| 品(pin)牌 | 其他品(pin)牌 | 貨(huo)號 | RQ-TW29322 |
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| 規(gui)格 | 96T/48T | 供貨周期(qi) | 現(xian)貨 |
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| 主(zhu)要用途(tu) | 科研(yan)試驗(yan) | 品(pin)牌 | 瑞(rui)清 |
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| 檢測(ce)樣本(ben) | 血(xue)清.血漿.組織.相關液(ye)體等 | 產(chan)品(pin)優勢(shi) | 靈敏(min)性高特異性強(qiang) |
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| 售(shou)後(hou) | 專(zhuan)屬服(fu)務 | | |
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我司(si)產(chan)品(pin)齊全(quan)，因(yin)上(shang)架數量有限(xian)，未(wei)能(neng)全(quan)部上(shang)架，如(ru)需(xu)訂(ding)購(gou)或者(zhe)產(chan)品(pin)詳(xiang)情(qing)請直接聯系(xi)我司(si)銷(xiao)售(shou)！
大(da)鼠 腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因(yin)子a（TNF-a）試劑(ji)盒
僅(jin)供體外(wai)研(yan)究(jiu)使(shi)用，不(bu)用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)!
本試劑(ji)盒用於(yu)體外(wai)定(ding)量檢測(ce)血清、血漿、組織勻漿及(ji)相關液(ye)體樣(yang)本(ben)中大(da)鼠 腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因(yin)子a（TNF-a）的含(han)量(liang)。
有效期：6個月(yue)
保存條(tiao)件：2-8℃
[實驗原(yuan)理]
試(shi)劑(ji)盒采(cai)用雙(shuang)抗體壹(yi)步夾心法酶(mei)聯免(mian)疫(yi)吸附試驗(yan)（ELISA）。往(wang)預先(xian)包(bao)被(bei)大(da)鼠 腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因(yin)子a（TNF-a）捕獲(huo)抗(kang)體的(de)包(bao)被(bei)微(wei)孔中，依(yi)次(ci)加(jia)入(ru)標(biao)本(ben)、標準品(pin)、HRP標記(ji)的檢測(ce)抗體，經(jing)過溫育並(bing)徹di洗滌。用底物TMB顯色，TMB在(zai)過氧化物酶(mei)的催(cui)化下轉化成藍色，並(bing)在(zai)酸(suan)的(de)作用下轉化成最終(zhong)的(de)黃(huang)色。顏(yan)色的(de)深(shen)淺(qian)和樣品(pin)中的大(da)鼠 腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因(yin)子a（TNF-a）呈(cheng)正(zheng)相關。用酶(mei)標儀(yi)在(zai)450nm 波長下測定(ding)吸(xi)光度（OD 值），計算(suan)樣(yang)品(pin)濃度。
[樣(yang)本處(chu)理及要求(qiu)]
1. 血(xue)清：將收(shou)集(ji)於(yu)血(xue)清分離管的全(quan)血標(biao)本在(zai)室溫放置(zhi)2小時(shi)或4℃過夜(ye)，然(ran)後(hou)1000×g離心20 分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清即可(ke)，或將上(shang)清置(zhi)於(yu)-20℃或-80℃保(bao)存，但(dan)應避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)。
