白(bai)ELISA

人(ren)角化(hua)細胞(bao)內(nei)分(fen)泌因子(zi)(KAF)雙(shuang)調蛋(dan)白(bai)ELISA

檢(jian)測(ce)原理

試(shi)劑(ji)盒采(cai)用(yong)雙(shuang)抗原壹(yi)-步(bu)夾心(xin)法酶(mei)聯(lian)免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)試(shi)驗(yan)(ELISA) 。往(wang)預(yu)先包被病(bing)毒(du)性腹瀉病(bing)毒(du)抗(kang)ti的(de)包(bao)被微孔(kong)中，依次(ci)加(jia)入標(biao)本(ben)、HRP標(biao)記(ji)的檢測(ce)抗原，經過溫育並(bing)徹di洗滌。用(yong)底物TMB顯(xian)色(se)，TMB在過氧(yang)化(hua)物酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍(lan)色(se)，並(bing)在suan的(de)作(zuo)用(yong)下(xia)轉化(hua)成(cheng)最終(zhong)的黃色(se)。用(yong)酶(mei)標(biao)儀在450NM波(bo)長(chang)下(xia)測定吸(xi)光度(OD值(zhi)) ，與(yu)CUTOFF值(zhi)相(xiang)比(bi)較，從(cong)而(er)判定標(biao)本(ben)中(zhong)豬病(bing)毒(du)性腹瀉病(bing)毒(du)(BVDV) 的(de)存(cun)在與否。

樣(yang)品收(shou)集(ji)、處(chu)理及保存(cun)方(fang)法

1.血(xue)清:使(shi)用(yong)不(bu)含熱(re)原和(he)內(nei)毒(du)素(su)的試管(guan)，操作(zuo)過程中(zhong)避免(mian)任(ren)何細胞(bao)刺激(ji)，收(shou)集(ji)血(xue)液後(hou)，3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘將血(xue)清和(he)紅(hong)細胞(bao)迅速小(xiao)心(xin)地(di)分(fen)離(li)。

2.血(xue)漿: EDTA、檸(ning)檬suan鹽(yan)或(huo)肝素抗凝(ning)。3000轉(zhuan)離(li)心(xin)30分(fen)鐘取上(shang)清。

3.細胞(bao)上(shang)清液(ye): 3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘去除(chu)顆(ke)粒(li)和(he)聚(ju)合物。

4.組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang):將組織加(jia)入適量生理鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。3000轉(zhuan) 離(li)心(xin)10分(fen)鐘取上(shang)清。

5.保存(cun):如(ru)果(guo)樣(yang)本(ben)收(shou)集(ji)後不(bu)及時(shi)檢(jian)測(ce)，請按壹(yi)次(ci)用(yong)量分(fen)裝(zhuang)，凍(dong)存於-20°C， 避免(mian)反(fan)

復凍(dong)融，在室溫下(xia)解(jie)凍(dong)並(bing)確保樣(yang)品均勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍(dong)。

自(zi)備(bei)物品

1.酶(mei)標(biao)儀(450NM)

2.高(gao)精(jing)度加(jia)樣器(qi)及槍(qiang)頭(tou): 0.5-10UL、 2-20UL、 20-200UL、 200-1000UL

3.37℃恒(heng)溫箱

操(cao)作(zuo)註意(yi)事項

1.試(shi)劑(ji)盒保存(cun)在2-8°C，使(shi)用(yong)前室溫平衡(heng)20分(fen)鐘。從(cong)冰(bing)箱取出的(de)濃(nong)縮(suo)洗滌液(ye)會(hui)有結晶，這屬(shu)於正常(chang)現象，水浴(yu)加(jia)熱使結晶完quan溶解(jie)後(hou)再(zai)使(shi)用(yong)。

2.實(shi)驗(yan)中(zhong)不(bu)用(yong)的板(ban)條(tiao)應立即放(fang)回(hui)自(zi)封袋中，密封(低(di)溫幹(gan)燥(zao))保存(cun)。

3.預(yu)處(chu)理後的樣本(ben)請(qing)按(an)照操作步(bu)驟用(yong)樣ben稀(xi)釋(shi)ye適(shi)當(dang)稀釋(shi)以達到(dao)試(shi)劑(ji)盒(he)的的最(zui)jia檢(jian)測(ce)效果(guo)。.