2. 血(xue)漿：用EDTA或肝(gan)素(su)作(zuo)為(wei)抗凝劑(ji)采(cai)集標(biao)本，並將標(biao)本(ben)在(zai)采(cai)集後(hou)的30分鐘(zhong)內於(yu)2-8℃ 1000×g離心15分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清即可(ke)檢測(ce)，或將上(shang)清置(zhi)於(yu)-20℃或-80℃保(bao)存，但(dan)應避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)。
3. 組(zu)織勻漿：用預冷(leng)的(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘(can)留(liu)血(xue)液(ye)（勻漿中裂解(jie)的紅(hong)細(xi)胞會影響測(ce)量(liang)結(jie)果），稱重(zhong)後(hou)將組(zu)織jian碎。將剪(jian)碎(sui)的(de)組(zu)織與對(dui)應體積(ji)的(de)PBS（壹(yi)般(ban)按1:9的(de)重(zhong)量(liang)體積(ji)比，比如(ru)1g的(de)組織樣品(pin)對(dui)應9mL的(de)PBS，具體體積(ji)可(ke)根(gen)據實驗需(xu)要適當調整，並(bing)做好記(ji)錄。推薦在PBS中加(jia)入(ru)蛋(dan)白酶(mei)抑制(zhi)劑(ji)）加(jia)入(ru)玻璃勻漿器(qi)中，於(yu)冰(bing)上(shang)充(chong)分研(yan)磨。為(wei)了(le)進壹(yi)步裂解(jie)組織細胞，可(ke)以(yi)對(dui)勻漿液(ye)進行(xing)超聲破碎(sui)，或反(fan)復凍(dong)融(rong)。最(zui)後(hou)將勻漿液(ye)於(yu)5000×g離心5~10分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清檢測(ce)。
4. 細胞培(pei)養物上(shang)清或其它生(sheng)物標本(ben)：請1000×g離心20分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清即可(ke)檢測(ce)，或將上(shang)清置(zhi)於(yu)-20℃或-80℃保(bao)存，但(dan)應避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)。
註(zhu)：標本溶(rong)血(xue)會影響最(zui)後(hou)檢測(ce)結果，因(yin)此溶(rong)血(xue)標本不(bu)宜(yi)進(jin)行此項檢測(ce)。
[需(xu)要而未(wei)提供的試劑(ji)和器材(cai)]
1.酶(mei)標儀(yi)（450nm）
2.高(gao)精度(du)加(jia)樣(yang)器(qi)及(ji)槍(qiang)頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒(heng)溫箱
4.蒸餾水(shui)或去(qu)離子水(shui)
[試劑(ji)盒組(zu)成]
備註(zhu)：
1. 標準品(pin)濃度依(yi)次(ci)為(wei)：4000、2000、1000、500、250、125 pg/mL
2. 經(jing)過大(da)量正(zheng)常標(biao)本(ben)檢驗(yan)，標本(ben)的(de)正(zheng)常濃度值均(jun)在(zai)試(shi)劑(ji)盒提供的檢測(ce)範圍(wei)內，實驗過程中直接(jie)取50μL樣本(ben)上(shang)樣即(ji)可(ke)。當(dang)有部(bu)分樣(yang)本(ben)值超過最大(da)標準(zhun)品(pin)濃度時(shi)，可(ke)用樣(yang)本稀釋(shi)ye將標(biao)本(ben)進(jin)行(xing)適當稀釋(shi)後(hou)再進(jin)行實驗。
大(da)鼠 腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因(yin)子a（TNF-a）試劑(ji)盒
[註(zhu)意(yi)事項]
1.嚴(yan)格按(an)照規定的(de)時間和溫度進(jin)行(xing)溫育以(yi)保(bao)證準確結(jie)果。所有試(shi)劑(ji)都必(bi)須在使(shi)用前(qian)達到(dao)室溫20-25℃。使用後(hou)立即冷藏保存試(shi)劑(ji)。
2.洗板不(bu)正(zheng)確(que)可(ke)以(yi)導致不(bu)準(zhun)確(que)的結(jie)果。在加(jia)入(ru)底物前(qian)確保盡(jin)量吸(xi)幹(gan)孔內液(ye)體。溫育過程中不(bu)要讓(rang)微(wei)孔幹(gan)燥掉。
3.消除板底殘(can)留(liu)的(de)液(ye)體和手指(zhi)印(yin)，否(fou)則影響OD值。
4.底物顯色液(ye)應呈(cheng)無色或很淺(qian)的顏(yan)色，已(yi)經(jing)變藍的底物液(ye)不(bu)能(neng)使(shi)用。
5.避(bi)免(mian)試(shi)劑(ji)和標本(ben)的交(jiao)叉(cha)汙染(ran)以(yi)免(mian)造(zao)成錯(cuo)誤結果。
6.在儲(chu)存和溫育時(shi)避(bi)免(mian)強(qiang)光(guang)直(zhi)接(jie)照(zhao)射。
7.平衡至(zhi)室溫後(hou)再打開(kai)密(mi)封(feng)袋以(yi)防(fang)水(shui)滴凝聚在(zai)冷板條(tiao)上(shang)。
8.任(ren)何反(fan)應(ying)試(shi)劑(ji)不(bu)能(neng)接(jie)觸(chu)漂白溶(rong)劑(ji)或漂(piao)白溶(rong)劑(ji)所散(san)發(fa)的強(qiang)烈氣(qi)體。任(ren)何漂(piao)白成分都會破壞(huai)試(shi)劑(ji)盒中反應(ying)試劑(ji)的生(sheng)物活(huo)性。
9.不(bu)能(neng)使(shi)用過期產(chan)品(pin)。
10.如(ru)果可(ke)能(neng)傳播疾病，所有的(de)樣品(pin)都應管理好，按(an)照(zhao)規(gui)定的(de)程序處(chu)理樣品(pin)和檢測(ce)裝置(zhi)。
[試劑(ji)準備(bei)]
試(shi)劑(ji)盒從(cong)冷(leng)藏環境中取出(chu)應在室溫平衡後(hou)方(fang)可(ke)使(shi)用。
20×洗滌緩沖液(ye)的稀釋(shi)：蒸餾水(shui)按1：20稀釋(shi)，即(ji)1份(fen)20×洗滌緩沖液(ye)加(jia)19份(fen)蒸餾水(shui)。
[操作(zuo)步驟]
1. 從(cong)室溫平衡20min後(hou)的鋁箔袋中取出(chu)所需(xu)板條(tiao)，剩(sheng)余(yu)板條(tiao)用自(zi)封(feng)袋密(mi)封(feng)放回4℃。
2. 設置(zhi)標準(zhun)品(pin)孔和樣本(ben)孔，標(biao)準品(pin)孔各加(jia)不(bu)同(tong)濃度的(de)標準(zhun)品(pin)50μL；
3. 樣本(ben)孔中加(jia)入(ru)待(dai)測(ce)樣本50μL；空(kong)白孔不(bu)加(jia)。
4. 除空白孔外(wai)，標(biao)準品(pin)孔和樣本(ben)孔中每孔加(jia)入(ru)辣(la)根(gen)過氧化物酶(mei)（HRP）標記(ji)的(de)檢測(ce)抗體100μL，用封(feng)板膜(mo)封(feng)住(zhu)反應(ying)孔，37℃水(shui)浴(yu)鍋(guo)或恒(heng)溫箱溫育60min。
5. 棄去液(ye)體，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍幹(gan)，每孔加(jia)滿洗滌液(ye)（350μL），靜置(zhi)1min，甩去(qu)洗滌液(ye)，吸水(shui)紙(zhi)上(shang)拍幹(gan)，如(ru)此重(zhong)復洗板5次(ci)（也可(ke)用洗板機洗板）。
6. 每(mei)孔加(jia)入(ru)底物A、B各50μL，37℃避(bi)光(guang)孵育15min。
7. 每(mei)孔加(jia)入(ru)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μL，15min內，在(zai)450nm波長處(chu)測定各孔的(de)OD值。
[實驗結(jie)果計算(suan)]