4.嚴(yan)格(ge)按(an)照說明(ming)書(shu)中標(biao)明(ming)的(de)時(shi)間(jian)、加(jia)液量及順序(xu)進行(xing)溫育操作。

5.所(suo)有液體組(zu)分(fen)使用(yong)前充(chong)分(fen)搖勻(yun)。

常(chang)用(yong)方(fang)法：

1. 夾心(xin)法：

夾心(xin)法常(chang)用(yong)於檢測大分(fen)子(zi)抗原，壹(yi)般(ban)的操(cao)作步(bu)驟為(wei):

a. 將具有專(zhuan)壹(yi)性的抗(kang)ti固(gu)著（coating）於塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)，完成後(hou)洗去多(duo)余抗(kang)ti

b. 加(jia)入待測檢體，檢(jian)體中(zhong)若(ruo)含有待測的抗原，則其會(hui)與塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)的抗(kang)ti進(jin)行(xing)專(zhuan)壹(yi)性鍵結(jie)

c. 洗去多(duo)余待測檢體，加(jia)入另壹(yi)種(zhong)對抗(kang)原專(zhuan)壹(yi)的(de)壹(yi)次(ci)抗(kang)ti，與(yu)待測抗原進(jin)行(xing)鍵(jian)結

d. 洗去多(duo)余未鍵結壹(yi)次(ci)抗(kang)ti，加(jia)入帶有酶(mei)的(de)二次抗(kang)ti，與(yu)壹(yi)次(ci)抗(kang)ti鍵(jian)結(jie)

e. 洗去多(duo)余未鍵結二次(ci)抗(kang)ti，加(jia)入酶(mei)底(di)物使(shi)酵素(su)呈色(se)，以(yi)肉眼(yan)或(huo)儀器(qi)讀(du)取呈色(se)結(jie)果(guo)

原理：針(zhen)對抗(kang)原分(fen)子(zi)上(shang)2個(ge)不(bu)同(tong)抗原決(jue)定(ding)簇(cu)的單克隆抗(kang)ti分(fen)別作為(wei)固(gu)相(xiang)抗(kang)ti和(he)酶(mei)標(biao)抗(kang)ti，將大分(fen)子(zi)抗原分(fen)別制備(bei)固(gu)相(xiang)抗(kang)原和(he)酶(mei)標(biao)抗原結(jie)合物。

2. 間(jian)接(jie)法

間(jian)接(jie)法常(chang)用(yong)於檢測抗(kang)ti，壹(yi)般(ban)的操(cao)作步(bu)驟為(wei)：

a. 將已(yi)知(zhi)的(de)抗(kang)原固(gu)著於塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)，完成後(hou)洗去多(duo)余的(de)抗原。

b. 加(jia)入待測檢體，檢(jian)體中(zhong)若(ruo)含有待測的壹(yi)次(ci)抗(kang)ti，則其會(hui)與塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)的抗(kang)原進(jin)行(xing)專(zhuan)壹(yi)性鍵結(jie)。

c. 洗去多(duo)余待測檢體，加(jia)入帶有酶(mei)的(de)二次抗(kang)ti，與(yu)待測的壹(yi)次(ci)抗(kang)ti鍵(jian)結(jie)。

d. 洗去多(duo)余未鍵結二次(ci)抗(kang)ti，加(jia)入酶(mei)底(di)物使(shi)酶(mei)呈色(se)，藉(ji)儀(yi)器(qi)（ELISA reader）測(ce)定(ding)塑(su)膠(jiao)盤中的吸(xi)光(guang)值(zhi)（OD值(zhi)），以(yi)評估(gu)有色(se)終(zhong)產物的(de)含(han)量(liang)即可(ke)測量(liang)待測抗(kang)ti的(de)含(han)量。

原理：利用(yong)酶(mei)標(biao)記(ji)的抗抗(kang)ti以(yi)檢(jian)測已(yi)與(yu)固(gu)相(xiang)結(jie)合(he)的(de)受(shou)檢抗(kang)ti。

3. 競(jing)爭(zheng)法(fa)

競(jing)爭(zheng)法(fa)是(shi)壹(yi)種(zhong)較少(shao)用(yong)到(dao)的(de)ELISA檢(jian)測(ce)機制(zhi)，壹(yi)般(ban)用(yong)於檢測小(xiao)分(fen)子(zi)抗原，其(qi)操作步(bu)驟為(wei)：

a. 將具有專(zhuan)壹(yi)性的抗(kang)ti固(gu)著於塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)，完成後(hou)洗去多(duo)余抗(kang)ti

b. 加(jia)入待測檢體，使(shi)檢(jian)體中(zhong)的(de)待測抗原與(yu)塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)的抗(kang)ti進(jin)行(xing)專(zhuan)壹(yi)性鍵結(jie)

c. 加(jia)入帶有酶(mei)的(de)抗原，此(ci)抗原也可與塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)的抗(kang)ti進(jin)行(xing)專(zhuan)壹(yi)性鍵結(jie)，由於塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)固著的抗(kang)ti數(shu)量(liang)有限，因此(ci)當檢(jian)體中(zhong)抗(kang)原的(de)量越多(duo)，則帶有酶(mei)的(de)抗原可(ke)鍵結的固(gu)著抗(kang)ti就(jiu)越(yue)少(shao)，亦(yi)即，兩(liang)種(zhong)抗(kang)原皆(jie)競相(xiang)與(yu)塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤上(shang)抗(kang)ti鍵(jian)結(jie)，即所(suo)謂(wei)競爭(zheng)法(fa)之由來(lai)。

d. 洗去檢(jian)體與(yu)帶有酶(mei)的(de)抗原，加(jia)入酶(mei)底(di)物使(shi)酶(mei)呈色(se)，當(dang)檢(jian)體中(zhong)抗(kang)原量(liang)越多(duo)，代表(biao)塑(su)膠(jiao)孔(kong)盤內(nei)留(liu)下(xia)之帶有酶(mei)的(de)抗原越(yue)少(shao)，顯(xian)色(se)也就越淺(qian)。

e. 當(dang)需(xu)要(yao)偵(zhen)測(ce)無(wu)法(fa)獲得兩(liang)種(zhong)以(yi)上(shang)單壹(yi)性抗(kang)ti的(de)抗(kang)原，或(huo)是不(bu)易得到(dao)足(zu)夠(gou)的(de)純(chun)化(hua)抗(kang)ti以(yi)固(gu)著於孔(kong)盤上(shang)時(shi)，壹(yi)般(ban)會(hui)考慮使(shi)用(yong)競爭(zheng)法(fa)ELISA。

免(mian)責(ze)聲明(ming)：

1. 試劑(ji)盒僅供(gong)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)，不(bu)得用(yong)於臨(lin)床(chuang)實(shi)驗(yan)或(huo)人(ren)體實(shi)驗(yan)，否則所(suo)產生的(de)壹(yi)切後果(guo)，由實(shi)驗(yan)者(zhe)承擔(dan)，本(ben)公(gong)司(si)概不(bu)負責(ze)。

2. 嚴格(ge)按(an)照說明(ming)書(shu)操作，實(shi)驗(yan)者(zhe)違反(fan)說明(ming)書(shu)操作，後(hou)果(guo)由實(shi)驗(yan)者(zhe)承擔(dan)。

公(gong)司(si)其(qi)他產品：

人(ren)β-神(shen)經生長(chang)因子(zi)(β-NGF)elisa試(shi)劑(ji)盒

人(ren)鈣(gai)聯接(jie)蛋(dan)白(bai)(CLGN)elisa試(shi)劑(ji)盒

人(ren)基(ji)質(zhi)蛋(dan)白(bai)Del-1(Del-1)elisa試(shi)劑(ji)盒

人(ren)轉(zhuan)錄(lu)因子(zi)SOX5(SOX5)elisa試(shi)劑(ji)盒

人(ren)抑制素β-B(Inhbb)elisa試(shi)劑(ji)盒

人(ren)6-磷(lin)酸(suan)葡萄糖(tang)脫(tuo)氫(qing)酶(mei)(6PGD)elisa試(shi)劑(ji)盒

人(ren)鈣(gai)粘連蛋(dan)白(bai)(H-Cad)elisa試(shi)劑(ji)盒

人(ren)鎂(mei)離(li)子(zi)轉運(yun)蛋(dan)白(bai)1(MAGT1)elisa試(shi)劑(ji)盒

大鼠(shu)抗(kang)紅(hong)細胞(bao)抗體(RBC)elisa試(shi)劑(ji)盒

大鼠(shu)9型(xing)腺(xian)相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)(AAV9)elisa試(shi)劑(ji)盒

大鼠(shu)硒(xi)蛋(dan)白(bai)P(Se-P)elisa試(shi)劑(ji)盒

大鼠(shu)B-細胞(bao)激(ji)活(huo)因子(zi)受(shou)體(BAFFR)elisa試(shi)劑(ji)盒

大鼠(shu)血(xue)清反(fan)應因子(zi)(SRF)elisa試(shi)劑(ji)盒

大鼠(shu)視紫質(zhi)(RHO)elisa試(shi)劑(ji)盒

大鼠(shu)乳(ru)腺(xian)癌標(biao)誌物-CA153(CA153)elisa試(shi)劑(ji)盒

大鼠(shu)克(ke)拉(la)拉(la)細胞(bao)蛋(dan)白(bai)(CC16)elisa試(shi)劑(ji)盒

大鼠(shu)支鏈(lian)氨(an)基(ji)酸(suan)轉氨(an)酶(mei)(BCAT)elisa試(shi)劑(ji)盒

大鼠(shu)支鏈(lian)α-酮酸脫(tuo)氨(an)酶(mei)(BCKD)elisa試(shi)劑(ji)盒

大鼠(shu)蛋(dan)氨(an)酸(suan)腺苷轉(zhuan)移酶(mei)(MAT)elisa試(shi)劑(ji)盒

 人角化(hua)細胞(bao)內(nei)分(fen)泌因子(zi)(KAF)雙(shuang)調蛋(dan)白(bai)ELISA