大(da)鼠 腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因(yin)子a（TNF-a）試劑(ji)盒以(yi)所測(ce)標(biao)準品(pin)的OD值為(wei)橫(heng)坐(zuo)標，標(biao)準(zhun)品(pin)的濃度值為(wei)縱(zong)坐(zuo)標，在(zai)坐(zuo)標紙(zhi)上(shang)或用相關軟件(jian)繪制(zhi)標準(zhun)曲(qu)線，並得到(dao)直線回歸方(fang)程，將樣(yang)品(pin)的OD值代入(ru)方(fang)程，計(ji)算出(chu)樣品(pin)的濃度。
[試(shi)劑(ji)盒性能]
1. 檢測(ce)範圍(wei)：125 pg/mL – 4000 pg/mL。
2. 靈敏(min)度(du)：最(zui)di檢測(ce)濃度小(xiao)於(yu)10 pg/mL。
3. 特異性：不(bu)與(yu)其它可(ke)溶(rong)性結構(gou)類(lei)似物交叉(cha)反應(ying)。
4. 重(zhong)復性：板內變異系(xi)數小於(yu)10% ，板間(jian)變異系(xi)數小於(yu)15% 。
[說(shuo)明]
1.由於(yu)現(xian)有條(tiao)件及科(ke)學(xue)技術(shu)水(shui)平尚不(bu)能(neng)對(dui)所有供貨商(shang)提供的所有原(yuan)料進(jin)行(xing)全(quan)面的(de)鑒(jian)定與(yu)分析(xi)，本(ben)產(chan)品(pin)可(ke)能(neng)存在(zai)壹(yi)定(ding)的質量技術風(feng)險。
2.最(zui)終(zhong)的(de)實驗結(jie)果與試(shi)劑(ji)的有效性、實驗者(zhe)的(de)相關操作(zuo)以(yi)及(ji)當時的實驗環(huan)境密(mi)切(qie)相關，請務必(bi)準備(bei)充(chong)足(zu)的(de)標(biao)本備份(fen)。
3.不(bu)同(tong)批(pi)次(ci)的同(tong)壹(yi)產(chan)品(pin)可(ke)能(neng)會有少許差別，如(ru)：檢測(ce)限、靈(ling)敏(min)度(du)以(yi)及(ji)顯色時(shi)間(jian)等，請依(yi)據試(shi)劑(ji)盒內說(shuo)明書進行(xing)實驗操(cao)作(zuo)，網站(zhan)電子版說(shuo)明書僅(jin)作(zuo)參(can)考(kao)。
4.只(zhi)有全(quan)部使(shi)用本(ben)試劑(ji)盒配(pei)套(tao)試劑(ji)才能(neng)保(bao)證(zheng)檢測(ce)效果，不(bu)能(neng)混用其他制(zhi)造商(shang)的(de)產(chan)品(pin)。只有嚴(yan)格遵守(shou)本試(shi)劑(ji)盒的(de)實驗說(shuo)明才會得到(dao)最佳(jia)的檢測(ce)結果。
5.本公(gong)司(si)只對(dui)試劑(ji)盒本(ben)身負(fu)責，不(bu)對(dui)因(yin)使用該(gai)試劑(ji)盒所造(zao)成的樣本(ben)消耗(hao)負(fu)責，請使用者(zhe)使用前(qian)充(chong)分考(kao)慮到(dao)樣本(ben)的可(ke)能(neng)使用量(liang)，預留(liu)充(chong)足(zu)的(de)樣(yang)本。
6.使用化學(xue)裂解(jie)液(ye)制(zhi)備的(de)組(zu)織勻漿或細(xi)胞提取液(ye)可(ke)能(neng)會由(you)於(yu)某(mou)些(xie)化學(xue)物質的引入導致ELISA實驗結(jie)果偏差。
7.若樣(yang)本為(wei)細胞培(pei)養上(shang)清，因(yin)該類樣(yang)本(ben)幹(gan)擾因(yin)素(su)較(jiao)多，如(ru)：細(xi)胞狀態、細胞數量、采(cai)樣時(shi)間等，所以(yi)可(ke)能(neng)存在(zai)檢測(ce)不(bu)出(chu)的情(qing)況(kuang)。
8.某(mou)些(xie)天然(ran)蛋(dan)白或重(zhong)組(zu)蛋白，包(bao)括原(yuan)核及(ji)真(zhen)核重(zhong)組(zu)蛋白，可(ke)能(neng)因(yin)為(wei)與本(ben)產(chan)品(pin)所使(shi)用的(de)檢測(ce)抗體及(ji)捕獲(huo)抗(kang)體不(bu)匹(pi)配(pei)，而不(bu)被(bei)檢測(ce)出(chu)。
關鍵詞(ci)：
2023-09-06 
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